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miR-346/DKK3信号轴在结肠癌中的细胞增殖的调控
目的 研究miR-346/DKK3信号轴在结肠癌中的调控作用和机制.方法 RT-PCR实验检测miR-346在正常结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的表达水平,随后检测其在结肠癌组织和对应的癌旁组织中的表达水平.MTT实验检测miR-346对结肠癌细胞增殖能力的影响.流式细胞周期检测miR-346对结肠癌细胞周期的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-346和DKK3之间的结合关系.利用siRNA和pcDNA-DKK3转染结肠癌细胞研究DKK3对结肠癌细胞功能的影响.结果 miR-346在结肠癌细胞中的表达水平显著上调.过表达miR-346后,结肠癌细胞的增殖能力变强,G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例增加.双荧光素酶报告基因实验显示miR-346能够和DKK3直接结合.转染siRNA抑制DKK3的表达后,结肠癌细胞增殖能力变强,G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例增加.过表达DKK3后,能够部分抵消miR-346对结肠癌细胞的促增殖作用.结论 miR-346通过靶向结合并抑制DKK3进而促进结肠癌细胞的增殖.
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miR-346及L1细胞黏附因子在结肠癌组织中的表达及与临床病理特征的关系
目的 探讨miR-346及L1细胞黏附因子(L1 CAM)在结肠癌组织中的表达及与临床病理特征的关系.方法 选取2016年5月至2017年5月中国医科大学肿瘤医院病理标本库保存的手术切除结肠癌手术标本68例,包括结肠癌组织、癌旁组织及正常结肠组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应及免疫组织化学法检测组织中miR-346、L1CAM信使RNA (mRNA)的表达及L1 CAM蛋白表达,观察miR-346及L1CAM mRNA与肿瘤部位、直径、分化程度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理参数的关系,分析miR-346与L1 CAM的相关性.结果 结肠癌组织miR-346表达高于癌旁组织及正常结肠组织(1.272±0.501比0.621±0.168、0.201±0.078)(P＜0.01),癌旁组织与正常结肠组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).结肠癌组织L1CAM mRNA表达高于癌旁组织及正常结肠组织(1.035±0.592比0.452±0.122、0.246±0.085)(P＜0.01),癌旁组织与正常结肠组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).L1 CAM蛋白表达于结肠癌细胞膜,在癌旁组织及正常结肠组织中无表达.结肠癌组织中miR-346与L1CAM mRNA表达量呈正相关(r=0.864,P＜0.05).结肠癌组织中miR-346及L1 CAM蛋白在肿瘤浸润T3～T4、远处转移M1、淋巴结转移阳性、血管浸润阳性、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期及肿瘤分化程度低分化中表达更高(均P＜0.05).结论 miR-346及L1CAM mRNA在结肠癌组织中高表达,可能共同调控结肠癌侵袭及转移.
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miR-346在结肠癌细胞中的表达及功能研究
目的 检测结肠癌细胞中miR-346表达及侵袭转移的关系,为结肠癌预测及治疗靶点提供试验依据.方法 采用qRT-PCR法(quantificational real-time polymerase chain reaction)检测结肠癌细胞株(HCT116、COLO205、SW620)及正常结肠上皮细胞(NCM460)中 miR-346 的表达.采用miR-346拟似剂( mimic)或抑制剂( inhibitor)对miR-346表达进行上调或下调并转染HCT116细胞, qRT-PCR检测转染效率,Transwell观察转染后HCT116细胞转移及浸润行为变化.结果 miR-346在结肠癌细胞株HCT116、COLO205、SW620中相对表达量分别为0. 372±0. 068、1. 284±0. 253、1. 105 ±0. 203,在正常结肠上皮细胞( NCM460)中相对表达量为 0. 126 ± 0. 004,差异有统计学意义( F 值＝4. 563,P＜0. 05),与HCT116组比较,COLO205组及SW620组差异有统计学意义(t值分别为7. 256、5. 419,P均＜0. 01).与 NCM460 组比较,COLO205 组及 SW620 组差异有统计学意义(t 值分别为9. 652、7. 753,P均＜0. 01). miR-346 表达上调后 HCT116 细胞侵袭及转移能力增强( t 值分别为2. 458、2. 194,P 均＜0. 05),miR-346 表达下调后 HCT116 细胞侵袭及转移能力减弱(t 值分别为2. 247、2. 065,P均＜0. 05).结论 miR-346在结肠癌细胞中表达高,调控结肠癌细胞侵袭及转移.
