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COX-2在皮肤鳞状细胞癌中的检测
目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在皮肤鳞状细胞癌中的水平及与增殖指标Ki67的关系.方法应用免疫组化SP染色法对57例皮肤鳞状细胞癌皮损及20例正常皮肤组织石蜡切片进行COX-2,Ki67染色,在光镜下观察并计数其阳性细胞.结果①COX-2与Ki67在正常皮肤组织中均无阳性染色,在皮肤鳞状细胞癌皮损中染色强度显著增高(P＜0.05);②分化程度不同的皮肤鳞状细胞癌皮损中COX-2蛋白强弱差异无显著性(P=0.756),而Ki67有显著性差异(P＜0.01);③COX-2与Ki67在皮肤鳞状细胞癌皮损中的水平呈显著正相关(r=0.767,P=0.05).结论在皮肤鳞状细胞癌中COX-2,Ki67表达异常增高,二者呈正相关;过度表达的COX-2蛋白可能参与肿瘤细胞的增殖过程.
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玻璃体腔注射塞来昔布抑制大鼠视网膜新生血管的作用
目的:通过对大鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型进行玻璃体腔注射塞来昔布,探讨塞来昔布在OIR中对视网膜新生血管的作用及其机制.方法:选取7天龄SD乳鼠96只随机分为6组:Z组:正常组;O组:OIR组;A组:OIR+溶媒对照组;B组:OIR+塞来昔布5μg组;C组:OIR+塞来昔布20μg组;D组:OIR+塞来昔布80μg组.除Z组在正常环境饲养外,其余各组乳鼠均建立OIR模型.乳鼠于生后第12 d出氧箱后给予玻璃体内注射二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)及相应剂量的塞来昔布,于生后第17 d处死,做组织切片HE染色观察视网膜组织形态并计数突破内界膜的血管内皮细胞核数,石蜡切片行免疫组化染色检测VEGF蛋白的表达.结果:HE染色显示,Z组、O组、A组、B组、C组、D组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.44±0.18、30.60±5.36、28.05±4.68、19.58±4.58、10.13±1.93、7.58±2.68个;除O组与A组外,各组间差异均有统计学意义(P<0.05),经塞来昔布治疗后,突破内界膜的血管内皮细胞核明显减少,且与剂量正相关;免疫组化结果显示,Z组VEGF蛋白表达呈阴性,表达率为10%,其余各组可见VEGF蛋白的阳性表达,O、A组阳性表达较高,阳性率分别为90%、86%,表现为棕褐色颗粒或团块,均高于B、C、D组,且三组的阳性表达依次减低为68%、42%、30%.结论:塞来昔布能够有效抑制大鼠OIR模型视网膜新生血管的生长,且抑制效果与剂量正相关,其作用可能通过抑制VEGF表达实现.
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翼状胬肉成纤维细胞中COX-2的表达及其抑制剂的实验研究
目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子(VEGF)在人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)中的关系,以及美洛昔康(Meeloxicam)抗HOF增殖的作用和机制.方法:采用免疫组化方法测定翼状胬肉组织中COX-2的表达.体外培养HPF,采用Western法,MTT法,研究在不同浓度的VEGF刺激下,HPF中COX-2蛋白的表达,以及不同浓度的美洛昔康对HPF增殖的影响.结果:翼状胬肉组织中COX-2呈阳性表达.HPF中VEGF浓度的增高可致COX-2蛋白的表达呈增强趋势.当美洛昔康的浓度在75～300μmol/L之间变化时,能明显抑制HPF的增殖,且其抑制强度呈剂量、时间依赖性.结论:HPF中VEGF的浓度升高能增强COX-2蛋白的表达,美洛昔康能够通过拮抗COX-2达到抑制HPF增殖的作用.
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模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响
目的:观察模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达的影响.方法:原代培养人牙周膜成纤维细胞,应用可控压力细胞加载装置模拟咬合压力, 分别施加30、 60、 90 kPa的间歇性压力,每次15 min, 每天3次, 在3、5 d后提取细胞总RNA,定量后点于尼龙膜上, 同时利用引物扩增COX-2基因的一段特异性片段作为cDNA探针,将探针同位素标记后与膜杂交,以观察COX-2在mRNA水平表达的变化.结果:加载模拟咬合压力的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达水平明显高于对照组,而且在一定范围内表达水平与加压力值成剂量依赖关系;各加压组加压3 d与5 d之间细胞COX-2 mRNA表达无明显差异.结论:加载模拟咬合压力条件下培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2基因表达增高.
