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阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR检测方法的研究

孟双;李娟;白雪梅;王艳;叶长芸

摘要: 目的 建立阪崎肠杆菌的TaqMan PCR检测方法.方法 将阪崎肠杆菌的菌悬液连续10倍稀释后与健康人新鲜粪便混匀,制备成1.2×10(0)~1.2×10(8) cfu/ml梯度浓度的粪便模拟标本并提取DNA,用以评价阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法对临床模拟标本检测的灵敏度、特异性和稳定性.结果 实时荧光TaqMan PCR法对阪崎肠杆菌粪便模拟标本的检测灵敏度为1.2×10(3) cfu/nd;其线性检测范围为:1.2×10(3)~1.2×10(8) cfu/ml;在稳定性评价中,对含菌量为1.2×10(8)、1.2×10(6)和1.2×10(4) cfu/ml的粪便模拟标本进行实时荧光TaqMan PCR法重复检测10次,结果显示扩增反应Ct值的变异系数(CV)为0.65%~1.47%;在特异性评价中,除了阳性对照其余样本均未见特异性扩增曲线.结论 本研究建立了阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法.

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