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河豚毒素时间分辨荧光免疫分析法的初步研究
河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种存在于河豚鱼等生物体内的稳定的麻痹毒素,中毒时造成及呼吸神经中枢麻痹,引起呼吸停止,迅速死亡~([1]).为了控制TTX中毒的发生,应对河豚鱼养殖、销售进行严格管理,并进行TTX的检测.
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微囊藻毒素时间分辨荧光免疫分析方法
目的 建立高灵敏的徽囊藻毒素(MC-LR)的时间分辨荧光间接竞争免疫分析方法(MC-LR-TRFIA). 方法 以MC-LR与牛血清白蛋白的偶联物(MC-LR-BSA)包被96孔板为固相抗原,与游离MC-LR共同竞争有限的抗MC-LR多克隆抗体;用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪. 结果 该方法的灵敏度为0.01 μg/L,测量范围为0.01～20 μg/L,ED80、ED50和ED20分别为0.16、0.57和1.70 μg/L.平均回收率为101%,与MC-LF和MC-RR平均交叉反应分别为0.73%和35%.比较MC-LR-TRFIA和MC-LR-ELISA检测MC-LR,两者的相关系数为0.958.研究表明,MC-LR-TRFIA是目前报导的MC-LR检测中灵敏的方法. 结论 该方法适用于水样中MC-LR的定量检测.
关键词： 微囊藻毒素 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 免疫分析 -
不同人群胃蛋白酶原水平检测分析
目的 探讨正常及高危人群胃蛋白酶原(PG)水平的分布情况.方法 采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)测定人血清PG样本并对比分析PG Ⅰ、PG Ⅱ和PG Ⅰ/PG Ⅱ与胃黏膜病变的关系.结果 正常体检人群血清PG Ⅰ、PG Ⅱ和PG Ⅰ/PG Ⅱ的95%正常参考值范围分别为60～252μg/L,≤27.9μg/L和≥6μg/L;男性PG Ⅰ、PGⅠ/PGⅡ/水平明显高于女性(P<0.05);PGⅡ水平差异无统计学意义;PG Ⅰ/PGⅡ/水平随年龄增高而降低;PG Ⅰ水平在慢性浅表性胃炎(CSG)组-慢性萎缩性胃炎(CAG)组-胃癌(GCa)组的变化过程中逐渐降低,GCa组在PG Ⅰ≥240 μg/L和≤60μg/L均有较高的检出率,GU组PG Ⅰ≥240μg/L的异常检出率明显高于其他组(P<0.05);CAG和GCa组血清PG Ⅰ/PGⅡ比值明显低于其他组(P<0.05);血清PG Ⅰ≥240μg/L或≤60 μg、PG Ⅰ/PGⅡ≤6可作为GCa较为合适的筛查界定值.结论 血清PG水平明显高偏离正态分布,有明显的性别差异,与胃黏膜损伤程度有关.
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TRFIA法和ELISA法在HBsAg检测中的方法学评价
目的:对时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和ELISA两种方法检测HBsAg进行方法学评价.方法:先用TRFIA筛选出HBsAg阳性标本,再用ELISA试剂检测,并分组进行比较 结果:TRFIA法HBsAg(0.21-2.0ng/ml)标本40份中,ELISA法检测阳性24例,阳性符合率60％,差异有统计学意义(P＜0.05);而TRFIA法HBsAg(2.1-10.0ng/ml、10.1-50.0 ng/ml、50.1-100.0 ng/ml、＞100.1 ng/ml)标本分别为33、47、29、47份中,ELISA法检测阳性也分别为33、47、29、47例,阳性符合率100％；TRFIA法HBsAg分为0.21-2.0 ng/ml、2.1-10.0ng/ml、10.1-50.0 ng/ml、50.1-100.0 ng/ml、＞100.1 ng/m组,ELISA法检测S/CO值±s分别为2.9571±3.1833、12.5415±6.1660、22.1553±4.6074、24.8674±4.2402、25.2192±2.9074,前两组比较有统计学意义,而后三组比较无统计学意义 结论:采用TRFIA法定量检测HBsAg灵敏度更高,线性范围更宽,在低浓度标本检测中更具优势,更具有临床意义.
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乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制
目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒.方法 应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估.结果 对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好;200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4.5.用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3.4%～7.8%,6.9%～8.4%;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒.
关键词： 乙肝preS1抗原 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 检测 -
CA125时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制
目的研制CA125时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立CA125 TRFIA试剂盒,对试剂盒各项指标进行评价.结果该试剂盒的工作范围为10～600U/ml,分析灵敏度为1.07U/ml,批内、批间的精密度分别为4.5%～8.1%,6.9%～11.5%.与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～37U/ml.123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.939.结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.
关键词： CA125 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 试剂盒 -
时间分辨荧光免疫法定量检测CA125试剂盒临床应用研究
目的 对自制CA125定量测定试剂盒(时间分辨荧光免疫法)进行临床应用研究,为该试剂盒的临床应用提供科学依据.方法 按照自制试剂盒操作说明书对收集的410份血清进行测定,以电化学发光CA125定量测定试剂盒(Roche公司)为对照试剂.微粒子酶联免疫定量测定药盒(ABBOTT公司)为复核试剂,对测定的结果 进行统计学分析.结果 以电化学发光法为对照试验,其阳性符合率为98.35%,阴性符合率为98.81%,检验差异无统计学意义(P>0.05);相关系数为0.937,相关性良好;ROC曲线下面积为0.998.结论 本试剂盒检测性能能满足临床应用的需要.
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β-hCG时间分辨荧光免疫分析法的建立
目的:采用时间分辨荧光免疫分析技术建立高灵敏度、高特异性的β-hCG的快速全自动超微量检测方法.方法:以β-hCG单克隆抗体812#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+标记β-hCG单克隆抗体827#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.采用平衡饱和法建立β-hCG时间分辨荧光免疫分析,数据采用Logit-Log法函数数据处理程序处理.结果:特异性试验显示,与AFP、LH均无交叉反应;平均回收率为96.5%;健全性佳;50例血清β-hCG的TRFIA检测与CLIA(Beckman Acess)分析结果一致,相关系数为0.972.结论:β-hCG时间分辨荧光免疫分析法灵敏度高、稳定性好,具有很好的临床应用前景.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) β-HCG -
乙肝抗-HBc和抗-HBe在ELISA法出现假阳性原因分析
目的:探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒血清抗-HBc 与抗-HBe 出现假阳性的影响因素,旨在提高乙肝检验结果的准确性.方法:对采用酶联免疫吸附试验检测出的血清阳性标本抗-HBc112 例、抗-HBe118 例,用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法进行复检,统计假阳性率,并分析出现假阳性的因素.结果:采用ELISA 法检测出的血清阳性标本抗-HBc112 例、抗-HBe118 例,以TRFIA 方法为基准复检后假阳性分别为11 例、13 例,ELISA 法检测乙肝病毒抗-HBc 假阳性率为9.82%(11/112)、抗-HBe 假阳性率为11.02%(13/118).结论:ELISA 法检测乙肝抗-HBe 和抗-HBc 存在一定比例的假阳性率,除了ELISA 方法学和试剂盒本身影响因素外,标本处理不好、实验操作不当也是导致其出现假阳性的主要原因.检验人员应严格操作,降低假阳性率;对于疑为假阳性的标本,应进一步用多种方法复检,以保证检验结果的准确性.