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模拟失重后高+Gx对猴牙龈组织iNOS、COX-2表达的影响
目的:探讨模拟失重后高+ Gx暴露对猴牙龈组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响.方法:20只雄性猕猴随机分为4组,即正常对照组(A)、30d模拟失重组(B),+13Gx/230 s组(C)、30 d模拟失重后超重组(D),其中D组又分为+11Gx/270 s(D1)、+13Gx/230 s(D2)和+15Gx/200 s(D3).相应模拟实验后,放血处死各组动物并取牙龈组织,用免疫组化SABC法分别观察各组猴牙龈组织中iNOS、COX-2的表达.结果:各实验组iNOS、COX-2表达水平均高于对照组(P＜0.05).各组中iNOS的表达水平依次为C组＞B组＞D1组＞D2组＞D3组＞A组,其中B、C、D1、D2各组间两两相比均无统计学差异(P＞0.05),而分别与D3组相比,均P＜0.05;COX-2的表达水平依次为D3组＞D1组＞D2组＞C组＞B组＞A组,其中B、C、D1、D2各组分别与D3组相比P＜0.05,B组与C组、D1组与D2组相比均P＞0.05,而D1和D2分别与B组、C组相比,均P＜0.05.结论:30d模拟失重和+13Gx/230 s均可引起猴牙龈组织iNOS、COX-2的表达;30 d模拟失重后再高+Gx可使COX-2的表达上调,iNOS的表达下调.
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大鼠实验性牙周炎对胰岛的影响
目的:通过观测实验性牙周炎大鼠胰岛组织形态、检测外周血胰岛素水平和胰岛环氧化酶(cyclooxygenase,COX-2)表达情况,探讨慢性牙周炎对胰岛的影响.方法:将25只SD大鼠随机分为对照组10只和慢性牙周炎组15只,慢性牙周炎组行双侧上颌磨牙结扎法建立牙周炎模型.基线和12周采集外周血,12周处死大鼠,取颌骨和胰腺组织标本做切片,观察牙周和胰腺的组织学改变,测量牙槽骨吸收高度,并采用免疫组织化学法检测胰岛COX-2表达情况.结果:12周时牙周炎组外周血中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-a,TNF-a)达(10.02±2.16)pg/mL,较对照组(7.64±1.59)pg/mL有明显升高(P<0.05).但牙周炎组的血清胰岛素水平、胰岛形态和COX-2的表达水平均未见明显差异.结论:中等程度慢性牙周炎尚不足以造成大鼠胰岛组织形态和功能的改变.
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肺癌CT征象与病理对照研究
目的 研究肺癌环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)表达与CT征象相关性. 方法 对经病理证实的25例肺癌及35例肺良性病变行CT扫描,并应用P-V法对其病理标本进行免疫组化分析,研究COX-2、VEGF、MVD表达水平与CT征象、肺癌组织学类型、临床分期及淋巴结转移之间的相关性. 结果 肺癌组COX-2、VEGF、MVD表达水平分别为(64.8±13.8)%、(76.4±14.1)%、(62.5±14.6)个/HP,明显高于肺良性病变组.肺癌COX-2、VEGF、MVD表达水平与CT征象、肺癌组织学类型、临床分期及淋巴结转移之间密切相关,与肺癌的分化程度无关. 结论 COX-2、VEGF、MVD可作为早期诊断肺癌,估计肿瘤预后的重要分子生物学指征.CT征象可以反映肺癌的血供特点,可用来推测肿瘤的侵袭、转移及预后情况.
