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不同剂量骨保护素对破骨细胞内一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶的影响
背景：骨保护素和一氧化氮在防治骨质疏松方面有重要作用，但目前关于两者在抑制破骨细胞增殖分化方面的关系研究较少。
目的：验证不同剂量的骨保护素对破骨细胞内生成一氧化氮量及内皮型一氧化氮合酶活性的影响。
方法：用抗酒石酸酸性磷酸酶染色验证诱导生成的破骨细胞；将诱导生成的破骨细胞分成6个组，空白对照组不加任何试剂；阴性对照组培养液中加入培养液；骨保护素组分为4组分别加入10，25，50，75μg/L不同剂量的骨保护素试剂。采用Annexinv-FITC细胞凋亡检测试剂盒，利用流式细胞仪测定破骨细胞凋亡率；荧光定量PCR检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA 的表达量变化；一氧化氮检测试剂盒检测破骨细胞中内一氧化氮浓度；内皮型一氧化氮合成酶活力试剂盒检测破骨细胞内一氧化氮合酶的活力；骨保护素各组加入内皮细胞型一氧化氮合酶抑制剂；荧光定量PCR检测破骨细胞特异性酶抗酒石酸酸性磷酸酶 mRNA及蛋白激酶K mRNA表达量的变化。
结果与结论：①骨保护素可以抑制破骨细胞的分化生成并诱导其凋亡。②骨保护素的质量浓度与诱导生成的破骨细胞数量及其标志酶mRNA的表达量呈负相关，与破骨细胞凋亡率呈正相关。③骨保护素可以增加破骨细胞内一氧化氮的生成以及内皮型一氧化氮合酶活性的升高；骨保护素的质量浓度与破骨细胞生成的一氧化氮浓度及内皮型一氧化氮合酶活性呈正相关。④Raw264.7细胞在体外培养条件下，骨保护素与一氧化氮在抑制破骨细胞生成及促进其凋亡方面有协同作用，推测两者之间可能存在骨保护素/内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮信号通路。 -
一氧化氮抑制AngⅡ介导的心肌肥大反应的信号机制
本文主要利用培养的新生大鼠心肌细胞, 从细胞学及分子生物学角度研究一氧化氮(NO)信号 系统在AngⅡ介导的心肌肥大反应中的作用及机制.实验以心肌细胞蛋白合成速率、心房钠尿肽(ANP)的表达作为心肌肥大反应的指标, 以硝酸盐及亚硝酸盐含量反映心肌细胞NO水平, 以免疫印迹法测定MKP-1蛋白表达, 以RT-PCR测定eNOS mRNA水平.结果发现: (1) L -精氨酸 (L-Arg) 10、 100 μmol/L分别增加心肌细胞NO水平16%及31%, L-A rg (100 μmol/L)还可增加心肌细胞eNOS mRNA表达, 其作用可被NOS抑制剂L-NAME 所抑制; (2) L-Arg (100 μmol/L)可降低AngⅡ(0.1 μmol/L)诱导的心肌细胞A NP mRNA表达水平和蛋白合成速率, 而在L-Arg处理之前用针对MKP-1的反义寡核苷酸转染心肌细胞, 蛋白合成速率明显增加, 可取消L-Arg的抑制作用, 甚至超过AngⅡ组; (3) L-Arg (100 μmol/L)明显增加MKP-1蛋白表达, 比对照组增加225%, NOS抑制 剂L-NAME及蛋白激酶G(PKG)抑制剂KT-5823皆可抑制L-Arg诱导的MKP-1蛋白表达, 分别抑制88%、 83%, 而AngⅡ能增加L-Arg诱导的MKP-1的表达, 较对照组增加365%, 增强了L-Arg的作用.以上结果表明, NO抑制AngⅡ介导心肌肥大反应的机制可能是通过激活PKG, 促进MKP-1的表达, 从而增加MAPK去磷酸化实现的.
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染料木黄酮抑制血管内皮生长因子诱导的血管内皮细胞活化及蛋白激酶K活性
目的 探讨染料木黄酮(genistein,Gen)抗肿瘤血管生成的分子机制.方法 实验以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为研究对象,通过锥虫蓝不相容试验测定Gen对HUVECs的细胞毒性,然后利用Caspase-3活性分析试剂盒测定Caspase-3活性,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素凋亡试剂盒测定凋亡率,蛋白激酶K(PTK)活性分析试剂盒测定PTK活性.结果 HUVECs经血管内皮生长因子(VEGF)刺激后,PTK活性升高,Gen可通过抑制PTK激酶活性,诱导VEGF处理的内皮细胞凋亡.结论 Gen可通过抑制PTK活性阻断VEGF诱导的内皮细胞活化,从而发挥抗肿瘤血管生成作用.
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Cell：颠覆性发现-PKC是肿瘤抑制蛋白
数十年来人们一直相信蛋白激酶C（PKC）会促进癌症，并根据这一点全力开发 PKC 抑制性药物。然而加州大学的科学家们发现，PKC其实是一个重要的肿瘤抑制蛋白，应当在治疗过程中恢复癌细胞中的PKC活性。这一颠覆性研究成果近发表在Cell （ANTAL CE ， HUDSON AM ，KANG E ，et al 。 Cell ，160：1-14）杂志上。
