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黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响
背景：干细胞移植用于治疗急性肾损伤的有效性已经被多个研究证实，但其对肾小管上皮细胞损伤的修复机制尚不明确。目的：观察黄芪甲苷孵育后的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。方法：实验分为4组。2.5μmol/L顺铂诱导肾小管上皮细胞24 h，建立肾小管细胞损伤模型(顺铂损伤组)；将脂肪源性干细胞与损伤肾小管上皮细胞共培养(脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组)；利用 Transwel小室将20 mg/L黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞48 h后与损伤肾小管上皮细胞共培养(黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组)；以正常肾小管上皮细胞做对照(正常对照组)。结果与结论：与肾小管上皮细胞损伤组相比，AV/PI和TUNEL结果均显示脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组和20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组肾小管上皮细胞发生凋亡的比例和数量明显减少；ELISA结果表明20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组胰岛素样生长因子1分泌显著提高(P<0.05)；Western blot进一步显示20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组caspase-3蛋白水平明显下降，而Bcl-2的表达量明显增加(P<0.05)。表明黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用，从而有利于肾小管损伤的早期恢复，其保护机制可能与增加胰岛素样生长因子1分泌，抑制caspase-3表达、上调Bcl-2水平有关。
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LncRNA ROR对Ad36诱导人脂肪源性干细胞棕色化的作用
目的 探讨LncRNA ROR在腺病毒36型(Ad36)诱导的人脂肪源性干细胞棕色化过程中的作用.方法 对鸡尾酒法诱导组和Ad36诱导组第2、4、6、8天细胞进行油红O染色,观察人脂肪源性干细胞(hADSC)成脂情况,采用实时定量PCR方法检测2组LncRNA ROR、解耦联蛋白1(UCP1)及PRDM16的mRNA表达水平,Western印迹法检测UCP1及PRDM16的蛋白表达水平.siRNA干扰LncRNA ROR后,实时定量PCR和Western印迹法分别检测Ad36诱导脂肪细胞分化过程中干扰组与对照组UCP1及PRDM16的mRNA和蛋白表达水平.结果 油红O染色结果显示,鸡尾酒诱导组的脂肪细胞中脂滴较大,而Ad36诱导组则为颗粒状较小脂滴.与鸡尾酒法诱导组相比,Ad36诱导组 LncRNA ROR、UCP1及 PRDM16的mRNA表达水平及UCP1和PRDM16蛋白表达水平显著升高(P<0.05).与对照组相比,LncRNA ROR干扰组UCP1及PRDM16的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 Ad36诱导hADSC分化过程中,上调的LncRNA ROR可能通过正向调控UCP1及PRDM16表达,从而促进hADSC的棕色化.
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低氧诱导因子1α基因转染的人脂肪源性干细胞对肾小管上皮细胞损伤的影响
将低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因质粒高效感染人脂肪源性干细胞(hADSCs),并与顺铂诱导的入近端肾小管上皮细胞(HK-2)共孵育,观察hADSCs对HK-2细胞损伤的影响.方法:以慢病毒为载体,将HIF-1α转染hADSCs,与顺铂诱导的HK-2细胞共孵育.电镜观察HK-2细胞形态、结构的变化；原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡指数；Western blot检测HK-2细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)的变化及hADSCs细胞促红细胞生成素(EPO)、血红素氧化酶1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,ELISA检测培养液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的浓度,EPO、HO-1、VEGF和HIF-1α的浓度变化.结果:(1)与顺铂诱导组相比,共孵育后的HK-2细胞结构损伤减轻、凋亡细胞减少,caspase-3的表达低于顺铂诱导组、Bcl-2的表达水平升高；其中HIF-1α转染的hADSCs与HK-2细胞共孵育后,HK-2细胞损伤明显减轻,凋亡蛋白的变化更为明显.(2)顺铂诱导组培养液中NGAL、KIM-1浓度升高,以KIM-1变化明显(P＜0.05)；细胞共孵育后培养液中KIM-1浓度降低,转染组较明显.(3)转染后的hADSCs细胞内EPO、HO-1、VEGF的蛋白表达升高；培养液中HO-1、VEGF含量增高(P＜0.05),HIF-1α、EPO的含量变化不明显.结论:hADSCs与HK-2细胞共孵育后,可以减轻顺铂诱导的HK-2细胞结构损伤、抑制细胞凋亡,HIF-1 α转染hADSCs后其作用更为明显,可能与细胞保护因子的高表达有关.
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黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响
目的 观察黄芪甲苷(Ast)孵育后的脂肪源性干细胞(ADSC)对顺铂诱导的肾小管上皮细胞(HKC)损伤的影响.方法 HKC被分为4组:(1)对照组；(2)顺铂组；(3) ADSC与损伤HKC共培养组(ADSC+HKC组)；(4)Ast孵育ADSC后与损伤HKC共培养组(Ast+ADSC+HKC组).分别用不同浓度的顺铂(2.5、5、10、20μmol/L)诱导HKC 6、24 h,建立肾小管细胞损伤模型.用Transwell小室与20 mg/L Ast孵育的ADSC间接共培养48 h.流式细胞术(FCM)和原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测HKC的细胞凋亡；以增殖细胞核抗原(PCNA)反映HKC增殖情况；ELISA法检测下室HKC培养液中白细胞介素6(IL-6)、T细胞表达和分泌因子(RANTES)、红细胞生成素(EPO)、类胰岛素一号增长因子(IGF-1)的表达；结晶紫染色观察上室膜下ADSC的迁移指数.结果 FCM和TUNEL结果均显示,与顺铂组相比,ADSC+HKC组和Ast+ADSC+HKC组细胞凋亡的比例和数量减少,差异有统计学意义(均P＜0.05)；PCNA染色结果显示ADSC+HKC组和Ast+ADSC+HKC组的细胞增殖数量高于顺铂组,差异有统计学意义(P＜0.05)；与顺铂组相比,Ast+ADSC+HKC组IL-6、RANTES水平明显降低,EPO、IGF-1水平升高,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05)；结晶紫染色显示Ast+ADSC+HKC组ADSC的迁移指数高于其他3组(均P＜ 0.05).结论 黄芪甲苷可刺激ADSC的旁分泌效应,增强ADSC向受损部位定向迁移,从而减少HKC凋亡.