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COX-2和VEGF与肝癌多细胞球体群集耐药性的关系
目的:探讨COX-2和VEGF在肝癌多细胞球体(MCS)中的表达与肝癌群集耐药的关系.方法:以liquid overlay技术获得肝癌HepG2多细胞球体为模型,采用透射电镜和扫描电镜比较单层细胞与MCS的形态学差异;采用MTT法和流式细胞技术比较ADM和5-FU对单层细胞和MCS的生长抑制率和细胞凋亡率;采用免疫组化和图像分析技术比较COX-2和VEGF在单层细胞和多细胞球体表达的差异.结果:与单层细胞相比,多细胞球体细胞间黏附广泛而紧密,可见中间连接和桥粒连接. 不同浓度的ADM和5-FU作用48 h,MCS细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均低于单层细胞,差异有统计学意义(P<0.05). 免疫组化结果显示,COX-2和VEGF在MCS上高表达(P<0.05).结论:肝癌MCS具有群集耐药性,可能与其高表达COX-2和VEGF有关.
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shRNA抑制COX-2基因表达对肝癌细胞HepG2生长的影响
目的:应用RNA干扰技术抑制COX-2基因,观察其对肝癌细胞HepG2生长的影响.方法:构建靶向抑制COX-2基因表达的短发夹双链RNA(shRNA)真核表达载pshRNA-COX-2,转染肝癌细胞HepG2,用RT-PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测其对COX-2的抑制效应,MTT法检测对HepG2细胞生长的影响.结果:与未转染组相比,pshRNA-COX-2重组表达质粒抑制了HepG2细胞COX-2 mRNA及蛋白表达,抑制率分别为69.9%和50.3%;并可抑制HepG2细胞生长,72 h后有统计学差异(P＜0.05).结论:pshRNA-COX-2重组表达载体能显著抑制肝癌细胞COX-2基因表达,从而抑制肿瘤细胞增殖.
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依托昔布对大鼠单侧输尿管梗阻肾脏病变的影响
目的:观察选择性环氧化酶-2抑制剂依托昔布对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏病变的影响. 方法:将大鼠随机分为单侧输尿管梗阻组,依托昔布治疗组和对照组进行实验,测定血肌酐、尿素氮和肾皮质NO含量,并用免疫组化法半定量测定肾组织TGF-β1和COX-2的表达水平. 结果:单侧输尿管结扎术后3 wk,单侧输尿管梗阻组和用药组大鼠肾脏均可见明显病理改变与纤维化,血肌酐[(38.10±3.93,27.80±2.57) mL/min]、尿素氮[(9.18±0.03,8.14±0.03) mmol/L]和肾皮质NO含量[(6.01±0.17,4.47±0.12) mmol/L]均比对照组[(22.30±2.28) mL/min, (6.53±0.02) mmol/L, (1.65±0.11) mmol/L]显著性升高,肾组织TGF-β1(2.41±0.19,1.38±0.13)和COX-2(2.74±0.07,1.52±0.05)的表达水平显著性上调. 用药组与单侧输尿管梗阻组比较,病理改变与纤维化程度,血肌酐、尿素氮和肾皮质NO含量、肾组织TGF-β1和COX-2的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05). 结论:特异性COX-2抑制剂依托昔布能减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾脏病理损伤和纤维化改变.
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环氧化酶-2抑制剂预防大鼠化学性乳腺癌
目的:观察环氧化酶-2 (COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对化学致癌剂7,12-二甲基苯蒽(DMBA)化学诱发的大鼠乳腺癌形成的影响. 方法: DMBA油剂灌胃复制大鼠乳腺癌模型,90只大鼠分为3组,单纯诱癌组作为阴性对照、三苯氧胺组作为阳性对照、观察塞来昔布对大鼠乳腺肿瘤发生率和bcl-2, VEGF蛋白表达的影响. 结果: 三苯氧胺组(48.2%)和塞来西布组(50.0%)肿瘤发生率低于单纯诱癌组(85.7%,分别为P=0.003,P=0.004). 塞来昔布组VEGF蛋白表达率(42.9%)低于单纯诱癌组(79.2%,P=0.023),和三苯氧胺组(46.2%)无差异(P=0.863). 塞来昔布组bcl-2蛋白表达率(42.9%)低于单纯诱癌组(83.3%,P=0.010),低于三苯氧胺组(53.9%),但无差异(P=0.568). 结论: 塞来昔布能抑制DMBA诱发的大鼠乳腺癌的发生、发展,下调bcl-2和VEGF蛋白表达可能是其机制之一.
