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雌激素和孕酮对人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响
目的探讨17β-雌二醇(E2)和孕酮(P)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)mRNA表达和蛋白合成的影响.方法原代培养的HUVECs,分别给予10-6mol/L血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)单独或合并10、10-7、10-5mol/L 17β-E2或P处理细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察TF mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)和双辛丁酸法测定细胞裂解液中TF蛋白浓度.结果10-6mol/L Ang Ⅱ对HUVECs有明显的损伤作用,内皮细胞TF mRNA表达和蛋白合成均显著增加,10-9mol/L17β-E2明显抑制Ang Ⅱ对内皮细胞TF mRNA表达和蛋白合成的刺激作用,但随着雌激素浓度的增加,抑制作用逐渐减弱;而随着P浓度的增大,增加了Ang Ⅱ刺激内皮细胞TF mRNA表达和TF蛋白合成的作用,加重了对内皮细胞的损伤.结论低剂量的雌激素对内皮细胞有保护作用,随着雌激素浓度的增加,这种保护作用逐渐减弱;低剂量的P对内皮细胞无保护作用,高剂量P对内皮细胞有损伤作用.
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17β-雌二醇及生长激素在薄型子宫内膜患者冷冻胚胎移植内膜准备中的作用
目的 探讨17β-雌二醇及生长激素(GH)在薄型子宫内膜患者的治疗应用情况.方法 回顾性分析前次补佳乐替代周期因子宫内膜薄而取消周期的66名患者,改用17β-雌二醇或加用生长激素再次准备内膜的80个冻融胚胎移植(FET)周期的临床资料.根据内膜准备方案分为17β-雌二醇组、17β-雌二醇+GH组、补佳乐+GH组,分析各组年龄、不孕年限、移植胚胎数、优胚率、不孕类型构成等基本情况和移植日血清E2水平、移植日内膜厚度、生化妊娠率、临床妊娠率等临床结局情况.结果 三组患者移植日内膜厚度较既往失败周期均有提高(分别为8.76土0.35 mm vs.5.65±0.23 mm,7.78±0.19 mm vs.5.23±0.15 mm,8.31±0.24mmvs.5.91±0.19 mm),差异均有统计学意义(P＜0.01);17β-雌二醇+GH组移植日内膜厚度虽较17β-雌二醇组薄(7.78±0.19 mm vs.8.76±0.35 mm)、但临床妊娠率更高(54.3％v s.18.2％),差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 三种不同方案均能改善补佳乐替代周期中薄型子宫内膜患者子宫内膜厚度及临床结局,其中可能17β-雌二醇+GH是较为理想的替代方案,但仍需更大样本量的研究验证.
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17β-雌二醇通过HPGA和ERα干扰睾酮合成调控精子发生
目的 观察17β-雌二醇(E2)暴露对雄性大鼠的生殖内分泌毒性,探讨其调控精子发生的机制.方法 E2经口灌胃染毒Wistar大鼠8周,剂量为1.00、0.50、0.10和0.01mg·kg-1·d-1,对照组为玉米油.观察一般状况,检测精子参数,利用放免方法检测血清激素T、E2、LH和FSH的水平,原子吸收法检测金属Zn和Ca水平,荧光定量PCR检测睾丸中类固醇急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450 scc)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)转录水平,免疫印迹检测雌激素受体(ERα和ERβ)和雄激素受体(AR)的蛋白水平.结果 染毒8周后睾丸重量及系数显著减轻(P＜0.01)；血清T在各剂量组出现剂量相关的下降,E2出现剂量相关的增加,各剂量组差别均具有统计学意义(P＜0.01).LH和FSH也有不同程度降低.血清中Zn的水平降低,在0.50和1.00mg/kg剂量组差别具有统计学意义(P＜0.01).附睾尾精子计数明显减少,精子存活度下降.RT-PCR结果表明睾丸内StAR、P450scc mRNA水平下降.ERα蛋白表达显著增加,AR蛋白表达显著减少,差别均具有统计学意义(P＜0.01).结论 青春期E2暴露可影响睾丸发育,包括睾酮合成和精子发生,其机制可能是循环雌激素的增加干扰下丘脑-垂体-性腺轴(HPGA)间接作用于睾丸间质细胞,还可能通过ERα途径直接抑制了睾酮合成酶.金属Zn可能参与了生殖毒性作用.
