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280例β-地中海贫血高风险患儿的产前基因诊断分析
β-地中海贫血(β-地贫)是由β-珠蛋白链合成减少或缺乏引起的发病率很高的血液系统常染色体隐性遗传性疾病,发病原因是由于血红蛋白四聚体α-链和非α-链之间生成数量上失去平衡而导致溶血.华南地区为高发地区,广东β-地贫携带率为3.36%[1].目前,β-地贫重症患者缺乏有效的根治方法,患者大都幼年夭折[2].因此,高风险胎儿产前诊断,防止重症地贫儿出生,对优生学具有重要意义.我院应用聚合酶链反应(PCR-RDB)法对β-地中海贫血高风险胎儿进行了产前基因诊断,现报道如下.
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磷脂酰丝氨酸红细胞与β地中海贫血高凝状态关系的研究进展
β地中海贫血是一种遗传性血红蛋白病,其特征为β珠蛋白链合成减少或缺乏.红细胞内过多的α珠蛋白链不能与β珠蛋白链结合,形成不可逆的高铁血红素结合到细胞膜的胞质面.细胞膜蛋白和脂质氧化损伤,使红细胞膜磷脂不对称性丧失,导致红细胞各种膜缺陷和磷脂酰丝氨酸(PS)外翻.研究表明,红细胞膜脂质过氧化伴随PS外翻可在β地中海贫血的高凝状态及血栓栓塞风险中发挥病理作用.红细胞膜表面PS暴露,倾向于在循环中产生促凝血微粒;且PS红细胞与血小板及内皮细胞相互作用促进凝血酶生成.
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重叠延伸PCR法构建β地中海贫血基因突变质粒标准品
目的:构建含β地中海贫血(简称β地贫)-28(A ＞G)与IVS-2-654(C ＞T)突变基因的质粒标准品.方法:以含β珠蛋白野生型基因的质粒DNA为模板,采用重叠延伸PCR( Overlap extension PCR,OE-PCR)定点诱变后行TA克隆的方法分别构建含-28(A ＞G)与IVS-2-654(C＞T)突变基因的质粒.结果:DNA测序表明:重组质粒1的确含β地贫-28(A＞ G)突变基因,β珠蛋白-28处的碱基已由A突变成G,其余序列与野生型完全相同;重组质粒2的确含IVS-2-654(C ＞T)突变基因,β珠蛋白IVS-2-654处的碱基已由C突变成T,其余序列与野生型完全相.成功实现了定点诱变.结论:分别成功地构建了含β地贫-28(A ＞G)与IVS-2-654(C＞T)突变基因的质粒标准品,进一步为HRM技术检测β地贫基因突变方法的建立及该病其它基因诊断与筛查技术的研究奠定了实验基础.
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育龄人群稀有β地中海贫血基因突变分析
目的 调查研究佛山地区育龄人群稀有β地中海贫血(β地贫)基因突变的类型.方法 对近4年来佛山市第一人民医院送检的育龄人群(年龄21岁～43岁,均为佛山籍户口)的血液标本,进行常规的地贫血液学表型分析和地贫基因诊断,其中以反向点杂交法初筛出β地贫患者,另外对常规基因检测不能确诊的基因突变进行β珠蛋白基因序列测定.结果 共发现了8种稀有的β地贫基因突变:IVS-Ⅱ-2(-T)、CD37(TGG＞ TAC)、CD89-93(-AGT-GAGCTGCACTG)、CD19(AAC＞ AGC)、PolyA(AATAAA＞ AATGAA)、CD106(CTG＞ GTG)、CD29(GGC＞ GAC)和CD22(GAA＞ GGA).另外尚有3例可疑β地贫样本经测序分析仍未能检出β地贫.结论 佛山地区育龄人群中β地贫的基因突变分布非常广泛而且类型比较丰富.
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β0纯合子β地中海贫血基因分析及益髓生血颗粒治疗的效果
目的 探讨β0纯合子β地中海贫血的基因突变类型及使用中药益髓生血颗粒(CTM)治疗的临床效果.方法 采用反向斑点杂交技术进行基因检测诊断为β0纯合子β地中海贫血21例.男13例,女8例;年龄4～16岁,平均9.5岁.应用CTM治疗,10 g/次,3次/d,3个月为1个疗程.结果 21例患儿有5种基因突变类型,其中密码子41-42(-TTCT)框架位移多,占52%.经治疗后症状改善,Hb、RBC、Ret及胎儿血红蛋白(HbF)值均有增高,治疗前后比较差异显著(Pa＜0.01).结论 CTM治疗β0纯合子β地贫有一定效果.