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胰腺癌组织survivin和COX-2表达的相关性
目的:探讨凋亡抑制蛋白survivin和环氧化酶-2(COX-2)在胰腺癌组织中的表达与生物学行为之间的关系及二者的相关性.方法:用免疫组织化学Envision法对51例胰腺导管癌survivin和COX-2的表达进行检测.结果:51例胰腺导管癌中survivin蛋白和COX-2蛋白的表达率分别为80.4%和74.5%;两者在11例癌旁非肿瘤胰腺组织中均未发现阳性表达.Survivin的表达与组织学分级有关(P<0.01),而与临床分期和淋巴结转移关系不大(P>0.05);COX-2的表达与临床分期、淋巴结转移有关(P≤0.05),而与组织学分级关系不大(P>0.05);survivin的表达与COX-2的表达密切相关(P<0.05).两者的表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、部位均无关.结论:Survivin和COX-2密切相关,可能在胰腺癌的发生、发展过程中起关键作用,可能为胰腺癌的治疗提供了新的靶点.
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COX-2,VEGF在子宫内膜异位症组织中的表达及相关性
目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EMs)组织中的表达与生物学行为的相关性. 方法:采用免疫组织化学法对32例EMs患者组织中COX-2和VEGF的表达进行检测. 结果:32例EMs,患者组织中COX-2和VEGF的阳性表达率分别为84.3%和93.8%,较正常内膜的表达明显增高(P<0.001). 在位内膜、异位内膜的COX-2和VEGF在增殖期和分泌期分别为83.3%, 85.7%和94.4%, 92.9%,差异不显著(P>0.05). COX-2表达与VEGF的表达有一定相关性(r=0.747,P<0.001).结论:COX-2和VEGF在EMs的发生、发展中起着关键性作用,二者在血管生成过程中密切相关,可能为EMs的治疗提供新的靶点.
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急性炎症状态对家兔急性心肌缺血的影响
目的:探讨急性炎症状态下发生心肌缺血时对心脏的影响.方法:24只成年家兔(1.8～2.5kg)随机分为空白对照组(A),单纯心肌缺血组(B),内毒素组(C),内毒素加心肌缺血组(D),建立AMI模型,术后6h观察血液学指标及缺血心肌的HE染色、COX-2多克隆抗体免疫组织化学染色.结果:血液学指标示术后6hMDA,NO,髓过氧化物酶(MPO)测定值D组与A,B,C组有明显差异(P<0.05);后3组心房钠尿肽释放增加,D组与B,C组有明显差异(P<0.05),D组左室舒张末压、左室收缩峰压测定值较B,C组降低明显,缺血心肌中环氧化酶-2高度表达.结论:机体处于炎症状态时发生心肌缺血,炎症因子损害心肌,恶化心脏功能.
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靶向COX-2的siRNA抑制三种不同分化程度胃癌细胞生长及作用机制
目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在体外抑制COX-2表达,研究其抑制三种不同分化程度的胃癌细胞(MKN-28,SGC-7901,BGC-823)的可能性,探讨RNAi抑制胃癌生长与胃癌细胞分化程度的相关性. 方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-siRNA-COX-2并导入胃癌细胞株,体外诱导RNAi,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测COX-2基因表达变化,MTT法检测细胞活力,原位末端标记(TUNEL)及透射电镜检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的改变. 结果:pTZU6+1-siRNA-COX-2质粒导入细胞后,SGC-7901和BGC-823中COX-2表达明显下调,细胞生长被抑制,并出现特征性的细胞凋亡,同时有Bax蛋白上调和Bcl-2蛋白下调. 对照组则无明显变化. 结论:RNAi显著抑制胃癌细胞生长,可能与下调COX-2基因表达和诱导细胞凋亡有关,其对中分化胃癌细胞的抑制作用为显著,提示RNAi的作用可能依赖于胃癌细胞的分化程度.