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microRNA-346对脂肪源性间充质干细胞成骨分化的影响
目的:探讨microRNA-346(miR-346)对脂肪源性间充质干细胞(hADSCs)成骨分化的影响.方法:离体培养大鼠脂肪源性间充质干细胞,通过转染过表达或者抑制miR-346,qRT-PCR检测各组成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Osterix mRNA的表达.结果:miR-346在hADSCs的表达随着成骨诱导时间延长逐渐升高(P<0.05).转染miR-346 mimics后的hADSCs内成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA的表达显著升高.相反,细胞转染miR-346 inhibitors后,其成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:miR-346通过正向调控hADSCs细胞内成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix表达进而影响hADSCs细胞的成骨分化进程.
关键词： 脂肪源性间充质干细胞 成骨分化 miR-346 -
miR-346在鼻咽癌中的表达及生物学功能
目的:探讨miR-346在鼻咽癌中的表达及在鼻咽癌中的生物学功能.方法:收集63例鼻咽癌组织以及34例鼻咽部非癌组织标本,Real-time PCR检测组织和6株人鼻咽癌细胞系及1株人正常鼻咽部永生化上皮细胞株NP69中miR-346表达量,选取人鼻咽癌细胞系中表达量居中的两种细胞系,并转染miR-346 inhibitor,设置对照组(NC组)并转染阴性对照质粒,Real-time PCR检测两种细胞系转染miR-346 inhibitor和对照组miR-346表达量,细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELlSA和流式细胞术检测,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭.结果:与鼻咽非癌组织比较,鼻咽癌组织中miR-346表达量显著升高(P=0.000);以正常人鼻咽部上皮细胞NP69比较,各鼻咽癌细胞株中miR-346相对表达量均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).选择6种鼻咽癌细胞株中miR-346表达量居中的两种,分别为CNE-1和CNE-2,转染miR-346 inhibitor后,两种鼻咽癌细胞株miR-346相对表达量均显著降低,与NC组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).两种鼻咽癌细胞转染miR-346inhibitor下调miR-346表达后鼻咽癌细胞的增殖受到抑制,均在转染第3天差异具有统计学意义(P＜0.05).下调miR-346表达后鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2的凋亡显著增加,迁移细胞数和侵袭细胞数显著降低,与NC组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-346在鼻咽癌中高表达,下调miR-346表达会抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,miR-346可能作为一种癌基因在鼻咽癌的发生和发展中发挥重要的作用.