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药物基因调控治疗β珠蛋白生成障碍性贫血研究进展
β珠蛋白生成障碍性贫血(地贫)是一种常见的常染色体单基因缺陷所致的遗传性慢性溶血性贫血.人们一直期望其能成为第1个通过基因矫正而治愈疾病.但种种原因导致该疗法离临床应用尚远.目前药物基因调控治疗此病经过20多年研究,在重新激活已近乎关闭的γ珠蛋白基因高表达方面取得较大进展,尤其是中药的发具有良好前景,本文从药物基因调控治疗的理论基础、激活γ珠蛋白基因的国内外进展及目前存在问题和展望作一综述.
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不同剂量铁螯合剂治疗高量输血重型β珠蛋白生成障碍贫血患儿血清铁蛋白的变化
目的 探讨采用不同剂量铁螯合剂治疗高量输血重型β珠蛋白生成障碍贫血(地贫)患儿1年后的血清铁蛋白(SF)的变化.方法 以美国Beckman-Access 化学发光仪分别于2005年4月和2006年3月每月定期检测68例高量输血维持血红蛋白100 g/L以上的重型β地贫患儿血SF水平.男41例,女27例;年龄4～15岁.每月使用铁螯合剂(去铁胺或去铁酮)≥20 d 6例(A组),10～15 d 13例(B组),5～9 d 24例(C组),≤3 d 25例(D组),健康对照组(E组)20例.男女各10例.结果 2005年4月和2006年3月检测血SF水平分别为A组(2205.02±707.82) μg/L和(2285.29±693.14) μg/L,B组(4028.24±752.11) μg/L和(4736.69±841.50) μg/L,C组(2462.81±937.16) μg/L和(3356.79±994.85) μg/L,D组(2390.42±730.94) μg/L和(3286.12±641.12) μg/L,E组(213.10±42.88) μg/L和(217.25±57.42) μg/L.2006年3月的SF均高于2005年4月,除A组及E组外差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 高量输血重型β地贫患儿应长期坚持足量应用铁螯合剂,每月按体质量计算足量使用20 d以上才能使SF增高不明显,SF已明显增高才开始用铁螯合剂患儿应增加每日用量.
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血红蛋白E复合β地中海贫血19例
血红蛋白E(HbE)是世界上第4个被发现的异常血红蛋白,梁徐等于1965年根据Hb电泳行为报告广西HbE复合β地中海贫血综合征1例,1979年梁植权等首次经化学结构分析证明我国有HbE的存在.两种遗传基因在一个人同时存在经常会遇到,现将我们所见的19例儿童报道如下.
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河南省β地中海贫血基因突变类型的检验研究
目的: 探讨河南省β地中海贫血基因突变类型及其基因诊断方法.方法: 本研究综合应用突变引物延伸扩增(MOEA)及巢式PCR等新技术,设计了针对中国人β地贫常见的5种基因突变的检测方法.结果: 完成了河南籍8个家系成员的基因筛查诊断,14条β地贫阳性染色体的检测结果为:IVS-Ⅱ-654(C→T)5条,CD41-42(-TTCT)3条,TATA box-28/-29 2条,CD17(A→T)2条,另2条染色体突变性质不清.检出率达85.7%.对1例高危胎儿作了产前诊断,基因型分另为CD41-42/A,建议继续妊娠,经产后取材验证,结果与产前诊断一致.结论: 提示河南省β地贫基因突变的种类与频率和我国南方诸省基本相同.应用本文设计的方法可对90%以上中国人β地贫快速作出基因诊断和产前诊断,具有重要的临床意义.
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β地中海贫血基因治疗的研究进展
基因治疗是根治β地中海贫血研究的重点方向.位点控制区(LCR)的发现以及新型基因转移系统不断开发研制,给导人正常β珠蛋白基因以实现基因治疗的设想带来了希望但同时也产生了新课题;与此同时,分别从DNA和RNA水平对受损的β珠蛋白基因进行修正治疗的研究也在开展当中.随着珠蛋白基因表达调控机制研究不断深入,同时开发出安全高效的新型病毒载体,有可能终实现β地中海贫血基因治疗.
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血红蛋白E及血红蛋白E复合β地中海贫血的临床分析
目的:探讨血红蛋白E(HbE)及HbE复合β地中海贫血(β地贫)的临床与实验诊断的关系.方法:应用红细胞参数检查、血红蛋白电泳、异常血红蛋白结构分析及β地贫基因检查确诊本文病例,并作家系调查与遗传指导.结果:HbE杂合子的血液学检查结果及理化性质检查表明其具有β+地贫效应;HbE复合β地贫患者的父母一方为HbE杂合子,另一方为轻型β地贫患者,HbE复合β+地贫患者临床贫血等症状比HbE复合β°地贫轻,部分已婚育.结论:血红蛋白电泳可对本病作出诊断,PCR扩增结合DNA芯片反向点杂交技术可快速对其作基因分型,红细胞参数有助于对本病的筛选,遗传指导是防治本病的重要措施.