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17β-雌二醇对苯巴比妥导致的未成熟脑学习记忆损伤的保护作用
目的 观察17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对于苯巴比妥(Phenobarbitone,PB)损害新生幼鼠远期认知功能的保护作用.方法 健康3日龄Sprague Dawley(SD)大鼠30只(雌、雄不分)随机分为:生理盐水对照组、苯巴比妥组(PB组)、苯巴比妥+雌二醇组(PB+17β-E2组),每组10只.对照组给予生理盐水10 mL/(kg·d);PB组给予PB 10 mg/(kg·d);PB+17β-E2组给予PB 10 mg/(kg·d),17β-E2300 ug/(kg.d),每日称重后腹腔注射药物,连续3d.正常饲养至1月龄,各组随机选取8只大鼠,参加水迷宫测试.结果 与对照组相比,PB组大鼠寻找水下平台潜伏期显著延长(P＜0.05);PB+17β-E2组大鼠寻找水下平台潜伏期时间较PB组明显缩短,组间比较存在统计学差异(P＜0.05).穿越有效区次数,PB+17β-E2组与PB组比较明显减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).120 s内平台象限路程与总路程之比,PB+17β-E2组高于PB组,但差异无统计学意义(P＞0.05).PB+17β-E2组与对照组比较以上各指标无明显差异.结论 未成熟脑短疗程使用临床抢救剂量的传统抗癫痫药物PB,会产生远期学习记忆的损害;17β-E2对于PB造成的学习记忆损害有保护作用.
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钙蛋白酶在乳腺上皮转化细胞对雌激素刺激反应中的作用
目的 探讨经雌激素(E2)转化的MCF-10A乳腺上皮细胞对E2刺激的敏感性及细胞内钙蛋白酶(CANP)在E2效应中的介导作用,以深入了解E2的信号传导机制.方法 以E2转化的MCF-10A乳腺上皮细胞为研究模型、用E2(50 nmol/L)刺激细胞,以蛋白印迹法观察蛋白分子质量变化,以CANP特异性底物局部黏着激酶(FAK)蛋白剪切作为CANP激活的指标,伤口愈合实验观察细胞迁移变化,CANP抑制剂预处理观察CANP在E2效应中的作用.结果 转化细胞CANP活性明显高于非转化细胞,表现为前者出现FAK明显蛋白剪切,而后者FAK主要为野生型(125 ku),同时转化细胞迁移明显增强(P＜0.01).E2(10 nmol/L)刺激转化细胞可进一步促进FAK蛋白剪切和细胞迁移(P＜0.01),而非转化细胞对E2刺激不敏感.CANP抑制剂-1(ALLN)可有效阻断E2刺激转化细胞FAK蛋白剪切及细胞迁移(P＜0.01).结论 转化细胞对E2刺激的敏感性增加,其机制可能与胞内CANP活性增强有关,提示在转化细胞存在活跃的E2-CANP-FAK信号活动.
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17β-雌二醇及α-玉米赤霉醇对人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响
为探讨17β-雌二醇(17β-estrodiol,17β-E2)及植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织因子(tissue factor,TF)蛋白含量及mRNA表达的影响,进行人脐静脉内皮细胞原代培养,传至2～3代后用于实验.在细胞培养液中分别加入不同浓度17β-E2及α-ZAL作用48h,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞裂解液中TF蛋白浓度,双辛丁酸法(bicinchoninic acid,BCA)检测细胞总蛋白含量.提取细胞总RNA,用RT-PCR观察17β-E2及α-ZAL对TF mRNA表达的影响.结果发现:10-7mol/L17β-E2及α-ZAL均可明显降低HUVECs组织因子蛋白含量及mRNA的表达,二者的作用类似.表明17β-E2及α-ZAL可明显抑制HUVECs组织因子的表达,这可能是它们抗血栓形成、发挥心血管保护作用的机制之一.
