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孕妇血浆游离胎儿DNA中β-地中海贫血突变的基因诊断
目的 建立一种孕早早期、简便、快速且无创伤性检测胎儿常见β-地中海贫血突变的导流杂交检测技术,用于β-地中海贫血的产前诊断方法.方法 采用PCR技术与低密度基因芯片导流杂交技术相结合,设计3组PCR引物单管多重PCR体系及18种DNA探针,用于快速检测100例妊娠6～14w贫血孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型β-地中海贫血.结果 40例贫血孕妇血浆中游离胎儿DNA中,检出10例β-地中海贫血突变,分别为4例杂合子CD41/42(-TTCT),3例-28(A→G),3例CD17(A→T)突变型.结论 采用该检测方法能快速准确检测出常见β-地中海贫血的突变,对于防止新的患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有着重要的作用.
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新生儿干血斑β地中海贫血筛查方法的研究
目的：探讨全自动毛细管微量血红蛋白电泳技术在新生儿β地中海贫血筛查中的应用价值，并寻求有效的筛查方法。方法使用 Sebia 全自动毛细管电泳仪对145904例新生儿滤纸干血斑标本进行血红蛋白（Hb）电泳；对95059例标本的电泳分析结果以 HbA 界值法判读β地贫筛查结果，对50845例标本的电泳分析结果以 HbA 值结合HbA2／HbA 比值的综合分析法判读β地贫筛查结果，召回筛查阳性者进行地贫基因诊断；随机对600份标本的电泳结果同时以上述两种方法判读β地贫筛查结果，同时进行基因检测作为β地贫诊断的金标准，统计比较两种判读方法的差异。结果HbA 界值法筛查出的1580例阳性标本中经基因检测确诊为β地贫的有716例，确诊符合率45.32％，假阳性率为54．68％；综合分析法筛查出的1266例 阳 性 标 本 中 930例经基因检测确诊为β地贫，符合率73.46％，假阳性率为26．54％。同时对600例新生儿干血斑分析结果表明，HbA 界值法和综合分析法的敏感度和特异度分别是54．55％、90．91％和97．58％、99．31％，两者的筛查准确性分别为96％和99％。统计结果表明，综合分析法的敏感度、阳性预测值和筛查的准确性显著高于 HbA 界值法．结论新生儿干血斑标本经毛细管血红蛋白电泳后，利用包含 HbA、HbA2组分的含量及 HbA2／HbA 比值的综合分析法判读电泳结果，筛查新生儿β地贫，灵敏度和准确性显著提高，假阳性率明显降低，值得推广应用。
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CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42的构建及其稳定转染HeLa细胞模型的建立
目的:构建CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42和HeLaCD41-42细胞模型,为β地中海贫血CD41-42突变型细胞、小鼠模型建立及进一步基因治疗提供依据.方法:在β地中海贫血CD41-42突变的纯合子患者外周血中提取DNA,PCR法扩增含有βCD41-42的β-珠蛋白基因片段.将PCR产物βCD41-42珠蛋白基因克隆到pEGFP-C2载体中,用脂质体2000将pEGFP-C2-βCD41-42质粒转染HeLa细胞,观察转染后βCD41-42在HeLa细胞中荧光表达情况.RT-PCR法检测βCD41-42在HeLa细胞中的表达.结果:重组质粒pEGFP-C2-βCD41-42转染HeLa细胞24 h后细胞发出绿色荧光,G418筛选后,有大量荧光表达.RT-PCR扩增得到227 bp的特异性条带,而稳定转染pEGFP-C2空质粒的HeLa细胞中不表达特异性条带.结论:成功构建β地中海贫血pEGFP-C2-βCD41-42突变基因重组载体,并成功构建HeLaCD41-42细胞模型.
关键词： β地中海贫血 CD41-42突变基因 重组载体 Hela细胞 -
地中海贫血基因与血常规参数之间的相关性究
目的:探讨地中海贫血基因与RBC、HB、MCV和HCT之间的关系.方法:通过地中海贫血基因检测,把99例α地中海贫血基因缺失的标本,49例β地中海贫血基因缺失的标本、109例缺铁性贫血标本和79例健康体检人员的血常规参数作为研究对象.利用血细胞分析仪,对上述标本的RBC、HB、MCV和HCT等血常规参数进行分析.结果:α地中海贫血组的RBC、HB、MCV和HCT与健康组比较,都有显著性差异,P<0.05,差异均有统计学意义.结论:α,β地中海贫血的MCV比缺铁性贫血的都低,有可能是基因缺失造成,P<0.05,差异均有统计学意义.提示上述指标可以作为辅助鉴别诊断缺铁性贫血的指标.
