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人肝微粒-小鼠3T3细胞联合模型评价氟咯草酮代谢后的体外细胞毒性
目的 建立人肝微粒-小鼠3T3细胞联合模型,并应用该模型评价氟咯草酮代谢后的体外细胞毒性.方法 以环磷酰胺和他莫西芬分别作为代谢增毒和代谢减毒的模型药物,建立人肝微粒体-小鼠3T3细胞联合模型.首先将环磷酰胺和他莫西芬分别配制成一系列浓度的工作溶液,加入人肝微粒体系孵育180 min后离心,将上清液与培养基1∶1混合获得孵育液.将孵育液与未经代谢的细胞供试液同时给予小鼠3T3细胞,给药48 h后,开展CCK-8试验,利用测得的吸光度(A)值,计算细胞供试液及孵育液的半数抑制浓度IC50以及IC50比值,并以IC50比值为指标评价模型药物的代谢毒性.待测化合物氟咯草酮采用与模型药物相同的方法.结果 环磷酰胺IC50比值大于535.31％,经人肝微粒体代谢后对3T3细胞毒性显著增加.他莫西芬IC50比值小于5.58％,经代谢后对3T3细胞毒性显著降低.符合二者作为代谢增毒和代谢减毒代表性药物的特征.氟咯草酮IC50比值大于391.38％,表明经代谢后对3T3细胞毒性增加.结论 成功建立人肝微粒-小鼠3T3细胞联合模型.待测化合物氟咯草酮经代谢后毒性增加,为进一步的毒理学研究提供参考依据.
关键词： 人肝微粒体-小鼠3T3细胞联合模型 氟咯草酮 代谢细胞毒性 -
氟咯草酮对大鼠原代培养支持-生精细胞氧化应激的影响
目的 探讨氟咯草酮对大鼠原代培养支持-生精细胞的影响及可能机制.方法 使用二步酶消化法建立大鼠原代支持-生精细胞共培养体系,接种于细胞培养板培养24 h后分别用10-6、104、10-8mol/L的氟咯草酮染毒培养液和溶剂对照培养液孵育24h,分别进行MTT实验和氧化应激指标检测.结果 10-6 mol/L氟咯草酮染毒组原代大鼠支持-生精细胞体系细胞死亡率较对照组和10-7、10-8 mol/L染毒组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).10-6 mol/L氟咯草酮染毒组过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、总谷胱甘肽过氧化物酶活力降低,总谷胱甘肽含量下降、丙二醛含量升高,与对照组和10-7、10-8 mol/L染毒组的差异均有统计学意义(P＜0.05);10-7 mol/L氟咯草酮染毒组过氧化氢酶活力较对照组下降,超氧化物歧化酶活力较10-8 mol/L染毒组降低,总谷胱甘肽含量较对照组和10-8 mol/L染毒组减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 氟咯草酮对原代大鼠睾丸支持-生精细胞可产生毒性损害作用,其机制可能与对睾丸支持-生精细胞的氧化应激有关.
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氟咯草酮诱导共培养大鼠睾丸支持-生精细胞凋亡及其可能机制
[目的]观察氟咯草酮(FLC)对共培养大鼠睾丸支持-生精细胞的影响,探究可能的机制.[方法]采用0.1％胶原酶和0.1％透明质酸酶两步酶消化法,分离得到原代睾丸支持细胞和生精细胞,共培养24h后,分别用0.01、0.10、1.00 μmol/L的FLC染毒24h.生精细胞脱落试验检测FLC对生精细胞脱落的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量-聚合酶链反应检测凋亡通路关键信号分子和p38 MAPK的mRNA表达. [结果]FLC染毒可引起支持-生精细胞共培养体系中生精细胞脱落增加,在0.01、0.10和1.00 μmol/L浓度组,生精细胞脱落百分比分别为(238.17±3.78)％,(265.89±9.51)％和(308.73±17.05)％.随着FLC浓度升高,早期凋亡率分别升高至(10.80±1.86)％,(13.52±0.72)％和(16.62±0.35)％;与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05或尸＜0.001).在0.10和1,00 μmol/L浓度下,FLC染毒可明显上调凋亡线粒体通路中Bax、@t-c、Caspase-9和Caspase-3的mRNA表达(P＜0.05或P＜0.001),同时下调BcL2的mRNA表达(P＜0.05);1.00μmol/L的FLC可引起FasL与p38 MAPK的mRNA表达升高(P＜0.05). [结论]FLC染毒可影响大鼠睾丸支持-生精细胞共培养体系中凋亡通路相关信号分子的mRNA表达,p38MAPK信号通路可能参与了FLC诱导的细胞凋亡.
关键词： 氟咯草酮 雄性生殖毒性 支持-生精细胞共培养 凋亡 信号通路 -
氟咯草酮生物毒性的研究现状
氟咯草酮(FLC)是一种吡咯酮类芽前施用的选择性除草剂,主要施用于谷物、向日葵、土豆等庄稼中,以防治多种阔叶类杂草和部分禾本科杂草.同类除草剂还有达草灭、氟啶酮、氟吡酰草胺等.2010年欧洲食品安全局(EFSA)发表了危险度评估报告,本文重点介绍该评估报告中的新信息及近几年FLC生物毒性研究进展.