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17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制
目的 探讨17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制.方法 用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理不同时间BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT和DPN处理BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;设计合成ERα siRNA、ERβ siRNA并转染BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表达;CHIP检测ERα、ERβ对Hsp27基因启动子的影响.结果 用10-8 mol/L的E2处理不同时间BCPAP细胞,随着E2处理时间增加,E2对BCPAP细胞中Hsp27蛋白的表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(P ＜0.05);E2作用转染ERα siRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平降低(P ＜0.05);E2作用转染ERβ siRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平升高(P ＜0.05);ChIP结果显示ERα能够与Hsp27基因启动子区域结合.结论 E2可以通过ERα促进BCPAP细胞中Hsp27蛋白水平的增高.
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17β-雌二醇对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响
目的观测17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对肾上腺素(PE)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响并探讨其机制.方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药,用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积,[3H]标记亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率,免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos蛋白表达,半定量RT-PCR检测心肌细胞肥大特征性胚胎型基因β-肌球蛋白重链(β-MHC)、α-骨骼肌肌动蛋白(α-skA)和心房肽(ANP)的mRNA表达.结果17β-雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和蛋白质合成速率的增加;17β-雌二醇减弱肥大心肌细胞c-fos蛋白表达;17β-雌二醇降低β-MHC、α-skA的mRNA表达,但增加ANP mRNA表达.结论17β-雌二醇可抑制心肌细胞肥大,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达,逆转收缩蛋白基因(β-MHC和α-skA)向胚胎型转化及促进ANP mRNA表达有关.
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17β-雌二醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
目的 观察17β-雌二醇对大鼠心缺血再灌(I/R)损伤的保护作用并探讨其机制. 方法 30只成年雌性SD大鼠卵巢切除后,随机分成C组(I/R假手术组)、 I/R组和 I/R+E2组(17β-雌二醇预处理).17β-雌二醇预处理2周后建立大鼠心肌缺血再灌注模型,用氯化三苯甲基四氮唑(TTC)染色法测量心肌梗死范围,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos的蛋白表达. 结果 17β-雌二醇能明显减少缺血再灌注心肌梗死体积,降低心肌细胞凋亡率,减弱缺血再灌注心肌细胞c-Fos的表达. 结论 雌激素对大鼠缺血再灌注心有保护作用,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达有关.
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17β-雌二醇对高同型半胱氨酸诱导人成骨肉瘤MG63细胞损伤的保护作用及机制
目的 探讨17β-雌二醇(17β-E2)对高同型半胱氨酸(HHcy)诱导人成骨肉瘤MG63细胞损伤的保护作用及其分子机制.方法 体外培养的人成骨肉瘤MG63细胞经17β-E2干预后,再以不同浓度和(或)不同时间的HHcy处理后,采用2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸盐(H2DCFDA)探针检测细胞内活性氧(ROS)水平变化;通过Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)核双染法观察计数凋亡和坏死细胞;采用免疫印迹法检测促凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达变化.结果 1.17β-E2可明显抑制HHcy诱导的MG63细胞内ROS的增加,抑制效果随剂量和时间而增强; 2.17β-E2可明显下调促凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达,对抗HHcy诱导的MG63细胞的凋亡和(或)坏死.结论 17β-E2可通过抑制ROS的产生,下调凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达而增强MG63细胞抗HHcy所诱导的氧化损伤作用.
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植物雌激素与雌激素对狗离体冠状血管舒张的作用对比
目的以血管张力变化为指标,对白藜芦醇(RST)和17 β-雌二醇(EST)的心血管保护作用及相关机制进行探讨和比较.方法制备狗冠状动脉血管环,固定于恒温肌槽内,待平衡后,加入各种药物观察血管张力的变化.结果RST和17β-EST均可使50 mmol/L KCl预收缩冠状动脉血管环产生剂量依赖性舒张作用,二者IC50值分别为(68.3±18.3和22.6±8.5)μmol/L,NO合酶抑制剂Nω-L-硝基精氨酸、正矾酸钠及去内皮细胞后两种雌激素的舒张百分数下降了大约15%～25%,二者的舒张作用被明显的阻断(P＜0.01),加入心得安、转录抑制剂放线菌素D或雌激素受体拮抗剂它莫昔酚,RST和17β-EST的舒张百分数均无显著变化(P＞0.05),这3种阻断剂都不能阻断这两种雌激素的舒血管作用.结论RST和17β-EST对冠脉血管的舒张作用部分与内皮释放的NO有关,但二者的舒张作用与肾上腺素能β受体和血管壁传统雌激素受体无关,与雌激素经典核内作用途径无关.
