首页 > 文献资料
-
Cocktail探针药物法评价小檗碱对肝微粒体CYP450酶的抑制作用
目的:研究小檗碱对人肝微粒体CYP活性的影响.方法:以苯海拉明为内标,建立LC-MS/MS同时测定5种探针药物:咪达唑仑、非那西丁、右美沙芬、甲苯磺丁脲和氯唑沙宗的含量,采用鸡尾酒(cocktail)法探针药物法评价不同浓度小檗碱对混合人肝微粒体CYP不同亚型活性的影响.结果:与对照组相比,咪达唑仑、非那西丁和甲苯磺丁脲的代谢速率基本没有变化,而氯唑沙宗的代谢速率明显变慢,对于右美沙芬,当小檗碱的质量浓度为50 μg· L-1时,其代谢速率基本没有变化,当小檗碱的质量浓度大于200 μg·L-1时,其代谢速率明显变慢.结论:小檗碱质量浓度在2000μg·L-1以下时对人肝微粒体中CYP3A4,CYP1 A2和CYP2C9活性没有明显影响,但对CYP2E1和CYP2D6有明显的浓度依赖性抑制作用.
-
肾阳虚抑郁症模型大鼠的肝脏药物代谢酶活性变化研究
采用鸡尾酒法(cocktail)探究糖皮质激素诱导的肾阳虚抑郁症状态大鼠体内6种CYP450亚型酶活性变化.连续21天肌注氢化可的松,建立肾阳虚抑郁症大鼠模型;分别选用甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶碱、咪达唑仑、奥美拉唑和右美沙芬作为CYP2C6、CYP2E1、CYP1A2、CYP3A2、CYP2D1、CYP2D2探针底物.采用液质联用法(LC-MS/MS)测定空白组和模型组大鼠体内6种混合探针的血药浓度,计算药动学参数.与空白组相比,模型组大鼠体内茶碱、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的代谢显著加快(P＜0.01),右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑的代谢无显著差异.结果表明氢化可的松诱导的肾阳虚抑郁模型CYP2E1、CYPlA2和CYP2C6均被诱导.
-
慢性不可预见性温和应激模型大鼠的肝脏药物代谢酶活性变化研究
采用鸡尾酒(cocktail)探针药物法研究慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)造成的抑郁状态对大鼠体内6种CYP450亚酶活性的影响.根据Katz法建立CUMS大鼠抑郁模型;分别选用甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶碱、咪达唑仑、奥美拉唑及右美沙芬作为大鼠CYP2C6、CYP2E1、CYPl A2、CYP3A2、CYP2D1、CYP2D2的探针底物,采用液质联用法(LC-MS/MS)测定对照组与模型组大鼠体内6种混合探针的血药浓度,计算药动学参数.结果表明,茶碱和氯唑沙宗代谢显著加快(P＜0.01),甲苯磺丁脲、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑的代谢无显著差异.结果说明,慢性不可预见性温和应激造成的抑郁状态对CYPl A2有强诱导、对CYP2E1有中强诱导作用.
关键词： 慢性不可预见性温和应激 液质联用 鸡尾酒法 细胞色素P450 -
LncRNA ROR对Ad36诱导人脂肪源性干细胞棕色化的作用
目的 探讨LncRNA ROR在腺病毒36型(Ad36)诱导的人脂肪源性干细胞棕色化过程中的作用.方法 对鸡尾酒法诱导组和Ad36诱导组第2、4、6、8天细胞进行油红O染色,观察人脂肪源性干细胞(hADSC)成脂情况,采用实时定量PCR方法检测2组LncRNA ROR、解耦联蛋白1(UCP1)及PRDM16的mRNA表达水平,Western印迹法检测UCP1及PRDM16的蛋白表达水平.siRNA干扰LncRNA ROR后,实时定量PCR和Western印迹法分别检测Ad36诱导脂肪细胞分化过程中干扰组与对照组UCP1及PRDM16的mRNA和蛋白表达水平.结果 油红O染色结果显示,鸡尾酒诱导组的脂肪细胞中脂滴较大,而Ad36诱导组则为颗粒状较小脂滴.与鸡尾酒法诱导组相比,Ad36诱导组 LncRNA ROR、UCP1及 PRDM16的mRNA表达水平及UCP1和PRDM16蛋白表达水平显著升高(P<0.05).与对照组相比,LncRNA ROR干扰组UCP1及PRDM16的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 Ad36诱导hADSC分化过程中,上调的LncRNA ROR可能通过正向调控UCP1及PRDM16表达,从而促进hADSC的棕色化.
-
Cocktail法评价敌敌畏对大鼠CYP450亚型酶活性的影响
目的 用Cocktail探针药物法评估敌敌畏对大鼠CYP450酶代谢活性的影响.方法 将大鼠随机分为敌敌畏组和对照组.敌敌畏组给予腹腔注射12.5 mg/kg敌敌畏,对照组给予等体积生理盐水.然后灌胃给予5种探针药物 (安非他酮、美托洛尔、非那西丁、睾酮和甲苯磺丁脲),用超高效液相色谱串联质谱法测定血浆探针浓度;同时分离肝脏,用PCR法测定5种亚型酶mRNA的表达量.结果 敌敌畏组CYP1A2、CYP2D1和CYP3A2的AUC明显高于对照组,差异有统计学意义 (P＜0.05),而对CYP2B1和CYP2C11的药代动力学无显著影响;CYP2D1和CYP3A2的mRNA表达水平均显著降低 (P＜0.05),CYP1A2的mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义 (P＜0.05),而CYP2C11和CYP2B1的mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义 (P＞0.05).结论 结合PCR结果,腹腔注射敌敌畏可以抑制大鼠CYP2D1和CYP3A2的酶活性.
-
"自体血清+鸡尾酒法"诱导外周血DC成熟的研究
目的 比较三种不同的分离诱导外周血树突状细胞(DC)成熟的方法.方法 取正常成人外周血约180 ml,分成三组.分离单核细胞后,经典脂多糖(LPS)诱导组(A组):接种于含RPMI1640+胎牛血清完全培养基的25 cm2培养瓶中,2h后弃悬浮细胞,将贴壁单核细胞,用粒-巨噬细胞集落刺激因子和白介素4培养,培养到第6天时加入LPS诱导24h;鸡尾酒诱导组(B组):单核细胞的培养同A组,培养到第6天时用细胞因子组合(1000U/ml肿瘤坏因子、10ng/ml白介素6、10mg/ml白介素1β、1μg/ml前列腺素E2)诱导24h;自体血清+鸡尾酒诱导组(C组):单核细胞用RPMI1640+10%自体血清完全培养基培养,诱导方法同B组.用流式细胞仪检测各组收集的DC细胞成熟表型CD80、CD86、CD83以及白细胞表面抗原HLA-DR的表达;动态观察各组细胞成熟过程中形态的改变以及其激活淋巴细胞增殖的能力.结果 C组DC成熟过程中形态好、突起多;其成熟表型CD86、CD83、CD80以及HLA-DR的平均表达率分别是(88.60±6.34)%、(50.55±4.03)%、(73.89±6.15)%、(93.24±7.78)%,明显高于A、B组(P＜0.05);激活淋巴细胞增殖指数为2.03,亦明显高于A、B组(P＜0.05).结论 自体血清+鸡尾酒诱导法是一种简单、方便、经济的外周血DC分离诱导成熟的新方法.
