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沉默PDCD4基因对食管癌细胞生物学特性的影响
目的 探讨沉默PDCD4基因对食管癌细胞生物学特性的影响.方法 选取27例食管癌患者的癌组织和对应的癌旁组织,采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测PDCD4表达水平,对患者5年生存率进行调查分析,并分析PDCD4表达与食管癌临床病理学特征的相关性.采用Western blot法检测食管癌细胞的PDCD4蛋白表达.利用siRNA特异沉默PDCD4基因表达.将si-PDCD4或si-NC转染到食管癌细胞TE-1中,转染稳定后,在0、24、48和72 h利用MTT法检测细胞增殖能力.用结晶紫染色法检测转染细胞克隆形成能力,用细胞划痕实验(Wounding heal)检测转染细胞迁移能力.结果 PDCD4在癌组织及癌细胞中显著低表达,PDCD4相对高表达的患者生存率高于低表达PDCD4的患者.沉默PDCD4基因能够增强食管癌细胞的增殖、克隆形成和迁移能力.结论 沉默PDCD4基因促进了食管癌细胞的增殖与迁移.
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miRNA-21-5p通过pdcd4靶向调控胃癌细胞对顺铂敏感性的机制研究
目的:探究微小RNA-21-5p(miRNA-21-5p)通过下调pdcd4基因表达调控胃癌耐药细胞系SGC-7901/DDP对顺铂敏感性机制的研究.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的顺铂(0、1、2、4、8、16、32μmol/L)对胃癌细胞系SGC7901及胃癌耐药细胞系SGC7901/DDP增殖抑制的影响.通过实时荧光定量PCR检测SGC7901/DDP细胞中瞬时转染miRNA-21-5p inhibitors后miRNA-21-5p相对表达量的变化.采用Western blot及实时荧光定量PCR检测转染组、无关序列转染组(NC组)及空白转染组(CON组)分别转染miRNA-21-5p inhibitors及无关序列后对靶基因pdcd4蛋白及mRNA表达量的影响.结果:MTT实验结果显示耐药细胞SGC7901/DDP相对于亲本细胞SGC7901对顺铂不敏感(P＜0.05).实时荧光定量PCR结果表明,转染组miRNA-21-5p表达量均明显低于NC组和CON组(P＜0.01),转染组pdcd4 mRNA表达量均明显高于NC组和CON组(P＜0.01).Western blot检测结果示,转染组pdcd4蛋白表达量均明显高于NC组和CON组(P＜0.01).结论:miRNA-21-5p表达水平的升高在一定程度上有利于胃癌细胞增殖,并通过下调pdcd4的表达,降低胃癌细胞对顺铂的敏感性.
关键词： 胃肿瘤 miRNA-21-5p 顺铂 敏感性 PDCD4基因 -
PDCD4基因对T淋巴细胞亚群分化的影响
目的 探讨PDCD4基因对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响.方法 采用流式细胞术检测PDCD4基因缺失小鼠脾细胞和淋巴结细胞中的CD8+T和CI4+T,及其亚群Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)的特异性标记分子,并分析各细胞亚群的比例变化.结果 pdcd4-/-小鼠脾脏和淋巴结中CD8+T细胞数量较野生型C57BL/6小鼠有所下降(P＜0.05),CD4+T细胞及Th1细胞也呈下降趋势,差异无统计学意义(P＞0.05)；而PDCD4基因缺失后Th2和Th17的分化比例无显著变化(P＞0.05)；进一步分析CD4+T细胞群体中CD25+Foxp3+ Treg的表达,发现pdcd4 -/-小鼠CD25+ Foxp3+ Treg比例明显上调(P＜0.05).结论 PDCD4基因能够影响部分T淋巴细胞亚群的分化,PDCD4基因敲除小鼠中CD8+T细胞数量下降和CD25+ Foxp3+ Treg比例升高,提示PDCI4基因有可能在免疫调节方面起到一定作用.而PDCD4基因对于CD4+T以及Th1、Th2和Th17的分化并无明显作用.
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PDCD4转染卵巢癌细胞系基因表达谱的变化
目的 探讨卵巢癌细胞系SKOV3稳定表达程序性细胞死亡4(PDCD4)基因后基因表达谱的变化.方法 将pDsRed2-N1-PDCD4真核表达载体和pDsRed2-N1空载体分别转染至SKOV3并获得稳定细胞系,应用基因芯片技术分析PDCD4基因转染后基因表达的变化,RT-PCR检测基因的表达以验证芯片结果.结果 PDCD4转染SKOV3后引起大量基因表达的变化,表达明显差异基因共有467个,其中上调255个,下调212个;RT-PCR验证选取的5个基因的表达差异和芯片显示的结果一致.结论 成功筛选出PDCD4基因转染卵巢癌细胞系SKOV3后的差异表达基因,为进一步研究PDCD4的抑癌作用机制提供了实验依据.
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抑癌基因Pdcd4在肾透明细胞癌中的表达及生物学意义
目的研究Pdcd4 mRNA及蛋白在肾透明细胞癌中的表达及探讨其与肾肿瘤分期分级的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（半定量RT-PCR）及免疫组织化学方法同时检测肾脏透明细胞癌及癌旁正常组织Pdcd4 mRNA及蛋白的表达情况。结果 Pdcd4 mRNA在肾癌及癌旁正常组织中均有表达,透明细胞癌中的表达低于癌旁正常组织。肾透明细胞癌Pdcd4蛋白表达阳性率为37.5%（15/40）,显著低于癌旁正常肾脏组织阳性表达率90%（18/20）,G1~G2期Pdcd4蛋白表达阳性率为56.5%（13/23）高于G3~G4期Pdcd4蛋白表达阳性率为11.7%（2/17）,两者差异有显著性（P〈0.05）。结论 Pdcd4基因在肾透明细胞癌中呈低表达,与肾癌的发生及恶性分化程度相关,作为抑癌基因,Pdcd4蛋白表达可作为判定肾透明细胞癌生物学行为的客观指标。
关键词： PDCD4基因 逆转录-聚合酶链反应 肾透明细胞癌 免疫组织化学 -
PDCD4在 Hela 细胞中过表达致抗凋亡蛋白 Bcl －2表达下调机制探讨
目的：探讨程序性细胞死亡因子4（PDCD4）的抑癌机制。方法：以含有全长 PDCD4的 cDNA 为模板，扩增 PDCD4全长基因，融合 PDCD4－GFP 融合基因真核表达载体，将其转染 Hela 细胞，采用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达，以荧光定量 PCR 和 Western －blot 检测 PDCD4在细胞内的表达以及抗凋亡基因 Bcl －2的表达情况。结果：经酶切图谱分析、PCR 扩增及 DNA 测序证实融合基因真核表达载体构建正确；荧光显微镜可观察到细胞内 PDCD4－GFP 融合蛋白的表达；RT －PCR 证实经 PDCD4基因转染的细胞内 PDCD4 mRNA 表达增高。PDCD4的过表达能够导致 Bcl －2基因表达下调。结论：PDCD4基因表达于宫颈癌细胞核和胞浆内，并且 PDCD4能够抑制 Bcl －2基因的表达水平。
