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MiR?429对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制
目的 研究miR?429对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 培养人U87胶质瘤细胞,应用Lipofectamine? LTX试剂将pre?miR?429质粒以及anti?miR?429质粒(shRNA质粒载体)稳定转染人U87胶质瘤细胞,real?time PCR验证转染效率后,应用CCK?8检测增殖能力的变化;使用Transwell小室法检测人U87胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的变化;应用real?time PCR和Western blot检测E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)mRNA和蛋白表达含量变化;将ZEB1分别转染至U87胶质瘤细胞或miR?429过表达的U87胶质瘤细胞,应用Transwell小室检测miRNA?429和ZEB1分别过表达或二者双过表达对人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响.结果 与对照组比较,miR?429过表达显著抑制了人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力;显著降低了ZEB1在人U87胶质瘤细胞的mRNA和蛋白表达水平;ZEB1过表达显著增强了人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力;并且ZEB1过表达有效阻断了miR?429抑制U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用.结论 miR?429能够通过抑制ZEB1降低人U87胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力.
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尿道下裂患儿包皮组织中E盒结合锌指蛋白1的表达
目的:探讨E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)在尿道下裂患者包皮组织中的表达,分析ZEB1 mRNA和蛋白的表达水平与尿道下裂的关系. 方法:实验组和对照组的包皮组织来自于37例尿道下裂修复术患儿和11例包皮环切术包皮过长患儿,37例尿道下裂根据尿道口的位置归类为24例轻中度尿道下裂和13例重度尿道下裂,通过免疫组化和RT-PCR法分别对ZEB1的蛋白和mRNA表达水平进行检测. 结果:ZEB1蛋白阳性表达率在轻中度尿道下裂组为75.0％(18/24)、重度尿道下裂组为100％(13/13),明显高于对照组的9.1％(1/11),且两两比较均具有统计学意义(P均＜0.05);RT-PCR显示ZEB1 mRNA表达在对照组,轻中度、重度尿道下裂组织中的相对累计光密度值比分别为(0.67±0.21)、(0.81±0.24)、(1.55±0.29),除对照组和轻中度尿道下裂组差异无统计学意义外(P=0.64),对照组和轻中度尿道下裂组分别和重度尿道下裂组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论:ZEB1在尿道下裂患儿的包皮组织中的表达明显上调,且与尿道下裂的严重程度相关,提示ZEB1基因表达上调可能导致尿道下裂的形成.
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STAT3和ZEB1在食管鳞癌中的表达及其与放疗敏感性的关系
[目的]研究STAT3和ZEB1在食管鳞癌组织中的表达及其与放疗敏感性的关系.[方法]采用免疫组化法分别检测100例食管癌组织中STAT3和ZEB1的表达情况,并分析其与放疗敏感性的关系.[结果] STAT3和ZEB1的阳性表达率分别为66.0％(66/100)和64.0％(64/100).低分化以及临床分期为T3+T4的组织STAT3表达阳性率分别为85.7％ (30/35)、82.9％(42/51),均显著高于中、高分化以及临床分期为T1+T2组织中的55.4％(36/65)、49.0％(24/49);低分化以及临床分期为T3+T4的组织ZEB1表达阳性率分别为85.7％(30/35)、76.5％(39/51),均显著高于中、高分化以及临床分期为T1+T2组织中的52.3％ (34/65)、51.0％(25/49),差异均有统计学意义(P＜0.05).放疗有效组的STAT3、ZEB1阳性率均显著低于放疗无效组,差异均有统计学意义(59.2％ vs 87.5％,P=0.011;55.3％ vs 91.7％,P=0.001).多因素Logistic回归分析结果显示T分期是影响放疗疗效的独立因素(P=0.001).食管癌组织中STAT3与ZEB1的表达呈正相关(r=0.341,P=O.001).[结论]STAT3和ZEB1蛋白表达与食管癌放疗的敏感性呈负相关,二者可能可作为预测食管癌患者的放射敏感性的分子标志物.
关键词： 食管肿瘤 放疗敏感性 信号转导和转录酶活因子3 E盒结合锌指蛋白1 -
E盒结合锌指蛋白1在肝细胞癌上皮-间充质转化中与微小RNA-200的关系
目的 观察肝癌细胞株MHCC97-H中E盒结合锌指蛋白Ⅰ(ZEB1)、E-钙黏蛋白(E-cadhefin)、微小RNA(miRNA,miR)-200基因的表达,探讨在肝细胞癌上皮-间充质转化中ZEB1与miR-200的关系.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测正常肝细胞株L02及肝癌细胞株MHCC97-H中ZEB1、E-cadherin及miR-200家族基因的表达量.通过短发卡RNA(shRNA)慢病毒颗粒转染L02及MHCC97-H细胞敲除ZEB1,FQ-PCR检测L02及MHCC97-H中ZEB1、E-cadherin、miR-200基因的表达量.结果 MHCC97-H组中ZEB1、miR-200a基因表达量分别为1.268 1±0.120 1、484.368 1±99.804 1,较L02组(分别为1.000 0±0.0507、220.196 8±62.021 0)均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).而MHCC97-H细胞中E-cadherin基因表达量为0.443 9±0.0901,较i02组(1.0000±0.051 1)明显下降,ZEB1与E-cadherin基因表达呈负相关(r=-1.00).shRNA慢病毒颗粒成功转染L02及MHCC97-H细胞后,两组中ZEB1基因表达量分别为0.573 2±0.103 1、0.494 3±0.092 1,均明显下调(P＜0.05);两组中E-cadherin基因表达量分别为1.190 2±0.112 1、1.459 3±0.121 3,miR-200a基因表达量分别为3.0407±0.1133、2.857 1±0.113 5,miR-200b基因表达量分别为2.201 3±0.1208、3.789 1 ±0.1129,miR-200c基因表达量分别为1.665 1±0.121 7、6.129 3±0.1824,均明显上调(P＜0.05).结论 在肝癌细胞株MHCC97-H中ZEB1基因表达与E-cadherin呈负相关,ZEB1与miR-200家族之间可以互相调控,从而在肿瘤细胞的增殖、侵袭转移过程中发挥重要作用.