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17β-雌二醇对ApoE-/-鼠Teff/Treg细胞平衡和氧化应激的影响及与动脉粥样硬化的关系
目的 探讨不同时间给予17β-雌二醇(E2)替代治疗对apoE-/-雌鼠动脉粥样硬化(As)病变内效应性T细胞(Teff)和调节性T细胞(Treg)平衡和氧化应激的影响及其与As的关系.方法 5周龄apoE-/-鼠摘除卵巢后用高脂餐喂养,随机分为早期、延迟及持续治疗组,给予E2皮下注射(5μg/天)8周或16周,检测主动脉根部As病变大小、组成改变以及硫氧还蛋白TRX1的表达,并检测As病变内Th1细胞的细胞因子IFN-γ、Treg细胞的转录因子Foxp3和TRX1 mRNA的表达.结果 (1)和对照组相比,早期E2治疗使apoE-/-鼠脂质条纹的面积显著减少(8.82％土0.98％ vs.19.3％±1.26％ in controls,P＜0.01);而延迟E2治疗纤维脂质斑块的面积明显增加(30.7％±0.74％ vs.25.1％±0.94％ in controls,P＜0.05);持续E2治疗纤维脂质斑块的面积亦明显降低(22.48％±0.92％vs.25.63％±1.04％ in controls,P＜0.05);(2)延迟E2治疗斑块内胶原和平滑肌细胞含量明显减少,而巨噬细胞数量显著增加;持续E2治疗斑块内胶原和平滑肌细胞含量明显增加,而巨噬细胞数量明显减少;(3)早期及持续E2治疗As病变内代表促炎作用的IFN-γmRNA的表达明显降低,而延迟E2治疗斑块内IFN-γ mRNA的表达明显增加;(4)早期及持续E2治疗AS病变内代表抑炎作用的Foxp3mRNA的表达明显增加,而延迟E2治疗斑块内Foxp3 mRNA的表达明显降低;(5)早期及持续E2治疗,apoE-/-鼠血清过氧化脂质(LPO)的含量明显减少,而延迟E2治疗血清LPO含量明显增加;(6)早期及持续E2治疗As病变内TRX1 mRNA及蛋白水平的表达明显降低;而延迟E2治疗斑块内TRX1 mRNA及蛋白水平的表达却明显增加.结论 apoE-/-鼠摘除卵巢后,早期E2替代治疗可抑制As病变的形成,而缺乏雌激素一定时间后,再给予E2治疗却加速了As病变的进展并使斑块趋于不稳定,其机制与调节Teff/Treg细胞平衡以及对氧化应激的影响有关.
关键词： 17β-雌二醇 ApoE-/-鼠 Teff/Treg细胞 动脉粥样硬化 氧化应激 -
早期短期应用17β-雌二醇抑制兔颈动脉球囊损伤后新生内膜增殖
目的探讨短期应用17β-雌二醇对血管球囊损伤后新生内膜增殖的影响.方法将颈总动脉球囊损伤的去卵巢兔分为10组,在不同时间点给予17β-雌二醇(20μg/kg/d).分组:①损伤前三天开始给药,持续到术后第三天;②损伤前三天开始给药,持续到术后第七天;③损伤前三天开始给药,持续到术后第十四天;④手术当天开始给药,持续到术后第三天;⑤手术后第七天开始给药,持续到术后第十四天;⑥损伤后每天给予棉花油;⑦仅在损伤前一天给药一次;⑧仅在损伤前15min给药一次;⑨仅在损伤后第一天给药一次;⑩在损伤后第一天开始给药,连续2d.颈总动脉球囊损伤两周后处死所有动物,取损伤的颈总动脉,进行血管形态学分析.结果术后15min应用雌激素,连续应用3d,可使新生内膜面积减少59%(P＜0.05,vs vehicle),其效果与从手术前三天开始应用,且持续用到术后十四天相同(61%,P＞0.05,vs 0～3d);从术前三天开始应用雌激素,持续用到术后第七天,不能增强雌激素的抑制作用(P＞0.05,vs0～3d);从术后第七天开始给药,持续到第十四天,雌激素的抑制作用不明显(P＞0.05,vsvehicle);仅在术后第一天或第二天应用雌激素,也可抑制新生内膜的形成(P＜0.05,vs vehicle);在术前或手术当天应用雌激素,没有效果(P＞0.05,vs vehicle).结论17β-雌三醇抑制受损血管新生内膜的形成,其作用的发挥主要在血管损伤后72h内.