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广西地区13589例地中海贫血筛查结果及基因突变类型分析
目的:了解广西地区地中海贫血(地贫)的基因突变类型和分布情况.方法:2012-03-2014-11到我单位进行地贫基因检查的患者,用PCR结合琼脂糖凝胶电泳技术检测缺失型α地贫基因,PCR结合膜反向杂交技术检测β地贫基因.结果:13 589例样本共检出α、β地贫2 866例,比例为21.09％.其中缺失型α地贫1 757例(12.93％),常见缺失型α地贫基因型为-SEA/αα(1 026例),-α3.7/αα(498例),-α4.2/αα(150例),构成比分别为58.39％、28.34％、8.54％,共95.27％,其中以一SEA/αα为常见;其他基因型包括--SEA/-α3.7、--SEA/-α4.2、-α 3.7/-α 3.7、-α 3.7/-α4.2,构成比分别为2.90％、1.25％、0.40％、0.17％.确定为β地贫共1 109例(8.16％),共计发现基因型23种,其中常见的突变类型分别为CD41-42 (-TCTT)、CD17(A→T)、IVS-2-654(C→T)、-28(A→G)、CD71-72(+ A)、βE、-29(A→G),共占95.94％,其中以CD41-42(-TCTT)位点突变所占比例高.α地贫兼β地贫98例.结论:广西地区α地贫以-SEA/αα为常见,β地贫以CD41-42 (-TCTT)为常见,α地贫发病率高于β地贫.广西是地贫高发区域,继续做好广西人群的地贫筛查和产前基因诊断对优生优育具有重要作用.
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门诊输血重型β地中海贫血患者不规则抗体和自身抗体检测
目的:探讨长期门诊输血的重型β地贫患者血型不规则抗体和自身抗体阳性率及特异性.方法:采用微柱凝胶法检测在门诊长期反复输血的122例重型β地贫患者血型不规则抗体和自身抗体,并鉴定其特异性.结果:重型β地贫患者血型不规则抗体阳性10例(8.26％),自身抗体阳性4例(3.30％).有7例患者检出一种不规则抗体,分别是抗-E 5例、抗-c和抗-Fyb各1例,其他3例检出混合抗体,分别是抗-E/c 2例,抗-C/e 1例.Rh血型抗体90％,其中抗-E占(77.78％).结论:反复输血的重型β地贫患者可产生自身抗体和不规则抗体,不规则抗体主要是Rh血型抗体,尤以抗-E为主.
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多重PCR及PCR/反向点杂交法在诊断珠蛋白生成障碍性贫血中的临床应用
目的:探讨多重PCR和PCR/反向点杂交(RDB)在珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用.方法:收集临床疑诊为珠蛋白生成障碍性贫血(地贫)患者45例,应用单管多重PCR法检测α基因常见的3种突变类型;应用PCR/RDB技术检测17种β珠蛋白基因突变.结果:共检出15例阳性,12例为β珠蛋白基因突变,1例为α珠蛋白基因突变,2例患者同时具有α、β珠蛋白基因的突变.所有突变均为杂合性突变.β珠蛋白基因包含6种突变类型,分别为CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C-T)、TATA box-28(A-G)、βE(G-A)、CD43(G-T)、71-72M.结论:多重PCR用于α地贫和PCR/RDB用于β地贫的临床基因诊断方法简便、效率高.
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继发于地中海贫血的血色病一例
病例资料患者,男,64岁.乏力、面色苍白十余年,2006年确诊为β型地中海贫血,随后曾多次住院输血治疗.近来患者诉头晕、乏力,活动后气促、心悸,偶有胸闷,无发热、咳嗽,无腹胀、腹痛、无头痛等,精神可,胃纳一般,大、小便正常.查体:重度贫血貌,皮肤巩膜无黄染,浅表淋巴结不大,腹软,肝脾肿大可及.实验室检查:血糖21.85 mmol/l,白蛋白29.1 G/l,球蛋白42.14 G/l,白蛋白/球蛋白(A/G)0 69;凝血功能:PT活性39％,凝血酶原时间22.1s,活化部分凝血活酶时间53.6s,纤维蛋白原定量0.99 g/h贫血3项:维生素B12 1093 pg/ml,叶酸1.8 ng/ml,铁蛋白4489.06 ng/ml;血常规:白细胞总数1.92×109/l,血红蛋白36 g/l,血小板总数47×109/h血清铁及感染性疾病检查未见明显异常;超声心动图:左心稍增大,左室壁稍增厚,二尖瓣钙化伴轻度反流,三尖瓣轻中度反流,肺动脉高压(轻中度).临床诊断:β地中海贫血;继发性血色病;Ⅱ型糖尿病.