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塞莱西布诱导胆囊癌细胞凋亡和生长抑制的作用
目的:研究塞莱西布对人胆囊癌细胞生长抑制及诱导凋亡的作用.方法:应用TUNEL,MTT法,流式细胞技术等方法对经塞莱西布作用的人胆囊癌细胞进行观察和检测.结果:塞莱西布对人胆囊癌细胞具有明显的生长抑制和促进调亡作用(P<0.05),在一定范围内存在时间依赖关系和剂量依赖关系(P<0.05).结论:塞莱西布诱导肿瘤细胞产生凋亡,是其对肿瘤细胞生长抑制作用的基础.
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萘丁美酮对十二指肠胃返流所致胃黏膜损伤保护作用的实验研究
目的探讨非甾体类消炎药萘丁美酮对十二指肠返流导致返流性胃炎的治疗作用.方法用SD大鼠建立十二指肠胃返流模型,40只模型大鼠等分为萘丁美酮组和西沙比利组、铝碳酸镁组、空白手术组;另取10只SD大鼠作为假手术组.干预时间12周.对模型大鼠的胃标本进行病理学检查,采用免疫组化方法对胃黏膜的COX-2和TNF-α进行染色.结果萘丁美酮组的病理改变明显轻于空白手术组(P<0.01)而又重于假手术组(P<0.05),与铝碳酸镁组和西沙比利组相比则差异不显著 (P>0.05).TNF-α的免疫组化染色显示,萘丁美酮组与其他各组间均无显著性差异(P>0.05).COX-2的免疫组化染色显示,萘丁美酮组与空白手术组相比COX-2表达明显降低( P<0.01),与铝碳酸镁组、西沙比利组和假手术组相比则无显著性差异(P>0.05).结论在十二指肠返流导致的返流性胃炎中,萘丁美酮有明显的治疗效果.萘丁美酮可明显降低胃黏膜组织中COX-2水平.
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Cox-2、iNOS的表达及其与胃癌血管生成的关系
目的探讨胃癌中环氧化酶-2(Cox-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及其与胃癌血管生成的关系.方法用免疫组化SP法检测45例胃癌、癌旁组织手术切除标本Cox-2、iNOS和微血管密度(MVD)的表达.结果胃癌组织Cox-2和iNOS的表达率以及MVD均明显高于癌旁组织(77.78% vs. 33.33%,68.89% vs. 17.78%,58.13±19.99vs. 24.02±10.28,P<0.01,P<0.005,P<0.05).Cox-2和iNOS均与MVD呈正相关(r=0.63,r=0.54,P<0.05,P<0.05).Cox-2和iNOS表达有显著相关性(P<0.05).结论 Cox-2和iNOS在胃癌的发生中有协同作用,两者可能共同参与肿瘤血管的形成.
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幽门螺杆菌感染与胃黏膜环氧化酶-2表达的关系
目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染与胃黏膜环氧化酶-2(COX-2)表达的关系.方法用免疫组化方法检测20例H.pylori阳性、14例H.pylori阴性的慢性胃炎胃窦黏膜COX-2表达,比较根除H.pylori前后胃窦黏膜COX-2表达的变化.结果 H.pylori阳性患者COX-2平均阳性细胞率[(35.8±5.5)%]显著高于H.pylori阴性者(P<0.01);成功根除H.pylori的15例患者,治疗前胃黏膜COX-2平均阳性细胞率明显高于治疗后(P<0.001).结论 H.pylori感染诱导胃黏膜COX-2表达.
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COX-2、VEGF的表达和胃癌血管生成的关系
目的探讨环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)与胃癌血管生成的关系.方法用免疫组化SP法检测45例胃癌、癌旁组织COX-2、VEGF和MVD的表达.结果胃癌组织COX-2、VEGF和MVD的表达明显高于癌旁组织.COX-2(+)或VEGF(+)组MVD(61.29±14.31;60.07±15.86)均显著高于COX-2(-)或VEGF(-)组(45.38±12.42;43.06±18.91,P<0.05),COX-2、VEGF均为阳性组MVD(62.46±14.34)明显高于两者均阴性组(41.24±13.65,P<0.05)或仅一项阳性组(P<0.05).COX-2、VEGF均与MVD显著正相关(P<0.01),COX-2与VEGF显著正相关(P<0.01).结论 COX-2可能参与胃癌血管生成,VEGF可能是COX-2诱导肿瘤血管生成的重要介质.
