首页 > 文献资料
-
小鼠雌性生殖干细胞体内分化鉴定方法
目的 建立一种小鼠卵巢雌性生殖干细胞(FGSCs)体内分化鉴定方法. 方法 从6周龄C57BL/6小鼠卵巢利用Fragilis抗体基于免疫磁珠分选(MACS)分离FGSCs细胞,并置于STO饲养层细胞上扩增培养,采用RT-PCR法检测生殖干性基因包括Fragilis、MVH、Prdm1和Tert,细胞免疫荧光法检测Fragilis和MVH蛋白表达,利用绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体荧光标记FGSCs后将其植入受体鼠卵巢,在体内环境下促其分化发育为卵母细胞,至少12d后取卵巢置于载玻片上并压上盖玻片,直接置于荧光显微镜下观察. 结果 RT PCR结果显示FGSCs生殖干性基因包括Fragilis、MVH、Prdm1和Tert为阳性表达,而卵母细胞特异表达基因中Nobox为阴性,GDF9和ZP3为弱阳性;细胞免疫荧光结果显示FGSCs的MVH和Fragilis蛋白表达阳性,而且呈明显的膜表达.GFP-FGSCs植入6周龄雌性C57BL/6的卵巢中,至少12d以后将卵巢取出,压片后置于荧光显微镜下观测,结果显示有荧光阳性的卵母细胞. 结论 该鉴定方法简单直观,可作为FGSCs体内分化鉴定的可选方法.
-
壳寡糖对病理性卵巢衰退小鼠免疫功能和生殖功能的作用
目的:探讨壳寡糖促进病理性卵巢功能衰退小鼠生殖功能和免疫功能恢复的可能性.方法:选用43只生育旺盛期雌性小鼠,除正常对照组(n=8)外,其它通过白消安/环磷酰胺构建病理性卵巢功能衰退模型模拟卵巢功能早衰,随机选取3只,卵巢切片HE染色观察卵泡情况以判断不孕模型.构建成功后将余下32只随机平均分为4组(n=8),经不同剂量壳寡糖(0,100,200,300 mg/(kg·d))灌胃后,比较组间卵巢、脾脏、胸腺脏体比的变化,观察卵泡情况、检测腹腔巨噬细胞吞噬能力、外周血雌二醇(E2)及孕酮(P)水平,检测卵巢生殖上皮细胞中生殖细胞标志物小鼠血管同源物(MVH)、干细胞标志物OCT-4以及卵巢中免疫因子肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)表达量的变化,并分析生殖干细胞标记物表达水平变化与免疫因子表达水平变化的相关关系.结果:随壳寡糖灌胃剂量的增加,卵巢、脾脏和胸腺脏体比同步增高;卵巢中总卵泡数及各级卵泡数都呈递增趋势;外周血E2水平递增,P水平呈递减趋势;腹腔巨噬细胞吞噬功能随剂量增高而增强;生殖干细胞标记物和免疫因子的表达水平均呈显著递增趋势,表明生殖干细胞标记物的表达水平与免疫因子表达水平的变化呈显著的正相关关系(P＜0.05).结论:壳寡糖可改善病理性卵巢功能早衰小鼠的免疫功能,促进雌性生殖干细胞增殖、分化,从而促进卵巢病理性早衰机体生殖功能在一定程度上的恢复.
-
哺乳动物雌性生殖干细胞研究的质疑、进展及挑战
传统观点认为雌性哺乳动物在出生之后就会失去继续产生新细胞的能力，经研究人员的多年潜心研究发现，多种出生后的哺乳动物卵巢内能成功分离并培养生殖细胞，该类细胞具有自我增殖和分化卵细胞的能力，此举确认了哺乳类动物卵巢内仍存在雌性生殖干细胞。本文从研究雌性生殖干细胞的历史出发综合近几年研究人员对雌性生殖干细胞的研究进展，分析当前雌性生殖干细胞研究上存在的不足和面临的挑战。
-
新生CD-1小鼠雌性生殖干细胞的建系及生物学特征
背景：传统观点认为雌性哺乳动物出生后不再产生新的卵母细胞，近年来多项研究表明出生后哺乳动物卵巢中存在能再生卵子的雌性生殖干细胞。
目的：从新生CD-1小鼠卵巢中分离、纯化雌性生殖干细胞并建系及进行生物学特征研究。
方法：通过两步酶消化法和免疫磁珠分选从新生 CD-1小鼠卵巢中分离与纯化雌性生殖干细胞并体外长期培养，然后通过RT-PCR、细胞免疫荧光化学和核型分析鉴定其生物学特征。
结果与结论：从3-5 d龄CD-1小鼠卵巢中分离出雌性生殖干细胞并建立细胞系，目前已在体外长期培养15个月，共传代70多次。该细胞系表达Mvh，Dazl，Oct-4，Stel a，Blimp1，Fragilis等生殖细胞标志物，同时通过Fragilis和BrdU的双免疫荧光实验证实了其增殖活性和生殖细胞特性；核型分析发现该细胞系也具有正常的二倍体核型。因此CD-1小鼠卵巢中存在具有有丝分裂活性和正常的核型的雌性生殖干细胞。 -
卵巢生殖干细胞巢功能的影响因素和调控机制
卵巢功能随着女性年龄的增长发生衰退,导致卵泡生成减少,大大降低女性生育能力,甚至产生衰老相关性疾病.雌性生殖干细胞是存在于卵巢表皮中、具有对称分裂为新的干细胞和不对称分化为生殖细胞和颗粒细胞特性的双向潜能细胞.该干细胞的发现,为女性卵母细胞的更新、解决不孕问题带来了希望.卵巢生殖干细胞巢是雌性生殖干细胞赖以生存的微环境,对维持雌性生殖干细胞的功能至关重要.营养、蛋白分子、细胞因子和信号通路等多种因素参与调控雌性生殖干细胞的功能,继而影响其增殖、分化.该文就卵巢生殖干细胞巢功能的影响因素和调节机制进行综述.