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贵州荔波瑶族β-地中海贫血筛查及基因分析
目的对贵州省荔波县瑶族(包括白裤瑶、青裤瑶、长衫瑶3个支系)进行β-地中海贫血基因携带者的人群筛查并分析其基因型.方法采用常规血细胞自动生化分析仪检测血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)等5项血液学指标及抗碱血红蛋白(HbF)和血红蛋白A2(HbA2)定量测定对人群进行β-地中海贫血初筛,然后用常规酚-氯仿抽提法提取β-地中海贫血携带者DNA,再经PCR-反向点杂交法对β珠蛋白进行突变基因分析.结果在受检的586人中(男性280例,女性306例),检出β-地中海贫血携带者26例,其中男性11例,女性15例,检出率为4.437%.经基因分析该地人群的β-地中海贫血基因突变类型主要为CD41-42(TCTT)移码突变1例(3.57%)和CD17(A→T)无义突变6例(21.4%);尚有19例待检测.结论完成对贵州荔波瑶族进行的β-地中海贫血调查,并获取其流行病学资料及基因类型特征,为今后对该地人群进行婚姻指导、产前诊断、提高人口素质具有重要意义.
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广东省β-地中海贫血基因突变类型研究
目的 了解广东省β-地中海贫血各基因型的频率和分布范围.为该病的产前诊断和遗传咨询提供参考.方法 收集2005年1月至2009年1月广州市送检血样3247例和深圳市送检血样2984例,采用PCR和反向点杂交(RDB)方法检测β-地中海贫血基因突变类型.结果 广州市的血样中检测到751例带有β-地中海贫血基因突变,阳性检出率为23.13%(751/3247);包括10种不同的突变类型,分别为CD41-42(-TCTT)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、CD17(A→T)、CD71-72(+A)、βE、IVS-I-1(G→T)、CD43(G→T)、-29(A→G)、CD14-15(+G),突变频率分别为42.53%(336/790)、25.19%(199/790)、12.66%(100/790)、10.89%(86/790)、3.29%(26/790)、2.15%(17/790)、1.27%(10/790)、1.14%(9/790)、0.51%(4/790)、0.38%(3/790),其中常见的是CD41-42(-TGTT),占广州市全部基因突变的42.53%(336/790).深圳市的血样中检测到179例带有β-地中海贫血基因突变,阳性检出率为6.00%(179/2984);包括8种不同的突变类型,除C1M3(G→T)和CD14-15(+G)未检测到之外,其他6种突变和广州市的突变类型相同,其中常见的是ⅣS-Ⅱ-654(C→T).占深圳市全部基因突变的40.44%(74/183).结论 β-地中海贫血基因在广东省不仅突变频率高,而且有明显的遗传异质性和地域差异.CIMl-42(-TGTT)、ⅣS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、CD17(A→T)是4种主要的突变类型.
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贵州西江苗族β地中海贫血筛查及基因分析
目的对贵州省西江苗族进行了一次大样本的β地中海贫血筛查及基因分析.方法采用HbF和HbA2定量测定对人群进行β地中海贫血初筛,然后用常规酚-氯仿抽提法提取β地中海贫血携带者DNA,再经PCR-反向点杂交法对β珠蛋白进行突变基因分析.结果在受检的890人中,共检出β地中海贫血携带者 37例,发生率为4.16%.经基因分析该地人群的β地中海贫血基因突变类型主要为CD 41-42(TCTT)移码突变(54.1%)和CD17(A→T)无义突变(45.9 %).结论完成对贵州西江苗族进行的β地中海贫血调查,获取其流行病学资料及其基因类型特征,对该地人群进行婚姻指导、产前诊断、提高人口素质具有重要意义.
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反向点杂交法检测β地中海贫血在产检中的应用
目的 探讨反向点杂交(RDB)法检测在产检中筛查β地中海贫血的应用价值.方法 采用RDB法,检测54例临床似诊为β地中海贫血患者.结果 在54例样本中,检出β地贫基因携带者17人.结论 ROD法在检测β地贫中,具有高通量、特异性强、操作简便无需接触放射性等优点.
