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乙烯硫脲对FRTL-5细胞甲状腺球蛋白合成分泌及摄碘功能的影响
目的 探讨乙烯硫脲(ETU)对FRTL-5细胞的甲状腺球蛋白(TG)合成分泌和摄碘能力的影响.方法 用30、150和270μg/ml乙烯硫脲处理FRTL-5细胞后,用MTT法和~3H掺入法测乙烯硫脲的细胞毒性;放免法和免疫细胞化学法测乙烯硫脲对TG合成分泌的影响;RT-PCR检测乙烯硫脲对nis基因和tg基因的影响;同位素示踪法检测对细胞摄碘能力的影响.结果 30-270 μg/ml乙烯硫脲对FRTL-5细胞无显著细胞毒性.150μg/ml和270μg/ml乙烯硫脲显著降低培养液中TG浓度,对胞浆内TG无显著影响;使nis基因转录显著降低,对tg基因无显著影响;150μg/ml和270 μg/ml乙烯硫脲显著降低细胞摄碘能力.结论 乙烯硫脲可抑制FRTL-5细胞分泌TG,对TG合成无显著影响;乙烯硫脲各剂量组显著降低nis基因转录,但仅在高剂量组显著降低细胞摄碘能力.
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先天性肛门直肠畸形模型大鼠肛门内括约肌肌间神经节细胞及神经丛的病理改变
目的 观察肛门直肠畸形动物模型肛门内括约肌肌间神经节细胞及神经丛的数目和形态.方法 用乙烯硫脲诱导健康妊娠Wistar-Imammichi大白鼠产生有内括约肌的肛门直肠畸形胎鼠,取胎仔行正中矢状面连续切片,经染色后观察直肠肛管发育情况及肛门内括约肌肌间神经节细胞和神经丛数的数目.结果 实验组肛门直肠畸形胎鼠每个视野的肛门内括约肌肌间神经节细胞数为(1.206±0.012),神经丛数仅为(0.308±0.051),对照组正常胎鼠分别为(3.710±0.043)和(1.227±0.072),两者比较差异均有统计学意义(P<0.05～0.01),而实验组正常胎鼠两项数值分别为(3.012±0.032)和(1.187±0.004),与对照组相比,差异无统计学意义.结论 肛门内括约肌肌间神经节细胞数和神经丛数的减少是肛门直肠畸形的重要病理改变.
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nNOS和iNOS在神经管畸形胎鼠大脑皮质中的表达及意义
目的 研究乙烯硫脲(ETU)致神经管畸形胎鼠大脑皮质中nNOS和iNOS表达情况,进一步探讨nNOS和iNOS在脑发育中的作用.方法 应用免疫荧光、Western-blot及Real-time PCR方法检测nNOS和iNOS在正常胎鼠、ETU致畸的神经管畸形胎鼠的大脑皮质表达情况并进行定位、定量分析.结果 nNOS在给药无畸形组、脊柱裂畸形组胎鼠大脑皮质中的表达与正常对照组相比无明显差异(p＞0.05),而在脑膜膨出组胎鼠大脑皮质中nNOS的表达与正常对照组明显减少(p＜0.01);iNOS在各组均未检测到.结论 nNOS在脑膨出的胎鼠大脑皮质中表达明显减少,提示nNOS参与了脑异常发育过程.
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Gli2基因在胎鼠后肠发育后期的表达
目的探讨胎鼠后肠发育与sonic hedgehog(Shh)基因转录因子 Gli2基因表达水平的关系.方法48只妊娠Wistar大鼠随机分成2组,实验组(n=24)在孕11d按125mg/kg胃管注入1%乙烯硫脲(ethylenethiourea,ETU),对照组(n=24)给予等量蒸馏水.两组分别于孕12d、14d和16d各处死8只母鼠,每只母鼠取4只体重相似的胎鼠,取其直肠1cm提取RNA,采用半定量RT-PCR法检测Gli2基因表达.结果实验组胎鼠直肠Gli2基因表达水平明显低于对照组(P<0.05),实验组Gli2基因表达呈一低水平线,而对照组随妊娠时间呈一下降的曲线.结论Gli2基因表达水平在胎鼠后肠发育中具有重要的作用.