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雌激素对胰腺大部分切除模型小鼠胰岛β细胞功能影响的研究
目的 观察雌激素干预C57BL/6小鼠大部分胰腺切除后胰岛功能的变化,探讨雌激素对胰岛β细胞的影响. 方法 60只小鼠随机分成4组:对照假手术组(Sham)、胰腺切除模型组(Px)、雌激素干预组(E2)和雌激素阻断剂组(E2+ICI),每组15只.ELISA检测血浆胰岛素水平;小鼠处死前进行葡萄糖耐量实验(GT T);处死后荧光染色胰岛,计算胰岛数量和体积,并进行葡萄糖刺激胰岛素分泌实验(GSIS);RT-PCR检测Ins-1、Ins-2和PDX-1基因的表达水平. 结果 胰腺切除手术后7 d,E2组血糖较Px组下降[(162 ± 18) vs (225 ± 11)mg/dl),P<0.05].GTT结果显示,服糖120 min后,E2组与Px组比较,血糖回落到基线水平[(145.5 ± 24.5) vs (235.0 ± 21.3)mg/dl,P<0.05].胰岛荧光染色结果表明,各手术组的胰岛体积明显增大(P<0.05),尤其是E2组胰岛体积增大为明显.GSIS结果发现,雌激素能显著增加胰岛素释放及胰岛素含量.RT-PCR结果提示,雌激素能增加胰岛Ins-2基因的表达.结论 雌激素干预可降低糖尿病小鼠血糖水平,增加胰岛体积和胰岛素分泌,并对胰岛素基因的表达产生影响.
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雌激素及其代谢产物对去势低氧肺动脉高压大鼠烷烃单加氧酶和低氧诱导因子-1α表达的影响
目的：探讨17β-雌二醇（E2）及2甲氧基雌二醇（2ME）对去势低氧肺动脉高压大鼠模型中烷烃单加氧酶（AlkB）和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响。方法：选6~7周龄雌性SD大鼠60只，去势手后采用随机数字表法将大鼠随机分为6组：常氧组（n=10），常氧+E2组（n=10），常氧+2ME组（n=10），低氧组（n=10），低氧+E2组（n=10），低氧+2ME组（n=10）。低氧组持续低氧（24 h，8周）；2ME组自造模之日起，每日皮下注射2ME（240μg /kg）；E2组每日皮下注射E2（20μg/kg）。连续饲养8周，以建立低氧性肺动脉高压模型。测量平均肺动脉压（mPAP）后放血处死大鼠，观察右心室肥厚指数（RVHI），苏木素-伊红（HE）染色观察肺小动脉重构情况。采用免疫蛋白印迹法、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定AlkB、HIF-1α的表达水平。结果：与常氧组比较，低氧组大鼠肺小动脉管壁增厚管腔变窄明显，mPAP、RVHI均显著升高，低氧+E2组和低氧+2ME组上述形态学改变相对较轻，mPAP、RVHI均显著高于常氧组，且低氧+E2组和低氧+2ME组间无明显差异，常氧+E2组和常氧+2ME组肺小血管形态学无明显变化。HIF-1α表达水平在低氧组显著高于常氧组，低氧+E2组、低氧+2ME组亦升高，升高幅度不及低氧组，常氧+E2组、常氧+2ME组无明显变化。AlkB表达水平在低氧组显著低于常氧组，低氧+E2组、低氧+2ME组亦降低，降低幅度不及低氧组，常氧+E2组、常氧+2ME组无明显变化。结论：E2和2ME可能通过上调低氧性肺动脉高压大鼠肺组织AlkB的表达，降低HIF-1α表达，进而缓解肺动脉高压。
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17β-雌二醇和2-甲氧基雌二醇对慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内内皮素-1/一氧化氮体系的影响