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中间型β珠蛋白生成障碍性贫血患者及其父母中医证候家系调查
目的:研究中间型β珠蛋白生成障碍性贫血患者的中医证候与遗传背景的关系.方法:调查中间型β珠蛋白生成障碍性贫血患者(78例)及其父母(120例)的中医证候类型,检测各家系成员的基因突变类型.根据基因突变型对各家系的遗传特点进行归类,分别分析不同家系类型的子代与亲代在中医证候出现频率和中医证候积分方面的差异.结果:根据各家系的遗传特点可将所调查的全部73个家系归为两类.家系类型1的遗传特点是亲代中一人的基因型正常,子代的基因型与亲代中另一人完全相同,均为杂合子.在这22个家系中,杂合子子代出现频率较高的症状体征有6项:自汗、口干咽燥、面色淡白或萎黄、潮热盗汗、倦怠乏力、爪甲色淡;杂合子亲代出现频率较高的症状体征有5项:腰膝酸软、头晕目眩、畏寒肢冷、耳鸣、口干咽燥;正常亲代出现频率较高的症状体征有3项:腰膝酸软、头晕目眩、自汗.杂合子子代中医证候积分高于杂合子亲代及正常亲代,但差异无统计学意义(P>0.05).家系类型2的遗传特点是亲代均为杂合子,子代为亲代基因突变型的双重组合.在这51个家系中,子代出现频率较高的症状体征有9项:面色淡白或萎黄、自汗、口干咽燥、爪甲色淡、潮热盗汗、倦怠乏力、易感冒、手足心热、身目发黄;亲代出现频率较高的症状体征有3项:腰膝酸软、畏寒肢冷、头晕目眩;子代中医证候积分明显高于亲代,差异有统计学意义(P<0.01).结论:在本次所调查的两种不同类型的家系中,其子代(中间型β珠蛋白生成障碍性贫血患者)的中医证候(临床表现)以阴血亏虚为主,而亲代的中医证候则偏重于肾虚.子代与亲代在中医证候(临床表现)方面的差异可能与基因突变型以及一些遗传修饰成分等都有关.
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补肾益髓法治疗β地中海贫血的平行对照临床研究
目的:研究补肾益髓代表方益髓生血颗粒治疗β地中海贫血的临床效果及安全性.方法:采用随机、单盲和安慰剂平行对照进行60例患者临床观察,疗程3个月,观察治疗前后症状、血红蛋白、红细胞、胎儿血红蛋白、网织红细胞水平变化和肝、脾B超.结果:治疗组患者自疗程第1个月起至第3个月结束,各项血液学参数(血红蛋白、红细胞、胎儿血红蛋白、网织红细胞)均有提高,与治疗前相比,差异有统计学意义(P＜0.01);肝脾肿大缓解(P＜0.05);中医临床症状改善及动态观察与血液参数提高一致(P＜0.01);未见副作用.安慰剂组患者各项血液指标及中医证候治疗前后无明显改善,肝脾肿大未见缓解(P＞0.05).结论:益髓生血颗粒治疗β地中海贫血疗效显著,未见毒副作用.
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中药益髓生血颗粒对β地中海贫血患者骨髓α血红蛋白稳定蛋白及红系转录因子GATA-1基因表达的影响
目的:研究中药益髓生血颗粒对β地中海贫血患者α血红蛋白稳定蛋白(alpha-hemoglobin stabilizing protein,AHSP)及红系转录因子GATA-1表达的影响,探讨中药治疗β地中海贫血的临床疗效及分子机制.方法:2004年9月～2005年2月收治中间型β地中海贫血患者12例,采用益髓生血颗粒治疗3个月.比较治疗前后患者血红蛋白、胎儿血红蛋白、红细胞、网织红细胞等血液学参数的变化;提取其中8例患者用药前后骨髓有核细胞总RNA,采用实时PCR技术检测AHSP mRNA和转录因子GATA-1 mRNA的表达.结果:治疗后患者临床症状明显改善,其血红蛋白、胎儿血红蛋白、红细胞和网织红细胞等血液学参数较治疗前明显升高,差异有统计学意义.其中8例患者骨髓有核细胞AHSP和GATA-1 mRNA的表达量与治疗前比较有明显升高,差异有统计学意义.结论:中药益髓生血颗粒治疗β地中海贫血的可能机制之一为通过调节β地中海贫血患者体内骨髓有核细胞转录因子GATA-1 mRNA的表达,使GATA-1与其他转录因子协同作用,上调AHSP mRNA的表达,使AHSP合成增加以结合地中海贫血患者体内游离的相对过剩的α珠蛋白,阻止其在活性细胞中的沉积,遏制其对红细胞的毒害作用,从而减少溶血的发生.