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乙烯硫脲致畸胎鼠直肠末端Sonic hedgehog基因的表达
目的 探讨乙烯硫脲(ETU)致畸胎鼠直肠末端Sonic hedgehog(Shh)基因在胎鼠直肠肛门及其畸形发生过程中的表达和作用.方法 妊娠SD大鼠30只按受孕时间配对分为2组,实验组(n=15)在孕10 d予10 g/LETU(125 mg/kg)胃管注入,正常对照组(n=15)予等量蒸馏水.2组分别于孕13、14、15、16和17 d剖宫取胎鼠直肠末端1 cm提取RNA和组织蛋白,采用RT-PCR法和Western blot法检测Shh基因mRNA和蛋白表达情况.结果 在后肠发育的关键时期,实验组直肠末端Shh基因mRNA水平明显低于正常对照组,第14天实验组直肠末端的mRNA相对灰度值为0.29±0.22,正常对照组为2.23±0.54(t=5.72 P<0.05);第15天实验组直肠末端的mRNA相对灰度值为0.39±0.12,正常对照组为1.30±0.49(t=3.08 P<0.05).实验组Shh蛋白表达明显下降,胚胎第14天实验组直肠末端Shh基因蛋白相对灰度值为1.04±0.46,正常对照组为2.09±0.04(t=4.55 P<0.05);第15天,实验组直肠末端Shh基因蛋白相对灰度值为0.59±0.21,而正常对照组为0.95±0.16(t=26.0 P<0.05).结论 Shh的表达情况与直肠发育呈时间依赖性改变.Shh基因表达在肛门直肠及其畸形发生过程中发挥重要作用,ETU可能影响Shh信号转导系统和肛门直肠畸形发生.
关键词： 肛门直肠畸形 Sonic hedgehog 基因表达 乙烯硫脲 胎鼠 -
乙烯硫脲致畸胎鼠直肠末端Gli2基因的表达
目的探讨乙烯硫脲致畸胎鼠直肠末端sonic hedgehog(Shh)基因转录因子Gli2基因表达水平.方法妊娠Wistar大鼠24只随机分成2组,实验组(n=12)在孕11、13 d分别给予1%乙烯硫脲(125 mg/kg)胃管注入,对照组(n=12)予等量蒸馏水.孕16 d处死母鼠,实验组每只母鼠取4只体质量相似的无肛畸形胎鼠,对照组取4只体质量相似正常胎鼠,各取其直肠末端1 cm提取RNA,采用RT-PCR法检测Gli2基因表达,比较两组之间Gli2基因表达水平.结果先天性无肛胎鼠直肠末端Gli2基因表达水平明显低于正常胎鼠直肠末端(P=0.004).结论 Gli2基因表达水平减低与先天性无肛畸形的发生密切相关,乙烯硫脲致畸机制之一是影响Shh信号转导系统.
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肛门直肠及畸形发育胚胎学的研究
[目的]通过采用乙烯硫脲(ETU)诱导孕鼠胎仔肛门直肠畸形,研究胚胎发育过程中肛门内括约肌间神经节细胞及神经丛的数目及形态.[方法]采用Wastar孕鼠16只,随机分为空白对照组及模型组,每组8只,在妊娠的d 7,d 9,d 11.5及d 13.5,d 14.5,d 15,d 16由胃管注入125 mg/kg的乙烯硫脲(ETU),空白对照组8只Wastar大鼠于d11.5,d13.5,d14,d16,模型组4只Wastar大鼠于11.5 d,13.5 d,14 d,15 d,16d进行取材,取胎仔行正中矢状面进行连续切片,取材标本进行HE及以S染色,观察直肠肛管发育情况及肛门内括约肌肌间神经节细胞及神经丛数的数目.[结果]11 d,13 d模型组产生的肛门直肠畸形的发生率为75.00% (6/8),模型组肛门直肠畸形胎仔每个视野下肛门内括约肌肌间神经节的细胞数为(1.341±0.024),神经丛数为(0.406±0.029),空白对照组胎仔为(3.156±0.074),(1.375±0.053),两者比较差异有统计学意义(P < 0.05);其中模型组中正常胎仔的数值分别为(3.087±0.059),(1.324±0.031),与空白对照组比较差异无统计学意义(P > 0.05).[结论]乙烯硫脲是良好的诱导肛门直肠畸形的致畸剂,肛门内括约肌肌间神经节细胞数及神经丛数的减少是肛门直肠畸形的病理学改变的重要影响因素.
