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miR-346及分泌型卷曲相关蛋白4在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的作用
目的 检测结肠癌组织及细胞中miR-346及人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)的表达,观察其对结肠癌细胞增殖的作用及可能的机制.方法 选取30例经手术切除的结肠癌组织及其相应的癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5 cm),另选取结肠癌细胞株及正常结肠上皮细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法检测组织及细胞中的miR-346、SFRP4 mRNA及蛋白的表达,采用Pearson rank检验miR-346与SFRP4的相关性,采用Target Scan及Find Tar软件预测两者的靶向调节作用.转染miR-346拟似物(mimics)或抑制物(inhibitor)以上调或下调miR-346的表达,MTT法检测结肠癌细胞的增殖,qRT-PCR及Western blot检测SFRP4 mRNA和蛋白的表达.结果 miR-346在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(t=12.871,P<0.001).SFRP4 mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达低于癌旁正常组织(t=8.609,P<0.001;t=20.892,P<0.001).miR-346在结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT116、CaCo-2、LoVo、HT29)中的表达高于正常结肠上皮细胞株FHC(F=10.17,P<0.001).SFRP4 mRNA及蛋白在结肠癌细胞株中的表达低于正常结肠上皮细胞株(F=39.01,P<0.001;F=16.25,P<0.001).结肠癌组织中miR-346与SFRP4 mRNA的表达呈负相关(r=-0.55,95％CI:-0.757～-0.230,P=0.0018).与miRNA阴性对照(miR-NC)组比较,给予miR-346 mimics后,MTT显示在72 h、96 h时间点miR-346组细胞存活率升高(t=3.484,P<0.05;t=5.868,P<0.001),SFRP4 mRNA及蛋白表达下降(t=2.267,P<0.05;t=5.889,P<0.01);给予miR-346 inhibitor后,MTT显示在72 h、96 h时间点miR-346组细胞存活率下降(t=4.400,P<0.001;t=3.591,P<0.001),SFRP4 mRNA及蛋白表达升高(t=4.495,P<0.01;t=7.130,P<0.01).结论 miR-346在结肠癌中高表达,SFRP4低表达,miR-346通过靶向作用于SFRP4来调控结肠癌细胞的增殖.