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四川自贡地区缺铁性贫血和β地中海贫血鉴别诊断公式的应用
目的 评价缺铁性贫血(IDA)和β地中海贫血(β-TT)的鉴别诊断公式在四川自贡地区人群中的应用价值.方法 选取760例来自四川自贡地区患者,其中β-TT 255例、IDA505例,应用红细胞(RBC)参数计算出10个鉴别公式(分别为Shine and Lal公式、Green and King公式、Mentzer公式、RDWI公式、Srivastava公式、Ricerca公式、England and Fraser公式、Ehsani公式、Sirdah公式和Huber-Herklotz公式)的敏感度(SEN)、特异度(SPE)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、约登指数(YI),并绘制受试者工作特征(ROC)曲线.结果 Mentzer公式的诊断价值高,其YI高(80.1％),诊断IDA的SEN为97.0％,SPE为83.1％,曲线下面积(AUC)高(0.971);其次为RDWI公式,YI、SEN、SPE、AUC分别为72.8％、95.2％、77.6％、0.961.结论 在四川自贡地区人群中Mentzer公式和RDWI公式具有较好的鉴别诊断IDA和β-TT的能力.
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儿童β地中海贫血11例家系分析
目的 探讨河南地区β地中海贫血患儿的临床特点.方法 回顾分析11例河南籍β地中海贫血患儿及家系成员的临床资料.结果 11例患儿中,HbE病2例,轻型β地中海贫血合并遗传性椭圆形红细胞增多症1例,轻型β地中海贫血复合缺铁性贫血1例,其余7例单纯为轻型β地中海贫血.11例患儿血红蛋白电泳均有异常,其中HbA2和/或HbF增高9例,出现HbE条带2例.共检测到3种β基因突变类型,分别为IVS-II-654(C>T)突变7例,CD17(A>T)和CD26(G>A)突变各2例.11例患儿家系中,6例祖籍河南,5例父母中一方来自地中海贫血高发区.结论 β地中海贫血是一种常见的单基因遗传病,河南地区存在β基因突变.家系调查、红细胞参数、血红蛋白电泳等有助于诊断和发现新病例.
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小儿重型β地中海贫血肝活检63例临床分析
目的 分析小儿重型β地中海贫血(β-thalassemia,β地贫)的肝脏病理特点,探讨肝活检的方法与安全性.方法 对1998年10月-2006年10月住院的63例重型β地贫患儿行肝活检,观察肝脏病理改变,并结合临床资料进行分析.结果 共作66例次肝活检,均1次成功,成功率100%.肝活检显示肝组织内有不同程度铁沉积,中重度占42例(66.7%),铁沉积程度与血清铁蛋白(SF)水平呈明显正相关(r=0.70,P＜0.01).检出肝纤维化54例(85.7%),年龄(7.3±3.2)岁,SF在纤维化患儿中明显升高(P＜0.01),但纤维化分期与SF、肝脏铁沉积程度无相关性(r=0.12、0.21,P＞0.05).结论 我国小儿重型β地贫存在肝脏铁含量重、肝纤维化普遍且发生年龄早的特点,与不规范治疗有关.小儿地贫肝活检安全、可行,能为治疗提供重要指导.
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重型β地中海贫血的治疗进展
β地中海贫血是β-珠蛋白基因缺陷导致血红蛋白中β-珠蛋白链合成减少或缺乏,红细胞寿命缩短的一种遗传性溶血性贫血.临床表现轻重不一,重型患者可因贫血、脓毒症和全身衰竭死亡.输血、袪铁、脾切除术等为既往常用的治疗方案.因铁过载、免疫功能低下和治疗效果欠佳等原因,新的治疗方案应运而生,包括药物诱导γ-珠蛋白基因活化、异基因造血干细胞移植以及基因治疗.文章综述重型β地中海贫血治疗的研究进展.
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重型β地中海贫血患者铁过载相关心脏损害的评价指标
长期输血导致的铁过载相关心脏损害是重型地贫患者的主要死亡原因.如果能及时发现铁过载导致的心脏疾患,进行有效的铁螯合治疗,将大大提高患者的生存率.文章介绍现有铁过载心脏损害评估方法,尤其是心脏磁共振检查在铁过载心脏损害检测方面的重要意义.