目的：探讨17β-雌二醇（E2）及2-甲氧基雌二醇（2ME）对慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内内皮素-1（ET-1）/一氧化氮（NO）体系的影响。方法：雌性SD大鼠48只，按随机数字表法平均分为6组（各组n=8）：假手术组、去势组、低氧组、去势+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组。去势组行卵巢切除术；非去势组打开腹腔找到卵巢后不做处理直接还纳缝合。术后去势+低氧+E2组皮下注射E2[20μg/（kg·d）]，去势+低氧+2ME组皮下注射2ME[240μg/（kg·d）]，其他组皮下注射生理盐水（0.1 ml/d）。低氧组大鼠置于低氧箱内饲养，非低氧组大鼠呼吸正常空气。连续饲养8周以建立低氧性肺动脉高压模型。分别测定血清ET-1、NO水平、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性及肺组织内皮素A受体（ETAR）、内皮素B受体（ETBR）、eNOS 表达变化。结果：低氧组、去势+低氧组大鼠肺小动脉管壁增厚，管腔变窄明显，平均肺动脉压（mPAP）显著高于假手术组（P均<0.01）；E2和2ME干预组大鼠上述形态学及mPAP改变相对较轻。与假手术组相比，去势组和低氧组血清ET-1和肺组织ETAR mRNA及蛋白水平均明显升高，ETBR mRNA及蛋白水平明显下降（P均<0.01）；去势+低氧组以上指标变化更显著；E2和2ME干预后血清ET-1和肺组织ETAR表达明显下降，但仍高于假手术组，同时ETBR 表达明显上升，但仍低于假手术组（P均<0.01）；且去势+低氧+2ME组血清ET-1水平低于去势+低氧+E2组（P<0.05）。与假手术组相比，去势组肺组织eNOS蛋白水平明显下降（P<0.01）；低氧组血清NO水平及肺组织eNOS蛋白水平明显下降（P<0.05或P<0.01）；去势+低氧组血清NO水平、eNOS活性及肺组织eNOS mRNA和蛋白水平均明显下降（P均<0.01）；去势+低氧+E2组和去势+低氧+2ME组上述指标较去势+低氧组均明显上升（P<0.05或P<0.01），但仍低于假手术组（P均<0.05）。结论：E2及2ME均能显著降低血清ET-1水平，减少肺组织ETAR表达，增加ETBR的表达，升高血清NO水平、eNOS活性及肺组织eNOS表达，通过改善ET-1/NO体系平衡部分逆转肺动脉高压。
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17β-雌二醇/微小核糖核酸-21信号通路抑制低氧性肺动脉高压肺血管重构的机制研究
目的:探讨17β-雌二醇(E2)对低氧性肺动脉高压(HPH)的保护作用是否通过下调微小核糖核酸(miRNA)-21 (miR-21)表达进而抑制肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖而实现.方法:(1)动物水平:32只健康雌性SD大鼠行卵巢切除术后随机分入常氧组、常氧+E2组、低氧组、低氧+E2组,每组8只.两个E2干预组大鼠每日皮下注射E2 20 μg/kg,余组大鼠皮下注射等量生理盐水.两个低氧组大鼠在低氧环境下饲养,两个常氧组大鼠呼吸正常空气,连续饲养8周建立HPH模型.观察各组大鼠肺血管形态、平均肺动脉压(mPAP)及右心室肥厚指数(RVHI)变化,用实时聚合酶链式反应(PCR)及免疫印迹法测定肺动脉中miR-21、增殖细胞核抗体(PCNA)表达变化.(2)细胞水平:将体外培养的人PASMC随机分为3组:常氧组、低氧组、低氧+E2组,24 h后用四甲基偶氮唑蓝比色法检测各组细胞增殖情况,用实时PCR及免疫印迹法检测细胞中miR-21和PCNA表达变化.结果:(1)动物水平:低氧组较常氧组肺小动脉厚度和RVHI均明显增加,mPAP升高,肺动脉中miR-21及PCNA表达明显上升(P均<0.01);常氧+E2组上述指标较常氧组无明显变化(P均>0.05);低氧+E2组上述三项指标明显低于低氧组(P均<0.01).(2)细胞水平:与常氧组相比,低氧组细胞增殖明显,miR-21和PCNA表达明显上升(P均<0.01);与低氧组相比,低氧+E2组细胞增殖程度明显减轻,miR-21和PCNA表达明显下降(P均<0.01).结论:E2能够改善HPH大鼠肺血管重构、肺动脉压力、右心室肥厚程度,其保护作用可能是通过下调miR-21和PCNA表达从而抑制PASMC增殖而实现的.
