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HA14-1对环磷酰胺治疗小鼠Lewis肺癌增敏作用的实验研究
目的 观察HA14-1对环磷酰胺(CTX)治疗Lewis肺癌小鼠的化疗增效作用,探讨其可能的作用机制.方法 建立Lewis肺癌小鼠肿瘤模型,将40只C57BL/6小鼠随机分为4组:生理盐水组、CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组,给药7 d.于肿瘤接种22 d处死小鼠,描绘各组肿瘤体积增长曲线、计算抑瘤率,免疫组织化学方法测定治疗前后Lewis肺癌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-9蛋白的表达情况.结果 HA14-1组与生理盐水组比较无明显抑制肿瘤体积的作用,CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组的肿瘤体积较生理盐水组增长慢.HA14-1组的抑瘤率与生理盐水组比较无明显增加(P>0.05);CTX+HA14-1组及CTX组与生理盐水组比较,CTX+HA14-1组与CTX组比较,抑瘤率均明显增加(P<0.05).CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组Bcl-2蛋白表达均减少,且CTX+HA14-1组较CTX组Bcl-2蛋白明显减少(P<0.05).CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组Bax、Caspase-9蛋白表达增加,与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05);CTX+HA14-1组比CTX组Bax、Caspase-9蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 HA14-1可以增加CTX的化疗作用,其作用机制可能是通过抑制Bcl-2蛋白的表达,增加Bax、Caspase-9蛋白表达,从而促使肿瘤细胞凋亡.
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HA14-1诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的实验研究
目的 观察HA14-1是否有诱导体外小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞凋亡作用.方法 将LLC细胞培养传代,细胞分为空白组和实验组,空白组只加培养液,实验组分别加入5种不同浓度的HA14-1(12.5,25,50,75,100 μmol/L),分别作用24,48,72 h,MTT法测定LLC细胞存活分数,流式细胞学方法测定LLC细胞凋亡情况、免疫组织化学方法测定LLC细胞Bcl-2蛋白的表达情况及HA14-1作用前后Bcl-2蛋白的表达情况.结果 两组细胞中,与空白组比较,不同浓度的HA14-1实验组作用LLC细胞后,细胞存活率随浓度增加和时间延长越来越低,细胞的凋亡率随着浓度的增加有增加趋势,其差异在统计学上有显著性意义(P<0.01);免疫组织化学结果显示LLC细胞高表达Bcl-2,且HA14-1作用后Bcl-2蛋白的表达减少.结论 HA14-1有促小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的作用.
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丙戊酸联合HA14-1诱导Bcl-2高表达的白血病细胞株BALL-1凋亡
目的 观察体内外丙戊酸(VPA)和HA14-1联合应用对Bcl-2高表达的白血病细胞的杀伤效能及对外周血象的影响.方法 (1)将BALL-1分为空白对照组、1 mmol/L VPA组、5 mmol/L VPA组、15 mmol/L VPA组,作用72 h,流式细胞仪检测各组细胞凋亡结果;(2)将BALL-1分为对照组、VPA组、HA14-1组、VPA+HA14-1组,作用后流式细胞法检测各组凋亡率;(3)每组6只NOD/SCID鼠在每只鼠接种1×107/0.2mlBALL-1后24h按如下分组进行实验:①对照组;②HA14-1组,经尾静脉注射灭菌HA14-125 mg·kg-1·d-1,共7天;③VPA组,注射灭菌VPA 250 mg·kg-1·d-1,共7天;④HA14-1+VPA组,注射灭菌HA14-125mg·kg-1·d-1,4小时后再注射灭菌VPA250mg·kg-1·d-1,共7天.记录各组小鼠的存活时间.(4)将普通小白鼠共24只按(3)方法进行分组,比较几组普通小鼠的生存率、存活时间,及外周血细胞计数.结果 (1)VPA15 mmol/L作用72 h BALL-1凋亡率为(24.8±2.8)%,与其它3组比较P＜0.01;另3组之间比较P＞0.05.(2)HA14-1组、VPA组凋亡率分别为(4.6±0.1)%、(4.8±0.5)%,与对照组比较,P＞0.05.HA14-1+VPA组凋亡率高达(76.5±6.9)%,与另3组比较P＜0.01.(3)HA14-1+VPA组小鼠生存天数为(87.5±4.5)天,显著长于其他3组,而其他3组之间无差异.(4)HA14-1单独作用组和HA14-1与VPA联合作用组表现为白细胞与血小板轻微而短期下降,而小鼠的生存率、存活时间无显著性差异.结论 HA14-1与VPA联合用药,可克服Bcl-2高表达造成的对VPA的抗性.
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HA14-1诱导不同Bcl-2表达水平的白血病细胞凋亡
[目的]探讨HA14-1对不同Bcl-2表达水平的白血病细胞的作用以寻求克服白血病耐药的新药物.[方法]用不同浓度的HA14-1(0、25、50、75、100 μmol/L)作用于白血病细胞株(HL60、Jurkat clone E6-1、BALL-1),4 h后在流式细胞仪上检测细胞凋亡及作用0、1、3、4、5 h时细胞中胱冬肽酶(caspase)3和caspase9的含量.[结果]随HA14-1剂量的增加,存活细胞逐渐减少,HL60从(94.3±1.4)%降至(62.1±2.3)%;Jurkat clone E6-1从(94.7±1.5)%降至(12.4±1.3)%;BALL-1从(94.7±0.8)%降至(0.9±0.6)%.同一剂量时,不同细胞的存活率与Bcl-2表达高低呈负相关.随剂量的增加细胞凋亡率逐渐增加,如Jurkat clone E6-1凋亡率从(0.5±0.1)%上升至(60.1±2.6)%;在较高剂量时(100 μmol/L),细胞大幅度坏死,坏死率从<(3.3±0.6)%增至(26.8±1.6)%.在凋亡时,caspase9于1 h开始激活,caspase3于3 h开始升高.[结论]在一定剂量范围内,HA14-1通过抑制Bcl-2诱导细胞凋亡,HA14-1有可能成为克服白血病细胞耐药的新药.
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新一代抗肿瘤药物:BCL-2家族配体
Bcl-2在凋亡抑制过程中起关键作用.目前,抑制Bcl-2活性的方法主要有反义寡核苷酸、单链抗体、锤头状核酶和小分子配体.近年采用现代重组技术、计算机筛选途径发现Bcl-2的小分子配体(如HA14-1)可诱导Bcl-2高表达细胞凋亡,与其他方法联合使用表现出协同阻滞效应.Bcl-2家族配体可能成为新一代抗肿瘤药物.
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HA14-1联合顺铂诱导人小细胞肺癌细胞凋亡的研究
目的:观察HA14-1及其联合顺铂对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡诱导作用并探讨其可能的作用机制,探讨其对Bcl-2、Bax表达的的影响.方法:选用人小细胞肺癌NCI-H446细胞株为研究对象,分为空白组、DDP组、HA14-1组及DDP+ HA14-1组,分别作用24、48 h后,采用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Real time PCR法比较细胞内Bcl-2、Bax表达变化.结果:随着HA14-1及DDP浓度的增加,细胞抑制率逐渐增加,细胞凋亡率增高,联合用药组较单独用药组细胞的抑制率,凋亡率均增高,HA14-1作用细胞后,Bcl-2表达水平下降,Bax表达水平增高.结论:HA14-1可以诱导人小细胞肺癌凋亡,并增加肺癌细胞对DDP的化疗作用.
