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苦参水提物促进L02和HepG-2细胞增殖的研究
目的:探讨不同浓度苦参水提液对细胞增殖的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(5、2、1、0.5、0.05、0.025、0.005 mg/mL)的苦参水提物在不同的时间点(24、48、72 h)对HepG-2、L02细胞增殖的影响.10 g/(kg·d)的苦参水提液予ICR小鼠灌胃,10％含药血清培养L02细胞,MTr比色法检测不同的时间点(24、48、72 h)对细胞增殖的影响.以△OD值(各组加药平均值-正常组平均值)表征抑制或促进作用.结果:苦参水提物浓度≤2 mg·mL-时对细胞增殖有一定促进作用,尤其以0.5、1 mg·mL-1的促进作用明显(P＜0.01),当苦参水提物浓度达到2 mg·mL-1,处理72 h时,细胞增殖出现抑制作用.含药血清能显著促进L02细胞的增殖.结论:苦参水提物在一定浓度范围内促进细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖.
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丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在肝癌细胞系中的表达及其促凋亡作用
目的:探讨Omi/HtrA2丝氨酸蛋白酶活性对肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法:检测Omi/HtrA2在正常肝上皮细胞L02细胞系和肝癌细胞系HepG2、Hep3B、PLC中的表达.用脂质体法将Omi/HtrA2小干扰RNA表达载体(psiRNA-Omi/HtrA2)转染至入HepG2细胞中,以RT-PCR和Western Blot法评价psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2表达的沉默效应.用MTT法和流式细胞仪检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后HepG2细胞凋亡的变化.结果:在L02细胞系和3种肝癌细胞系中,所有细胞系在mRNA水平和蛋白质水平均表达Omi/HtrA2,在肝癌细胞系中的Omi/HtrA2 mRNA和蛋白质表达水平均高于正常肝上皮细胞L02.psiRNA-Omi/HtrA2载体可特异性抑制HepG2细胞中Omi/HtrA2的表达.转染psiRNA-Omi/HtrA2载体的HepG2细胞凋亡下调.结论:Omi/HtrA2在肝癌细胞系中表达增高,它可能在促进肝癌细胞凋亡中有重要作用,Omi/HtrA2为肝癌的治疗提供了一个新的选择靶点.
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地塞米松对肝癌细胞聚集18F－FDG 能力的影响
目的：探讨地塞米松对肝癌细胞聚集18 F－FDG能力的影响。方法根据地塞米松浓度将肝癌细胞 HepG2和正常肝细胞 L02分为0、10－8、10－7、10－6、10－5、10－4 mol／L 浓度处理组，每组均各设平行孔，对各组HepG2细胞和 L02细胞预处理2、4、6、8、12、24 h，然后向各组加入1μCi 18 F －FDG 孵育1 h，应用计数仪检测各组细胞的放射性计数。结果对 HepG2细胞，当地塞米松浓度为10－8、10－7 mol／L 时，放射性计数减小（P ＜0．05），当地塞米松浓度为10－5、10－4 mol／L 时，放射性计数增高（P ＜0．05）。对 L02细胞，当地塞米松浓度为10－8、10－7、10－6 mol ／L 时，放射性计数减小（P ＜0．05），当地塞米松浓度为10－4 mol／L 时，放射性计数增高（P ＜0．05）。每组HepG2细胞18 F －FDG 放射性计数均高于 L02细胞（P ＜0．05），且经地塞米松处理后，两种细胞放射性计数差值增大（P ＜0．05）。结论地塞米松对肝脏细胞聚集18 F －FDG 存在双向调节作用，适量浓度可以扩大肝癌细胞与正常肝细胞摄取18 F －FDG 的差异。
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柳氮磺胺吡啶对HSC-T6和L02细胞增殖和凋亡的初步观察
目的:探讨柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine,SASP)对正常肝细胞和肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖和凋亡的影响.方法:以正常人肝细胞株(L02细胞)和大鼠肝星状细胞株(HSC-T6细胞)为研究靶细胞,用CCK-8比色法检测细胞增殖;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测HSC-T6细胞凋亡率;AO/EB染色法观察细胞凋亡形态.结果:同对照组比较,一定浓度范围的SASP对HSC的增殖具有显著的抑制作用,呈现时间和剂量效应.膜联蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双染显示SASP诱导HSC-T6凋亡也旱现时间和剂量效应;AO/EB染色出现凋亡细胞的特征性改变.而SASP干预L02后,与对照组相比,增殖和凋亡率均无统计学意义,AO/EB染色后,未出现凋亡细胞.结论:同等干预浓度的SASP能够选择性的抑制HSC增殖,诱导其凋亡.
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人肝细胞系L02胰岛素抵抗细胞模型的建立及鉴定
[目的]采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立人肝细胞IR模型,为研究IR的发生发展机制及筛选改善IR的药物提供一种简便可靠的IR细胞模型.[方法]以人肝细胞系L02为研究对象,在含5×10-7mol/L人胰岛素的培养液培养16h,未用高尝试胰岛素培养者为对照组.之后两组分别加入0、1、10、50、100、200ng/ml人胰岛素.采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)法检测培券液中残存葡萄糖含量.[结果]在各浓度的胰岛素剌激下,高胰岛素诱导组培养液中残存葡萄糖含量均显著高于对照细胞(P＜0.01)[结论]用含5×10-7mol/L胰岛素的培养液培养16h的L02细胞产生胰岛素抵抗,作为IR肝细胞模型可广泛用于胰岛素抵抗的研究.
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TIP-6通过诱导细胞自噬抑制培养的HepG2细胞和正常肝细胞增殖
目的:研究7-(4-甲氧基苯基)-5,8a-二苯基-1,2,3,7,8,8a-六氢咪唑[1,2-a]吡啶(TIP-6)对培养的人肝癌HepG2细胞和人正常肝细胞L02增殖的影响.方法:用MTT法和台盼蓝染色法检测TIP-6对细胞增殖的影响;相差显微镜观察细胞形态学的变化;流式细胞术(FCM)分析细胞周期改变;吖啶橙荧光染色观察自噬泡的变化;Annexin V/7-AAD和DAPI染色检测细胞凋亡;DNA电泳检测凋亡梯形带的产生.细胞免疫化学法测定NF-κB的表达.结果:TIP-6浓度为90～200 μLmol/L时,细胞增殖受到抑制,且与浓度、时间有关;当浓度为200 μmol/L、处理72 h时,两种细胞增殖数分别只有对照的12.10%和18.75%,空泡化也随剂量和时间的增加而加剧,空泡数目越来越多、体积越来越大;FCM结果显示,细胞被阻滞在G2/M期,且HepG2比L02细胞敏感.吖啶橙荧光染色证实自噬及自噬性细胞死亡会随着化合物浓度和时间增加而增多;Annexin V/7-AAD、DAPI染色及DNA电泳均证实凋亡并非TIP-6诱导HepG2及L02细胞增殖抑制的主要形式;细胞免疫化学法的结果显示,随着核转录因子NF-κB表达量的上调,自噬泡会随之增加,细胞增殖却相应减少.结论:TIP-6可能诱导自噬抑制培养的肝癌细胞和肝细胞增殖.自噬性细胞死亡可能与NF-κB蛋白的活化有关.