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红细胞及网织红细胞参数在轻型β地贫与缺铁贫鉴别临床研究
目的 探讨血常规红细胞参数及网织红细胞参数在轻型β地中海贫血和缺铁性贫血的临床鉴别诊断中的应用价值.方法 将98例缺铁性贫血患者设为缺铁贫组,46例轻型β地中海贫血设为地贫组,44例正常体检人员设为对照组.比较3组血常规红细胞参数及网织红细胞参数水平.结果 红细胞参数方面,缺铁贫组、地贫组MCV、MCH、MCHC出现降低,与对照组比较有显著差异(P＜0.05)；缺铁贫组RDW升高,地贫组RDW与对照组比较无显著差异(P＞0.05)；网织红细胞参数方面,缺铁贫组、地贫组RET#、RET％、IRF、MFR％、HFR％均出现升高,LFR％出现降低,且地贫组变化更为显著；缺铁贫组Ret-He出现降低,与地贫组、对照组比较均有显著差异(P＜0.05),而地贫组与对照组比较无显著差异(P＞0.05).结论 红细胞及网织红细胞参数在轻型β地中海贫血和缺铁性贫血的临床鉴别诊断中具有重要的意义.
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用PCR-RFLP检测血红蛋白E基因CD26突变
目的 建立PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)法检测血红蛋白E(HbE)基因CD26突变.方法 对HbE复合β地中海贫血(β地贫)家系的患者基因组DNA进行PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶MnlⅠ消化,通过分析酶切产物PAGE图谱确定是否携带CD26突变.结果 筛选出2个家系中4例CD26突变携带者.结论 CD26突变在四川人群中有一定的频率,PCR-RFLP方法能快速、准确、特异地检测CD26突变.
关键词： 血红蛋白E β地中海贫血 基因 限制性片段长度多态性 -
血红蛋白A2筛查β地中海贫血的价值
目的 评价全自动毛细管电泳法检测血红蛋白A2(HbA2)在β地中海贫血(以下简称地贫)筛查中的价值,建立适合本实验室的HbA2佳截断值.方法 收集本实验室2016年7月至2017年8月进行地贫筛查和基因诊断的外周血样本2 107例.以基因诊断结果为金标准,计算敏感性、特异性、阴性似然比和阳性似然比、尤登( Youden)指数等评价指标,绘制ROC曲线确定HbA2筛查β地贫的佳临界值.结果 地贫基因检测阴性1 863例,β地贫携带者244例;HbA2结果分别为(2.83± 0.19)%和(5.38±0.63)%. HbA2筛查β地贫ROC曲线下面积(AUC)为0.993,95%的可信区间0.980～1.000.以尤登指数大值为佳临界值,HbA2佳截断值为3.35%,敏感性为98.4%,特异性为99.5%,阴性似然比0.016,阳性似然比183.246,尤登(Youden)指数0.978.结论 全自动毛细管电泳法检测HbA2对筛查β地贫的价值较高,HbA2的佳截断值为3.35%.
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一罕见 β地贫基因CD37(TGG→TAG)突变复合 ɑ地贫家系的分子遗传学特征
目的 探讨1个罕见β地贫基因CD37(TGG→TAG)突变复合ɑ地贫家系的分子遗传学及血液学表型特征.方法 采集该家系两代成员外周全血样本,并进行血液学表型以及红细胞参数和血红蛋白(Hb)分析.采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)方法、PCR结合反向点杂交(PCR-RDB)法以及DNA测序方法对家系成员外周全血样本进行常见的地贫基因类型检测和β-珠蛋白基因序列分析.结果 该家系成员中先证者及其父亲、大姐平均红细胞体积(MCV)分别为55.4 fL、67.8 fL和63.0 fL,平均红细胞血红蛋白量(MCH)分别为17.5 pg、21.0 pg和19.5 pg,血红蛋白A2(HbA2)分别为5.9％、6.2％、4.9％;其母亲和二姐的MCV和MCH降低,但Hb分析结果均正常.基因分析结果示:先证者携带罕见β地中海贫血CD37(TGG→TAG)突变,其父亲和大姐携带CD37(TGG→TAG)突变复合-ɑ3.7杂合缺失,二姐携带-ɑ3.7杂合缺失,母亲未见异常.结论 罕见β地贫基因CD37(TGG→TAG)突变复合-ɑ3.7杂合缺失的血液学表型与单纯CD37(TGG→TAG)突变杂合子类似,表现为轻型β地贫特征.
关键词： β地中海贫血 α地中海贫血 CD37(TGG→TAG) 点突变 家系