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HPV16E6对ZEB1介导的宫颈癌细胞上皮间质转化的促进作用
目的:探讨宫颈癌细胞中HPV16 E6病毒蛋白对E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)及其介导的上皮间质转化(EMT)的影响.方法:构建HPV16 E6质粒并转染至宫颈癌细胞C33A(E6-C33A组),同时设置Control-C33A组;设计合成靶向E6特异性shRNA,使Siha细胞中E6低表达(shE6-Siha组),设置Control-Siha组.划痕实验比较各组细胞迁移情况;荧光定量PCR和Western Blot检测EMT相关指标(E-cadherin、vimentin)及ZEB1的表达;生物信息学方法预测HPV16 E6和ZEB1的三级结构及二者的相互作用,免疫共沉淀进行验证.结果:划痕实验显示E6-C33A组细胞迁移能力显著高于Control-C33A组;而shE6-Siha组细胞迁移能力显著低于Control-Siha组;与Control-C33A组相比,E6-C33A组中ZEB1、vimentin的表达量明显升高,E-cadherin表达则降低;与Control-Siha组相比,shE6-Siha组ZEB1、vimentin表达下降,E-cadherin表达升高.免疫共沉淀证明HPV16 E6与ZEB1存在相互作用.结论:HPV16 E6可促进ZEB1的表达,诱发宫颈癌细胞的EMT.
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微小RNA-205通过靶向调控ZEB1抑制前列腺癌细胞迁移能力的研究
目的 观察微小RNA-205(miR-205)对前列腺癌细胞PC3迁移能力以及靶基因E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响.方法 采用实时定量PCR检测各前列腺癌细胞株(PC3、LNCaP、DU145)和良性前列腺上皮细胞(PrEC)中 miR-205的mRNA相对表达量,通过miR-205模拟物(miR-205 mimics)、miR-205抑制物(miR-205 inhibitor)和相应的空载体分别转染前列腺癌细胞株PC3后,将PC3细胞分为过表达miR-205组、mimics对照组、抑制miR-205组和inhibitor对照组4组,利用细胞划痕试验和Transwell细胞侵袭试验检测各组细胞迁移和侵袭能力.采用蛋白免疫印迹法检测过表达miR-205组、mimics对照组细胞ZEB1的蛋白表达水平,并通过荧光素酶报告试验验证miR-205与ZEB1基因的直接调控关系.利用蛋白免疫印迹法检测过表达miR-205组、mimics对照组细胞的上皮钙黏素和波形蛋白表达水平.结果 前列腺癌细胞DU145、LNCaP和PC3的miR-205 mRNA相对表达量均低于良性前列腺上皮细胞PrEC(P均<0.01);PC3的miR-205 mRNA相对表达量低,选为进一步试验的细胞株.24 h后,划痕试验显示过表达miR-205组的迁移细胞数少于mimics对照组,抑制miR-205组的迁移细胞数多于inhibitor对照组(P均<0.01);Transwell细胞侵袭试验显示,过表达miR-205组侵袭细胞数少于mimics对照组,抑制miR-205组侵袭细胞数多于inhibitor对照组(P均<0.01).过表达miR-205组PC3细胞的ZEB1蛋白表达水平低于mimics对照组(P<0.01).过表达miR-205组中,携带野生型3'-非翻译区序列载体PC3细胞的荧光素酶活性值低于携带突变型3'-非翻译区序列载体PC3细胞(P<0.01).与mimics对照组相比,过表达miR-205组的上皮钙黏素蛋白表达水平降低、波形蛋白表达水平升高(P均<0.05).结论 miR-205可能通过靶向降低ZEB1基因的蛋白表达,抑制前列腺癌细胞的迁移能力.
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Zeb1、CtBP1与E-cadherin在结肠腺癌中的表达及意义
目的:探讨转录抑制因子Zeb1、转录辅抑制因子CtBP1在结肠腺癌中的表达及与其靶基因E-cadherin的关系.方法:采用免疫组织化学染色方法检测结肠腺癌及癌旁组织中E-cadherin、Zeb1和CtBP1表达.结果:CtBP1在结肠腺癌组织及癌旁组织中表达阳性率分别为96.25％和100％,Zeb1分别为28.75％和0％,E-cadherin分别为32.50％和100％.E-cadherin表达和CtBP1表达不相关,而与Zeb1表达成负相关.结论:结肠腺癌中Zeb1与E-cadherin均表达异常;结肠腺癌中Zeb1异常表达可能是E-cadherin表达下调的机制.
