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miR-410可促进骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞
背景:骨髓间充质干细胞成软骨分化对骨关节炎的治疗具有重要意义,但是涉及的具体机制目前仍不明确.目的:探讨miR-410在促进骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞中的作用机制.方法:从接受全髋关节置换的骨关节炎患者中获得骨髓抽取物并分离骨髓间充质干细胞.使用慢病毒将miR-410或miR-410抑制剂转染到骨髓间充质干细胞中,然后加入成软骨诱导分化培养液进行成软骨诱导,采用阿利辛蓝染色检测成软骨分化能力、MTT法检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期变化、RT-PCR和Western blot检测软骨相关标志物Sox9和Has2 mRNA、蛋白水平变化.结果与结论:①骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化过程中miR-410表达显著升高;②转染miR-410组的骨髓间充质干细胞miR-410表达水平显著升高,而miR-410抑制组显著降低;③转染miR-410组骨髓间充质干细胞增殖能力显著增强,miR-410抑制组在G0/G1期阻断骨髓间充质干细胞增殖;④miR-410转染显著促进骨髓间充质干细胞向软骨分化,miR-410转染增加了Sox9、Has2的mRNA和蛋白质水平;⑤miR-410是骨髓间充质干细胞向软骨分化的正调控因子,具有加速细胞周期和增强细胞活力的作用.
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中西医结合治疗中晚期青光眼50例观察
青光眼是一种临床表现极为复杂的常见眼病.miR-NA是一种非编码单链小分子RNA,能对基因进行转录后表达的调控.miR-410的表达在青光眼患者中具有组织特异性和发育阶段特异性.笔者采用中西医结合治疗中晚期青光眼患者50例,对其疗效和miR-410的表达进行了观察,现报道如下.
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MiR-410对多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的影响
[目的]检测miR-410与HMGB1在多发性骨髓瘤中的表达水平及其对细胞增殖与侵袭能力的影响,探讨miR-410在多发性骨髓瘤致病中的作用.[方法]实时荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤骨髓及细胞中miR-410的表达水平;蛋白质印迹用于分析HMGB1蛋白表达水平;CCK8实验和Boyden侵袭小室实验分别用于检测细胞增殖活性及侵袭能力;双荧光素酶报告实验用于检测miR-410与HMGB1之间的相互作用;通过重组质粒构建及细胞转染调节相关基因在细胞内的表达;通过建立裸鼠异位移植瘤模型,在体验证miR-410对肿瘤生长的影响.[结果] MiR-410在多发性骨髓瘤骨髓及细胞中表达均下调(P＜0.01),而HMGB1表达均上调(P＜0.01).MiR-410抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖和侵袭(P＜0.01).MiR-410通过与HMGB1的3'UTR作用,负向调控HMGB1的表达.MiR-410通过下调HMGB1抑制多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭(P＜0.05).MiR-410抑制多发性骨髓瘤移植瘤小鼠肿瘤生长(P＜0.05).[结论]MiR-410通过负向调控HMGB1表达,抑制多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭,从而抑制肿瘤发生发展.
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胶质瘤中miR-410靶向作用于MET的初步研究
目的：探讨miR-410在胶质瘤细胞的作用机制。方法收集50例人胶质瘤标本以及胶质母细胞瘤U251和U87细胞系。采用miRanda靶基因预测软件对miR-410的靶基因预测分析，初步判断其与MET基因的相关性；利用免疫组化和原位杂交技术检测人脑胶质瘤标本中miR-410和MET的表达；荧光素酶报告基因实验检测miR-410对MET的靶向作用；Western blot检测miR-410模拟物转染肿瘤细胞后MET蛋白的变化。结果经miRanda靶基因分析：MET mRNA的3'非编码区（3' UTR）与miR-410的种子序列存在理论上的互补匹配序列。免疫组化和原位杂交技术检测：肿瘤标本中miR-410和MET具有负相关性（r=ˉ0.69783，P＜0.001）。荧光素酶实验进一步证实胶质母细胞瘤中MET基因是miR-410的直接靶点。肿瘤细胞转染miR-410模拟物后对MET蛋白的表达具有明显的抑制作用（P＜0.05）。结论在胶质瘤细胞中miR-410靶向作用MET，可能是胶质瘤治疗的新靶点。
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MicroRNA对老年性黄斑变性中血管紧张素Ⅱ1型受体的调控机制
目的：研究AMD患者的 RPE 细胞中微小 RNA miR-410对血管紧张素受体Ⅱ的1型受体(AT1R)的调控效应。
方法：实验分为AMD组、白内障组和正常组,运用生物信息学预测出AT1 R是miR-410的靶基因,将正常的RPE细胞模拟 AMD 和白内障的微环境进行培养,检测其中miR-410的表达量,进一步将miR-410 mimics转染入细胞中,分别运用Q-PCR和Western blot的方法检测AT1 R mRNA和蛋白的表达量,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-410与AT1 R的相互作用关系。
结果：AMD组与白内障组和正常对照组相比,RPE细胞中的miR-410表达量显著降低( P=0.0006,0.0008),双荧光素酶报告基因实验表明,miR-410对AT1R具有明显的调控作用,且miR-410 mimics的下调效率大致为40%左右。细胞实验显示miR-410对AT1 R的mRNA和蛋白表达的抑制率约为40%~50%。
结论：AT1 R是miR-410的靶基因,且在AMD的RPE细胞中提高miR-410的表达可以抑制AT1 R的表达。关键词： 老年性黄斑变性 血管紧张素受体Ⅱ的1型受体 miR-410
