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肽核酸对癌基因的作用
基因测序使人们从基因水平认识了为某一蛋白质编码的基因,但对基因所编码的蛋白质及其功能的知识还甚少.以基因测序得到的信息为基础,人工合成反义寡核苷酸以抑制某些基因的表达,研究相关基因在活细胞中的作用是一种常用的研究基因-蛋白质功能的方法.在细胞内反义DNA或RNA分子是RNA酶H的底物,RNA酶H能将与反义分子结合的mRNA裂解而终止翻译过程,以后RNA酶H又与另一相关mRNA结合而导致其裂解,据此反义分子被重复使用且作用被放大.但由于DNA、RNA寡核苷酸在细胞内稳定性差,易被核酸酶降解,所含的磷酸二酯键极易与细胞内的蛋白质发生反应,在影响基因表达时常常受非特异性因素的影响及进入细胞后对特定的靶位选择性差,因而不是理想的核酸类药物.目前,人们已将注意力转移到第二代反义药物-肽核酸的研究上[1].
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5′-荧光素标记的RelA反义脱氧寡核苷酸在人白血病细胞HL-6O中的分布及稳定性
目的比较修饰型及未修饰型RelA反义脱氧寡核苷酸(AS-ODN)在人白血病细胞HL-60中的分布及稳定性.方法将荧光素(FAM)标记的硫代磷酸酯修饰型及未修饰型AS-ODN经脂质体介导或直接转染人HL-60细胞,应用荧光显微镜及流式细胞仪观察细胞内荧光的时相分布.结果发现1μmol/L修饰型AS-ODN进人细胞后,细胞内荧光强度6 h达到高峰.在有脂质体存在时,细胞内荧光明显增强,12 h后荧光减弱并逐渐消失;而AS-ODN直接转染细胞,细胞内特别是核内荧光强度明显比脂质体组弱.未修饰型AS-ODN直接或经脂质体介导转染,细胞内荧光强度均很弱,滞留时间不超过4 h.结论脂质体可以提高细胞对AS-ODN的摄取及核聚积,而硫代磷酸酯修饰型AS-ODN具有更好的稳定性.