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益髓生血颗粒联合羟基脲治疗中间型β地中海贫血
目的 评价中药益髓生血颗粒联合西药羟基脲治疗中间型β地中海贫血(thalassemia intermedia,TI)的临床疗效.方法 60例TI患者随机分成3组,分别口服益髓生血颗粒、口服羟基脲以及同时口服益髓生血颗粒和羟基脲3个月.治疗前后分别检测3组患者血红蛋白(hemoglobin,Hb)、胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)、白细胞(white blood cell,WBC),并记录不良反应.结果 57例按试验方案完成治疗和检查,联合用药组Hb和HbF升高程度优于益髓生血颗粒组和羟基脲组(P＜0.05),3组WBC改变无明显差异.结论 益髓生血颗粒联合羟基脲进一步提升Hb和HbF,使TI患者贫血症状减轻.
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1例高效液相分析正常的CS型血红蛋白H病复合β地中海贫血
目的 报告1例CS型血红蛋白H病复合β地中海贫血的患者,并对其进行实验分析,探讨高效液相分析(high performance liquid chromatograpby,HPIC)对地中海贫血筛查的指导意义.方法 采用血细胞分析和高效液相分析进行地中海贫血筛查,采用跨越缺口聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR) (Gap-PCR)检测中国人常见的3种缺失型α地中海贫血基因,采用PCR-寡核苷酸探针反向斑点杂交法检测中国人常见的3种非缺失型α地中海贫血基因和17种β地中海贫血基因点突变.结果 患者血常规结果为血红蛋白浓度(hemoglobin concentration,HGB)及红细胞平均体积(mean corpuscular volume,MCV)均有降低;HPLC检测结果并未发现HbH及CS区带,HbF及HbA2的值均为正常值;PCR扩增检测出SEA及HbCS杂合子,41-42杂合子.结论 血红蛋白H病复合β地中海贫血时HPLC可以完全正常.在地中海贫血高发地区,对MCV下降的婚检人群必须进行基因检测以避免地中海贫血的漏检.
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中间型β地中海贫血患者影像学分析
我国南方是地中海贫血(地贫)高发区,在广西、广东、海南、四川、重庆等地发病率较高[1-3].目前尚无根治地贫的方法,中间型地贫患者可以长期不依赖输血生存,但长期贫血会导致机体脏器组织的一些病理变化.现就52例中间型地贫患者的影像学资料分析如下.
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中药治疗β地中海贫血的临床与实验研究进展
β地中海贫血(β地贫)在我国南方有较高的发生率,特别是广东、广西、四川和贵州的人群检出率高达1.08%、1.25%、2.18%和2.21%,属高发区[1].β地贫是一种遗传性溶血性贫血,其病理基础是β基因缺失或功能缺乏,使β珠蛋白链缺乏或合成减少,导致由α链和β链组成的占人体内所有血红蛋白(Hb)97%左右的HbA缺乏或减少,造成Hb合成障碍,产生贫血,同时α链相对增多,增多的α链在红细胞内形成包涵物:①含包涵物的相当部分红细胞(RBC)在成熟前在骨髓内被破坏,造成RBC无效造血;②含包涵物的部分RBC僵硬,流经脾窦时被破坏;③含包涵物的RBC寿命缩短[2].本文将其临床与实验研究进行综述.
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广西地区β地中海贫血基因突变类型分析
目的 探讨β地中海贫血的基因突变类型及临床表现型特点.方法 采用反向斑点杂交技术检测中国人群8个常见位点和9个少见位点突变的共17种β地贫基因,分析β地贫基因型与临床表现型特点.结果 β地贫1 082例,检出10种突变基因类型,分别为β0的CD41-42、CD17、CD27-28、CD71-72、CD43和β+的IVS-2-654、-29、-28、IVS-1-1以及类似β地贫变化异常血红蛋白E(CD26).814例杂合子β地贫中有9种基因型,β0杂合子637例(5种基因型),β+杂合子122例(3种基因型),血红蛋白E(HbE) 55例.双重杂合子β地贫146例,β0/β+双重杂合子69例(12种基因型),β0/β0双重杂合子73例(7种基因型),β+/β+双重杂合子4例(4种基因型). 纯合子β地贫82例,β0纯合子β地贫77例(3种基因型),β+纯合子5例(1种基因型).β地贫复合HbE 40例(5种基因型).结论 β地贫基因突变类型与以往报告的广西β地贫基因型一致;β地贫临床表现型复杂多变;基因检测对于地贫的临床诊断、治疗和预防有重要的意义.
