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GW4869抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放
背景:间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞本身具有相似的功能,但外泌体释放的调控机制依然不是很清楚.目的:探讨中性鞘磷脂酶抑制剂GW4869对骨髓间充质干细胞来源外泌体释放的抑制作用及其对细胞增殖的影响.方法:将骨髓间充质干细胞分为正常对照组,GW4869处理24 h组和GW4869撤药24 h组(GW4869预处理24 h,撤药后继续培养24 h),分别收集各组条件培养基,采用超速离心法提取外泌体,Western blot法鉴定外泌体表面标志蛋白CD63、TSG101的表达,Nano-sight检测外泌体粒径分布及浓度,BCA法测定外泌体总蛋白水平,活细胞成像系统观察GW4869对骨髓间充质干细胞增殖的影响.结果与结论:①Western blot显示外泌体阳性表达标志蛋白CD63、TSG101;②纳米示综分析证实释放的外泌体大小约114 nm;③与正常对照组相比,GW4869处理24 h组和GW4869撤药24 h组外泌体释放减少差异有显著性意义(P < 0.01),而GW4869预处理24 h组和GW4869撤药24 h组差异无显著性意义(P >0.05);④与正常对照组相比,GW4869及其溶剂二甲基亚砜对骨髓间充质干细胞增殖影响差异无显著性意义(P > 0.05);⑤结果表明,GW4869可以显著抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放,并且在撤药24 h内依然保持抑制作用,GW4869对骨髓间充质干细胞增殖无影响.
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中性鞘磷脂酶-2(Neutral sphingomyelin-2N-SMase2)对大鼠脑缺血再灌注损伤中IL-6、 IL-1β、 TNF-α炎性因子的影响
目的 研究中性鞘磷脂酶-2(Neutral sphingomyelin-2 N-SMase2)对大鼠脑缺血再灌注损伤中IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的影响.方法 采用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注(ischemia reperfusion I/R)损伤模型,侧脑室注射N-SMase2激活剂(daunorubicin DNR)或抑制剂GW4869,免疫组织化学技术检测蛋白神经酰胺(Ceramide Cera)和N-SMase2的表达,RT-PCR技术检测IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性因子的mRNA表达水平.结果 与对照组相比,再灌注组(I/R)大鼠脑组织Ceramide和N-SMase2的蛋白表达阳性细胞较对照组增多(P＜0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的mRNA表达水平升高(P＜0.05),侧脑室注射GW4869可显著降低IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA水平(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注模型中,N-SMase/Cera通路激活,参与调控神经细胞再灌注损伤,而N-SMase2抑制剂GW4869可明显降低IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的表达.