-
雌、雄哺乳动物性腺的发育及调控
哺乳动物中精巢和卵巢在性别决定之前不能通过形态、细胞表面蛋白分布、细胞基质组成来区别,雌、雄性腺的分化则通过初级和次级性别的决定产生.卵巢和精巢的形成都是基因指导的主动过程,二者都是由同样的前体,即有双向分化潜能的性腺(bipotential gonad)衍生而来.
-
雌性生殖干细胞全基因组范围选择性多聚腺苷酸化位点分析
目的 描绘小鼠雌性生殖干细胞(FGSCs)和胚胎干细胞(ESCs)全基因组范围内选择性多聚腺苷酸化(APA)位点,通过细胞间的比较,分析生殖干细胞特异性的APA位点对其生物学特性的影响.方法 利用本实验室之前建立的基于高通量测序的转录本3'末端poly(A)位点捕获方法3T-seq确定并比较两个细胞系中所有APA位点,通过DAVID对具有APA位点差异的基因进行Gene Ontology分析.结果 在两种细胞系中共确定16 973个基因的50 243个APA位点,发现FGSCs中相较于ESCs3'UTR发生长度变化的基因1148个,其中795个(66％)3' UTR变短,353个(34％)基因3'UTR变长,与生殖发育密切相关的基因3'UTR存在显著的缩短现象.结论 FGSCs存在与ESCs不同的APA谱,APA介导的3'UTR变化参与生殖发育相关的生物学过程,揭示了生殖干细胞的基因转录后调控机制.
-
雌性生殖干细胞的研究进展
人类对于生殖干细胞的研究初是关于精原干细胞的研究,雄性哺乳动物由于精原干细胞的自我更新和分化,得以不断产生精子.传统观点认为,卵巢的始基卵泡池是卵泡的唯一储备库,哺乳动物出生后始基卵泡池一旦形成,其卵泡数目不再增加.随着卵泡的发育、成熟和闭锁,卵泡不断耗竭,卵巢功能逐渐衰退,女性渐渐进入绝经期.然而,雌性生殖干细胞的出现挑战了传统观点,它由原始生殖细胞转化而来,具有能够定向分化为卵母细胞的能力,可望补充不断消耗的始基卵泡池,是生殖生物学的革命性发现.
-
卵巢源雌性生殖干细胞增殖分化及其通路的研究进展
雌性生殖干细胞的发现打破了传统的“固定卵泡理论”.研究表明,在人和小鼠卵巢中,该类细胞定位于卵巢表面上皮,并可在其中检测到Oct4、Sox-2、Nanog、Vasa等生殖细胞和干细胞特异性标志物的存在;且2条重要的信号途径——Notch和Hippo在雌性生殖干细胞增殖与分化的过程中发挥重要的作用.
-
三种干细胞向雌性生殖细胞诱导的可行性探讨
雌性生殖细胞缺乏所致的不孕症目前尚无根本的治疗方法,干细胞的研究为这类患者带来了希望.随着胚胎干细胞(ESCs)/诱导性多能干细胞(iPSCs)建系技术的日趋成熟,体外诱导ESCs/iPSCs生成雌性生殖细胞的研究也取得了一定进展,目前已经有卵母细胞样细胞的形成,但所生成细胞的生殖生物学功能还有待进一步证实.近年来雌性生殖干细胞的发现及对其进一步的了解使获取更接近生理状态的卵子成为可能.本文对近年几种干细胞及其在生殖领域的研究进行综述,以探讨其临床应用的可行性.
