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血管基质成分联合脱细胞骨基质-壳聚糖支架修复桡骨缺损
背景:研究表明,复合使用人工组织工程骨材料和脱细胞骨基质做为骨缺损修复的支架材料,可以综合两者的优点.目的:进一步验证脂肪组织基质血管基质性成分联合脱细胞骨基质壳聚糖支架复合物修复兔桡骨缺损的安全性和生物相容性.方法:取38只新西兰大白兔,其中3只用于脂肪组织血管基质成分的制备,3只用于脱细胞骨基质的制备,32只分为实验组和对照组,采用Brownlow法制备桡骨缺损型,实验组移植血管基质成分-脱细胞骨基质壳聚糖复合支架,对照组造模后不做任何处理.术后2,4个月分别进行一般情况和大体观察、X射线拍照、病理观察、Lane-Sandhu组织学评分.结果与结论:①术后2,4个月2组无感染现象,但实验组的活动量和愈合程度显著性好于对照组;②术后2个月实验组骨缺损部位的X射线影像结果有显著灰白色的高密度影,术后4个月与正常的桡骨骨组织相同,对照组骨不连接;③术后2,4个月实验组病理显示骨组织生长情况显著性的高于对照组,Lane-Sandhu组织学评分显著性的高于对照组(P<0.05);④结果说明,血管基质成分-脱细胞骨基质壳聚糖复合支架修复兔桡骨缺损具有很好的安全性和生物相容性.
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富血小板血浆对人原代脂肪来源干细胞增殖的影响
目的 观察富血小板血浆对人原代脂肪来源干细胞增殖的影响.方法 脂肪组织及静脉血来源于6例吸脂的女性患者,在无菌条件下,从脂肪组织中分离获取含原代脂肪来源干细胞的血管基质成分;在吸取脂肪的同时,抽取等单位体积的静脉血,离心制备获得富血小板血浆.采用Cellometer细胞计数仪及辅助,吖啶橙-碘化丙啶染色法对血管基质成分活细胞进行细胞计数;血液分析仪对富血小板血浆进行细胞计数.将细胞分为实验组与对照组,两组分别用含5%、10%、15%的富血小板血浆及含10%胎牛血清培养液干预.细胞计数仪检测在24,48,72,96h时,原代脂肪来源干细胞的数量值.结果 ①本实验血管基质成分成骨、成脂转化实验为阳性;Mark检测,第3代脂肪来源干细胞CD73、CD90为阳性,CD45为阴性,逆推验证,可从血管基质成分中,可获取原代脂肪来源干细胞;②通过血清离心法可获得约平均全血4倍的血小板;③实验组较对照组在24,48,72,96h时,ADSCs数量增多,密度增大,其中72,96h时段中,不同浓度的富血小板血浆对脂肪来源干细胞增殖有明显的促进作用,差异具有统计学意义(P ＜0.05).结论富血小板血浆对体外培养的人原代脂肪来源干细胞的增殖有促进作用.
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Cellometer细胞计数仪在脂肪源性干细胞定量分析中的应用
目的 观察Cellometer细胞计数仪定量检测人脂肪来源干细胞的特点与效果.方法 2011年2-6月,取6例吸脂患者的脂肪组织,其中腹部3例,大腿3例.脂肪组织经消化、离心后形成基质血管成分.体外培养传代形成1代和2代细胞,分别进行细胞计数仪检测.检测内容包括细胞浓度、细胞总数、细胞直径、活细胞比率.结果 取自腹部或大腿的20ml脂肪组织可以获取细胞总数为4.68×106～5.76×106个,单位体积脂肪中细胞含量为2.34×105/ml～2.88×105/ml.不同部位取材细胞总数略有差别,但无统计学意义.原代取材细胞悬液中,活细胞比率为90%～94%,体外培养后比率有所降低(81%～88%).各代细胞悬液中均含有大小不同的细胞成分,原代细胞表现较为一致,即细胞直径分布在7.00～30.00μm (腹部)或6.70～17.90μm (大腿),多数直径为7.45～9.00μm(腹部)或6.70～8.30μm(大腿).而经体外培养后,细胞直径变大,且分布更为分散.结论 Cellomter细胞计数仪可用于脂肪源性干细胞的定量分析,具有省时、方便、客观、可重复性好的优点,并可对细胞大小进行客观测量.
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脂肪组织成分对纤维化愈合的影响
目的 探讨脂肪组织成分对纤维化愈合的影响及其可能机制.方法 通过在同一动物个体中分别制作真皮和脂肪组织切割伤创伤模型,组织学检查明确脂肪组织纤维化愈合特征.经体外实验从脂肪组织中分离成熟脂肪细胞和血管基质,观察两种成分对真皮成纤维细胞增殖和分泌胶原能力的影响.结果 与真皮组织比较,脂肪组织纤维化愈合程度轻.成熟脂肪细胞对真皮成纤维细胞具有促进凋亡或坏死的作用,而脂肪组织中血管基质成分对真皮成纤维细胞分泌I型胶原功能具有促进作用.结论 脂肪组织中的成熟脂肪细胞及血管基质成分可对成纤维细胞增殖和分泌胶原等功能产生影响,这可能是创伤后脂肪组织纤维化愈合特征的细胞学机制之一.
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脂肪组织来源干细胞的分化潜能和应用
目的 介绍脂肪组织来源的干细胞种类、分化潜能及在再生医学中的应用和优势. 方法 广泛查阅近年关于BMSCs、脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)和去分化脂肪(dedifferentiated fat,DFAT)细胞的实验研究及临床研究文献,并进行整理、综合与分析. 结果 从脂肪基质成分可以分离得到ADSCs,ADSCs具有多向分化潜能,可分化为脂肪、骨、软骨、内皮、肌以及神经细胞等,并已较成功地应用于再生医学各领域.成熟脂肪细胞经过天花板培养法可以去分化为成纤维样细胞,即DFAT细胞,获得了多向分化潜能,也可以像ADSCs一样分化为脂肪、骨、软骨、内皮、肌以及神经细胞等.相比较目前常用的成体干细胞BMSCs,ADSCs、DFAT细胞来源广泛、取材更容易；而相对于ADSCs,DFAT细胞均一性高,增殖能力强. 结论 脂肪组织作为人体干细胞的重要来源,可能会给临床组织缺损的修复与再生带来新希望.
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脂肪组织血管基质成分在组织工程化脂肪构建中的应用
脂肪组织血管基质成分(SVF)中含有脂肪干细胞并可提供一定的生长因子,在脂肪组织工程化构建领域相对于单独应用脂肪于细胞更具明显优势,近年来得到了广泛的应用.本文就SVF的组成和优势,SVF的具体提取方法和影响因素,SVF用于构建组织工程化脂肪中支架材料的选择,SVF包含的构建组织工程化脂肪的生长因子和将SVF用于构建组织工程化脂肪时应考虑到局部微环境的作用,SVF复合脂肪组织构建组织工程化脂肪,SVF复合富血小板血浆或富血小板血纤蛋白构建组织工程化脂肪的方法,以SVF构建组织工程化脂肪存在的问题等作一综述,旨在帮助临床构建出可用于治疗的存活率高并发症少的组织工程化脂肪,以推动整形外科的发展.