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miR-346及分泌型卷曲相关蛋白4在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的作用
目的 检测结肠癌组织及细胞中miR-346及人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)的表达,观察其对结肠癌细胞增殖的作用及可能的机制.方法 选取30例经手术切除的结肠癌组织及其相应的癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5 cm),另选取结肠癌细胞株及正常结肠上皮细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法检测组织及细胞中的miR-346、SFRP4 mRNA及蛋白的表达,采用Pearson rank检验miR-346与SFRP4的相关性,采用Target Scan及Find Tar软件预测两者的靶向调节作用.转染miR-346拟似物(mimics)或抑制物(inhibitor)以上调或下调miR-346的表达,MTT法检测结肠癌细胞的增殖,qRT-PCR及Western blot检测SFRP4 mRNA和蛋白的表达.结果 miR-346在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(t=12.871,P<0.001).SFRP4 mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达低于癌旁正常组织(t=8.609,P<0.001;t=20.892,P<0.001).miR-346在结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT116、CaCo-2、LoVo、HT29)中的表达高于正常结肠上皮细胞株FHC(F=10.17,P<0.001).SFRP4 mRNA及蛋白在结肠癌细胞株中的表达低于正常结肠上皮细胞株(F=39.01,P<0.001;F=16.25,P<0.001).结肠癌组织中miR-346与SFRP4 mRNA的表达呈负相关(r=-0.55,95％CI:-0.757～-0.230,P=0.0018).与miRNA阴性对照(miR-NC)组比较,给予miR-346 mimics后,MTT显示在72 h、96 h时间点miR-346组细胞存活率升高(t=3.484,P<0.05;t=5.868,P<0.001),SFRP4 mRNA及蛋白表达下降(t=2.267,P<0.05;t=5.889,P<0.01);给予miR-346 inhibitor后,MTT显示在72 h、96 h时间点miR-346组细胞存活率下降(t=4.400,P<0.001;t=3.591,P<0.001),SFRP4 mRNA及蛋白表达升高(t=4.495,P<0.01;t=7.130,P<0.01).结论 miR-346在结肠癌中高表达,SFRP4低表达,miR-346通过靶向作用于SFRP4来调控结肠癌细胞的增殖.
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miR-346在糖尿病肾病TGF-β介导的Smad信号通路中的作用
目的:观察miR-346在高糖环境下小鼠肾小球系膜细胞TGF-β介导Smad信号通路中的作用,探讨miR-346参与糖尿病肾病(DN)的发病机制.方法:体外高糖(25 mmol/L)下培养小鼠肾小球系膜细胞(MC),pGenesil-miR-346和重组TGF-β药物作为干预因素,分别设TGF-β药物刺激组(10、30 ng/mL)、TGF-β药物刺激+shRNA P53干扰组、阴性对照组.细胞免疫荧光检测细胞表型;Western法检测P53蛋白和Smad3/4蛋白的表达;实时荧光定量RT-PCR法检测mRNA表达.结果:(1)miR-346的表达可由P53通过调节miR-346基因中启动子来调节;(2)miR-346可调节Smad3/4的表达,其过程是TGF-β通过P53、miR-346通路从上游来调节的.结论:miR-346通过TGF-β/Smad信号通路调控糖尿病肾病相关基因表达,二者形成正反馈效应,在DN的发生和发展中起到非常重要的作用.
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不同病理类型及分期甲状腺癌中miR-221miR-222miR-197和miR-346的表达研究
目的 探讨不同病理类型及分期甲状腺癌中miR-221、miR-222、miR-197和miR-346的表达水平,为临床手术方式选择及术后治疗提供参考.方法 选取2013年6月～2017年8月行甲状腺手术的40例甲状腺癌(乳头状癌、滤泡癌各20例)及癌旁正常甲状腺组织、20例良性甲状腺疾病组织,术中取材后,立即放入液氮中保存后转入-70℃保存.采用定量RT-PCR检测miR-221、miR-222、miR-197和miR-346在相应组织标本中的表达水平.结果 对甲状腺癌,miR-221与miR-222的表达与患者的年龄、性别、大肿瘤灶等无明显相关性(P＞0.05),与TNM分期及淋巴转移情况相关(P＜0.05);miR-197和miR-346的表达在20例甲状腺滤泡癌中均有明显升高(P＜0.05),乳头状癌组织中未见显著变化(P＞0.05).miR-221与miR-222在良性甲状腺疾病组织表达量变化均不明显(P＞0.05);但在甲状腺癌组织中的表达变化显著,差异均有统计学意义(P＜0.05);对miR-197和miR-346在相应组织标本中的表达水平进行比较结果显示,良性甲状腺疾病组织中miR-197和miR-346表达没有明显变化(P＞0.05);在20例滤泡癌组织中明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);在乳头状癌组织及癌旁正常组织中的均无明显变化(P＞0.05).结论 不同病理类型及分期甲状腺癌中miRNA的表达可作为甲状腺癌早期诊断、淋巴结转移、复发及远处转移密切相关的预警分子,为甲状腺癌手术方式选择及术后指导治疗提供了重要依据.
