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Notch信号通路与Slug在调控宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变中的意义
目的 探讨Notch信号通路与Slug在宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变(EMT)中的作用机制.方法 收集临床慢性宫颈炎及宫颈鳞状细胞癌标本,分别用免疫组化及Western blot检测Notch1、NICD1、Slug、E-cadherin、α-SMA蛋白表达情况,Real-Time PCR检测Notch1、Slug mRNA表达情况.结果 与慢性宫颈炎比较,Notch1、NICD1、Slug和α-SMA在宫颈鳞状细胞癌中表达增加(P＜0.01),E-cadherin蛋白在癌组织中的表达降(P＜ 0.01).结论 Notch信号通路和Slug可能通过调控EMT在宫颈鳞状细胞癌的侵袭转移过程中发挥作用
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JNK/AP-1信号通路在百草枯诱导肺泡上皮细胞间充质转变中的作用
[目的]探讨c-jun氨基末端激酶(JNK)/转录因子激活蛋白-1(AP-1)信号通路在百草枯致大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞间发生上皮-间充质转变(EMT)中的作用.[方法]体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN,终浓度0、25、50、100、200、300、400μmol/L百草枯处理细胞24 h,终浓度200 μmol/L百草枯分别处理细胞0、12、24、36、48、60、72 h,倒置相差显微镜观察细胞形态学的改变;四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞相对存活率,确定剂量和时间-效应关系;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;免疫荧光、免疫印迹法(Westernblot)分别检测上皮标志蛋白E-cad、ZO-1和间质标志蛋白FSP-1、α-SMA表达水平;Westernblot检测JNK/p-JNK、c-jun/p-c-jun、c-fos/p-c-fos蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测AP-1的转录活性,评估百草枯对JNK信号通路的激活作用.[结果]200 μmol/L百草枯诱导细胞由卵圆形或多边形的上皮细胞变成长梭形的间质细胞,细胞间连接消失,且时间越长形态学改变越明显.与对照组相比,100、200、300、400 μmol/L百草枯染毒组的细胞存活率明显降低(P＜0.05),200 μmol/L百草枯诱导细胞不同时间(24、36、48、60、72h)的细胞存活率明显降低(P＜0.05).200 μmol/L百草枯诱导细胞不同时间(12、24、36h):细胞凋亡率随诱导时间的延长而增加,尤其36h诱导组的细胞凋亡率较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞迁移指数、侵袭细胞数均明显升高(P＜0.05);上皮细胞标记蛋白E-cad、ZO-1表达下调,且下调的趋势随时间延长更加明显(P＜0.05);间质细胞标记蛋白FSP-1、α-SMA表达随时间的延长逐渐升高(P＜0.05);与对照组相比,100、200、300 μmol/L百草枯染毒可诱导p-JNK、p-c-jun、p-c-fos蛋白表达明显上调;200、300μmol/L百草枯染毒组较对照组比较,AP-1转录活性明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]百草枯呈剂量和时间依赖方式影响上皮细胞活性.百草枯能够诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT,JNK/AP-1信号通路可能参与了百草枯诱导肺泡上皮细胞EMT的发生.
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Slug在调控宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变中的意义
目的 观察宫颈鳞状细胞癌组织中Slug的表达情况,探讨其在宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用机制.方法 收集临床慢性宫颈炎标本25例、CIN 3级标本33例、宫颈鳞状细胞癌标本98例,分别用免疫组化、Western blot和实时荧光定量PCR检测Slug、E-cadherin、α-SMA蛋白及mRNA的表达情况.结果 Slug和α-SMA在宫颈鳞状细胞癌中高表达,并随恶性程度的升高而加强(P＜0.01);E-cadherin在癌组织中的表达降低(P＜0.01).结论 Slug可能通过调控EMT从而在宫颈鳞状细胞癌的侵袭转移过程中发挥作用.
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百草枯诱导肺上皮细胞上皮-间充质转变机制的研究进展
Paraquat(PQ) is a quick-acting contact herbicide,which can damage the skin,liver,lung,kidney,central nervous system and other organs of human and animals after poisoning.Among them,lung injury,especially pulmonary interstitial fibrosis is the most common and serious complication,which have brought a great financial burden to the family and the society.The mechanism of PQ poisoning is complex,becoming one of the hot research topics in Emergency and Public Hygiene.Recent years many researches have shown that epithelial-mesenchymal transition(EMT) plays an important role in idiopathic pulmonary fibrosis and tumor and is regulated by multiple levels,including genetic regulation and epigenetic regulation.PQ poisoning may also induced EMT through genetic regulation and epigenetic regulation,so as to cause pulmonary interstitial fibrosis.The recent progress in the mechanism of paraquat-induced EMT of alveolar epithelial cells is briefly reviewed below.
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阿司匹林通过调控EMT对结肠癌HT-29细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨非甾体类抗炎药阿司匹林对人结肠癌HT-29细胞株上皮-间充质转变(EMT)、迁移和侵袭能力的影响.方法 体外培养HT-29细胞株,使用不同浓度的阿司匹林(0、2.5、5、10、15 mmol/L)干预,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度阿司匹林对HT-29细胞生长增殖的影响,并计算出半数抑制浓度(IC50);分别采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time PCR)及蛋白印迹(Western blot)法检测阿司匹林IC50干预0、24、48 h后EMT上皮标志物(E-cadherin)和间充质标志物(N-cadherin、Vimentin、Snail1)mRNA以及蛋白质的表达;同时采用细胞划痕及Transwell小室侵袭实验观察阿司匹林对HT-29细胞迁移和侵袭的影响.结果 阿司匹林呈时间和剂量依赖性地抑制HT-29细胞生长增殖,IC50为5.086 mmol/L;阿司匹林干预48 h,HT-29细胞上皮标志物E-cadherin mRNA及蛋白质的表达均较对照组上调(P＜0.05);间充质标志物N-cadherin、Vimentin及Snail1 mRNA及蛋白质的表达均较对照组下调(P＜0.05);阿司匹林干预48 h,HT-29细胞的迁移及侵袭能力均减弱(P＜0.05).结论 非甾体类抗炎药阿司匹林通过上调E-cadherin表达,下调N-cadherin、Vimentin、Snail1表达从而抑制HT-29细胞EMT;阿司匹林可通过抑制EMT从而抑制HT-29细胞的迁移及侵袭能力.