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17β-雌二醇对ox-LDL诱导内皮细胞一氧化氮生成的影响
目的观察17β-雌二醇和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞一氧化氮(NO)的影响.方法用一氧化氮试剂盒测定不同浓度ox-LDL(50～200μg/L)和17β-雌二醇(0.1nmol/L-10nmol/L)作用于内皮细胞NO产量.结果ox-LDL对培养内皮细胞NO产生有明显抑制作用(P＜0.01),雌激素(E2)可促进培养内皮细胞NO的生成(P＜0.01),明显减弱ox-LDL对内皮细胞产生NO的抑制作用,与ox-LDL组相比,E2(0.5nmol/L)+ox-LDL组内皮细胞NO含量增加(P＜0.01).结论ox-LDL明显抑制内皮细胞NO的合成,雌激素则有明显的保护作用.
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17β-雌二醇及Wnt／β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响
目的：观察17β-雌二醇（17β-E217β-estradiol）对骨肉瘤细胞（osteosarcoma MG 63）基质Gla蛋白（MGP Matrix GLA protein）表达的影响及Wnt／β-catenin信号通路在其中的作用，探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法17β-E210－10、10－8、10－6mol／L及雌激素受体抑制剂氟维司群（Faslodex简称ICI）10－7 mol／L， ICI 10－7 mol／L ＋17β-E210－8 mol／L干预MG63细胞48 h。用10－8 mol／L的17β-E2及200 ng／mL Wnt／β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1（ DKK-1）干预MG63细胞48 h。用10－8 mol／L 17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol／L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA，后用荧光定量PCR及Westernblotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果17β-E2能上调MGP的表达，10－10、10－8、10－6 mol／L 17β-E2干预后， MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍（ P＜0.05）， MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍（ P＜0.05），以10－8 mol／L 17β-E2的作用明显。 ICI 能阻断17β-E2对MGP的上调作用，与单用17β-E2相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）。17β-E2能增加Wnt／β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达，β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、 Runx2、 LRP5的上调作用，与对照组相比，差异有统计学意义（ P ＜0.05）。华法林可阻断17β-E2的作用，与对照组相比 MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt／β-catenin信号通路同时也调节MGP表达，该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。
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17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物家族的作用
目的观察17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物家族(insulin receptor substrate IRS)表达的影响.探讨雌、孕激素对骨的作用机制.方法从正常骨折病人骨组织中分离正常人成骨细胞,经纯化和培养后,用Van Gieson行Ⅰ型胶原染色、钙钴法行碱性磷酸酶染色、茜素红行钙化结节染色进行成骨细胞鉴定.用半定量RT-PCR检测细胞IRS-1、-2、-3 mRNA表达量.结果分离和培养的细胞具有正常人成骨细胞的形态,能分泌Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶并形成钙化结节.17β-雌二醇和/或孕酮均不影响人成骨细胞和MG-63细胞IRS-1mRNA的表达(P＞0.05),可诱导人成骨细胞和MG-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调(P＜0.05),IRS-3 mRNA的表达下调(P＜0.05).二者联合干预时作用明显加强(P＜0.01).结论 17β-雌二醇和孕酮均不影响IRS-1 mRNA的表达,但可使人成骨细胞和MC-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调,IRS-3mRNA的表达下调,二者联合干预具有正性协同效应.不同的IRS家族成员对同一细胞具有效应的多样性.
关键词： 成骨细胞 人成骨肉瘤MG-63细胞 胰岛素受体底物 17β-雌二醇 孕酮
