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TLR-2信号途径对新生儿免疫系统在淋巴细胞增殖和调节性T细胞扩增方面的影响
目的 探讨TLR-2(Toll like receptor-2)信号途径对新生儿免疫系统在淋巴细胞增殖和调节性T细胞(Treg)扩增方面的影响及其与成人免疫系统的差别.方法 应用TLR-2的配体-肽聚糖(PPG)和有丝分裂原-植物凝血素(PHA)刺激胎儿脐带血单核淋巴细胞(CBMC)和成人外周血单核淋巴细胞(PBMC),然后采用3H胸腺嘧啶掺入法测淋巴细胞增殖情况及流式细胞技术检测活化T细胞,Treg细胞扩增情况.结果 PPG和PHA刺激后,CBMC淋巴细胞总体明显增殖(P＜0.05),但PPG的刺激不能使活化T细胞和Treg 细胞比例增加(P＞0.05).PPG和PHA 刺激后,PBMC 淋巴细胞总体明显增殖(P＜0.05),且活化T细胞和Treg 细胞比例均增加(P＜0.05).此外,PPG诱导的CBMC淋巴细胞增殖强度弱于PBMC(P＜0.05).结论 TLR-2信号途径可以诱导新生儿淋巴细胞增殖但活化T细胞和Treg细胞比例不增加,与成人免疫系统的TLR-2信号途径存在差别.
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结核分枝杆菌P19对巨噬细胞TLR-2表达及分布的影响
目的 探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响.方法 以10 μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO_2孵箱孵育6 h.免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列.结果 ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面.P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布.结论 Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集.
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KLF4调控的TLR-2/p38 MAPK/NF-κB信号通路在脊柱结核发病机制中的实验研究
[目的]探讨KLF4调控的TLR-2/p38MAPK/NF-κB信号通路在脊柱结核发病机制中的作用.[方法]实验组为经手术及病理证实的8例脊柱结核患者,对照组为5例健康人群.收集并对比分析A、B两组的临床表现、血常规、ESR、C-RP.采集外周静脉血10 ml,提取总RNA,利用表达谱基因芯片检测A、B两组外周血白细胞差异表达的mRNA基因,筛选出在脊柱结核患者中高表达的KLF4基因.初步验证采用以下三种方法:应用RT-PCR检测外周血中KLF4、TLR-2、p38、NF-κB基因在mRNA水平的表达;应用ELISA法对IFN-r、TNF-α、IL-1进行检测;应用Western Blot法检测外周血白细胞中KLF4、TLR-2、磷酸化p38 (p-p38)、p38、NF-κB蛋白的表达.[结果]临床结果显示,相对于正常对照组,脊柱结核组ESR、CRP、中性粒细胞相对值升高,淋巴细胞绝对值、淋巴细胞相对值及血红蛋白值降低.芯片结果提示脊柱结核患者与正常对照组之间显著差异表达基因共68条,上调基因16条,下调基因52条,其中KLF4基因在脊柱结核患者外周血中差异表达为显著,升高2.89倍.RT-PCR结果显示脊柱结核患者较正常对照组外周血KLF4、TLR-2、p38、NF-κB基因在mRNA水平均高表达,IFN-y、TNF-α、IL-1表达亦升高,同时KLF4、TLR-2、p-p38、NF-κB蛋白表达水平增加,但p38蛋白水平无明显变化.[结论]病灶活动期脊柱结核患者外周血KLF4基因表达升高可能通过TLR-2/p38 MAPK/NF-κB途径参与脊柱结核炎症反应.
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TLR-2和NF-κB在早产孕妇胎盘组织中的表达及与早产的关系
目的 探讨早产孕妇胎盘组织中TLR-2和NF-κB的表达及其与早产的关系.方法 选取我院妇产科2015年10月～2016年10月自发性早产孕妇20例(观察组),同期正常妊娠孕妇20例(对照组).免疫组化及RT-PCR法检测分娩后胎盘组织中TLR-2、NF-κB的表达水平.结果 观察组TLR-2和NF-κB在胎盘组织中的阳性表达率分别为85％和83％,均高于对照组(13％和14％)(P＜0.05);观察组胎盘组织中TLR-2RNA的表达水平为(1.65±0.15),高于对照组(0.98±0.18)(P＜0.05).观察组NF-κBmRNA的表达水平为(1.67±0.16),高于对照组(1.01±0.15)(P＜0.05).结论 炎症的过早激活可能是导致早产发生的原因之一.
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地塞米松对 F．monophora 感染巨噬细胞模式识别受体及炎症因子表达的影响
目的：探讨F．monophora体外感染模型中地塞米松（ DEX）对模式识别受体及免疫炎症因子表达的影响。方法：实验分为四组：F．monophora与加入 DEX的巨噬细胞共培养组、F．monophora与巨噬细胞共培养组、单纯加入DEX的巨噬细胞组及巨噬细胞空白对照组。定量PCR检测各组中模式识别受体Dectin-1、TLR-2、TLR-4的表达；ELISA法测定培养上清中TNF-α的表达量。结果：F．monophora与巨噬细胞共培养组相对于空白对照组及单纯加入 DEX 组的 Dectin-1表达显著升高，在加入 DEX 后Dectin-1表达明显受到抑制（t ＝121900， P ＜0．05）；加入 DEX 的共培养组中 TLR-2表达增加，但与F．monophora和巨噬细胞共培养组相比，差异无统计学意义（ t＝3022， P＞0.05）；F．monophora感染引起TLR-4显著下调，加入DEX对TLR-4表达无影响（t＝2021，P＞0.05）。相对于F．monophora与巨噬细胞共培养组，DEX共培养组中巨噬细胞分泌TNF-α的量显著下调（t＝1514000， P＜0.05）。结论：DEX可抑制巨噬细胞Dectin-1的表达，并下调 TNF-α的表达量，进而使机体处于免疫耐受状态，但对TLR-2、TLR-4表达无明显影响。
关键词： 地塞米松 F.monophora 模式识别受体 Dectin-1 TLR-2 -
马拉色菌对角质形成细胞表达TLR-2和分泌sICAM-1及IL-8的影响
目的 探讨马拉色菌在直接免疫应答中诱导角质形成细胞表达TLR-2的作用及对sICAM-1和IL-8分泌和表达的影响.方法 马拉色菌和角质形成细胞体外共培养,通过免疫细胞化学方法检测角质形成细胞TLR-2蛋白的表达状况,并运用ELISA方法检测马拉色菌对角质形成细胞sICAM-1和IL-8表达和分泌的调节作用.结果 体外实验发现,在二者共同培养时,马拉色菌能增强角质形成细胞TLR-2的表达,且角质形成细胞sICAM-1和IL-8均表达和分泌也增加.结论 马拉色菌可诱导TLR-2的增强表达,并能促进sICAM-1和IL-8的表达和分泌,这一机制可能在痤疮等相关的炎症反应中起重要作用.
