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沉默GRHL2基因表达对结直肠癌细胞增殖及细胞周期的影响
目的:研究粒状头样2(grainyhead like 2,GRHL2)基因在结直肠癌组织和细胞中的表达情况,以及沉默GRHL2基因表达对结直肠癌细胞增殖和细胞周期的影响.方法:采用实时荧光定量PCR法检测人结直肠癌和癌旁组织以及结直肠癌HT29、SW480、SW1116、SW620、HCT116、Caco2和LoVo细胞中GRHL2 mRNA的表达水平.采用慢病毒感染的方法将携带有GRHL2-shRNA的重组慢病毒转入HT29和HCT116细胞;随后,分别采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测细胞的增殖能力,FCM法检测细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyclin A、cyclin D1、p21和p27的表达水平.建立结直肠癌HT29和HCT116细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默G RHL2基因表达对结直肠癌细胞皮下移植瘤生长的影响.结果:GRHL2mRNA在结直肠癌组织中的表达水平显著升高,其mRNA的平均表达水平是癌旁正常组织的2.8倍(P＜0.001),结直肠癌HT29、SW480、HCT116、Caco2和LoVo细胞中GRHL2 mRNA的表达水平均较高.转入GRHL2-shRNA后,HT29和HCT116细胞中GRHL2 mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P值均＜ 0.001).沉默GRHL2基因能明显抑制结直肠癌HT29和HCT116细胞的增殖能力(P值均＜0.05),导致细胞阻滞在G1期(P值均＜ 0.01);细胞周期相关蛋白cyclin A和cyclin D1的表达水平明显下调(P＜0.05和P＜0.01),p21和p27的表达水平则明显增加(P＜0.01和P＜0.05).体内实验结果提示,沉默GRHL2基因表达能够显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长.结论:GRHL2基因可以通过调控细胞周期相关蛋白的表达而促进结肠癌细胞的增殖.
