ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 研究金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响并分析可能的作用机制.方法 采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸转染HDPC后对细胞生物学特性的影响.结果 ADAM28 AS-ODN组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著降低,凋亡细胞百分比明显上升.结论 ADAM28 反义核酸可显著抑制HDPC的增殖和ALP的活性,显著诱导HDPC的凋亡并影响细胞周期的变化.

金属蛋白酶解离素28对人牙乳头细胞生物学特性的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:应用细胞培养、基因转染、MTT、流式细胞术(FCM)和酶动力学等方法,探讨ADAM28基因对HDPC生物学特性的影响,采用SPSS12.0软件包中的SNK检验进行统计学分析.结果:成功转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著高于空载体组、未转染组,而凋亡细胞百分比显著低于两对照组,P<0.01.结论:ADAM28可显著促进HDPC的增殖和ALP的分泌,显著抑制HDPC的凋亡.

牙齿发育相关基因ADAM28在人牙乳头细胞中的定位分布研究

目的 探讨牙齿发育相关基因金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase 28,ADAM28)在人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)中的定位分布及作用.方法 应用基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ADAM28,通过细胞培养、基因转染HDPC后,采用免疫荧光、RT-PcR及Western blot检测ADAM28在HDPC中的表达分布.结果 成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDPC 72h后,HDPC的胞质和胞膜上均表达ADAM28蛋白,而两对照组均无表达.结论 ADAM28在HDPC内能被正确地翻译、表达,可能作为一种胞质蛋白调控着牙源性间充质细胞的增殖和分化.

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞内ADAM28表达的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对人牙乳头细胞(HDPC)内ADAM28蛋白表达的影响.方法:应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDPC后,通过免疫细胞化学、RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异.结果:ADAM28 AS-ODN转染HDPC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P<0.01).结论:应用ADAM28 AS-ODN可有效封闭HDPC内ADAM28的表达,为进一步研究反义核酸在牙胚组织和细胞中的功能提供实验和理论依据.

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的影响

目的:研究金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)转染人牙乳头细胞(HDPC)后,对其表达多种细胞外基质蛋白(BSP、OPN、DSPP、CollagenⅠ/Ⅲ)的影响.方法:采用细胞培养、基凼转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测)ADAM28反义核睃对HDPC表达上述基质蛋白的影响.结果:ADAM28反义核酸转染HDPC后BSP、DSPP、Collagen Ⅰ的表达明显减弱(P＜0.01),OPN、CollagenⅢ的表达无明显变化(P＞0.05).结论:ADAM28反义核酸可有效封闭人牙乳头细胞内BSP、DSPP、Collagen Ⅰ的表达,ADAM28基冈对BSP、DSPP、Collagen Ⅰ的表达起显著的正向调节作用.

氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响

目的了解氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响.方法对人牙乳头细胞体外培养,分别给予0.0 g/L、0.2×10-6 g/L、1.0×10-6 g/L、5.0×10-6 g/L、25.0×10-6 g/L氟处理,采用Western blot方法分析氟对细胞培养外I型胶原的影响.结果体外培养的人牙乳头细胞合成Ⅰ型胶原可以分泌Ⅰ型胶原.0.0 g/L、0.2×10-6 g/L、1.0×10-6 g/L、5.0×10-6 g/L氟对细胞外Ⅰ型胶原量无显著差异(P>0.05);25.0×10-6 g/L氟处理组细胞外I型胶原量较其它组高(P＜0.05).结论过量氟可能抑制细胞外I型胶原降解.

人牙乳头细胞内Smad2在TGF-β1信号转导中作用的研究

目的观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达,以及Smad2蛋白在转化生长因子-β1信号转导中的作用,探讨Smad2信号途径在TGF-β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制.方法原代培养人牙乳头细胞,Western blot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF-β1调控下的表达变化,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化.结果培养的人牙乳头细胞表达Smad2蛋白,TGF-β1能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集,而BMP-2无此功能;TGF-β1或BMP-2刺激作用6 h、12 h、24 h和48 h,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变.结论人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达,Smad2能被TGF-β1活化后转位至核内发挥作用,但Smad2基因的表达无明显变化,提示TGF-β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中,Smad2信号途径可能发挥一定的作用.

hOP-1全长基因克隆及真核表达载体的构建

目的证实人牙乳头细胞中OP-1的表达,获得hOP-1全长基因及其高效真核表达载体.方法提取人牙乳头细胞总RNA,反转录合成cDNA,以特异性引物扩增hOP-1全长基因并克隆入T载体,筛选阳性克隆进行序列测定后.构建高效真核表达载体pCI/OP-1并筛选鉴定.结果 PCR扩增得到一特异性的约1 300 bp的片段,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致.构建的pCI/OP-1质粒,用于基因转染纯度较好.结论人牙乳头细胞中首次克隆到hOP-1全长基因,并构建获得该基因高效真核表达载体.

rhBMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化

目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protem)特异的细胞内信号转导分子Smad1在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制.方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2%FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激.免疫组化观察.结果:TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smad1蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smad1从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用.结论:首次观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smad1转位至核内引起基因表达实现的.

磷酸化cAMP反应元件结合蛋白对发育期人牙乳头细胞增殖和分化的影响

目的 构建CBP抑制表达慢病毒载体,探讨CBP有效表达沉默后对体外培养人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)的增殖及分化影响.方法 利用基因重组技术构建重组慢病毒建立牙乳头细胞沉默稳转细胞,采用CCK-8检测细胞增殖的变化,采用检测分化相关蛋白的表达评价CBP对HDPC分化能力的影响.结果 测序结果提示成功构建四组人CBP基因的重组慢病毒;转染HDPC后,通过RT-PCR和蛋白质印迹法筛选获得有效靶点的重组慢病毒;CCK-8检测结果表明HDPC在CBP表达下调后增殖活性受到抑制;慢病毒介导CBP沉默后影响了HDPCs相关分化蛋白ColI、OCN、OPN的表达,较对照组显著下调(P＜0.05);牙乳头细胞的ALP活性在转染重组慢病毒后5,7,14 d后显著降低(P＜0.05);结论 成功构建了高效CBP抑制表达载体,CBP沉默可抑制HDPCs的增殖和分化.

人牙乳头细胞Smad1基因MH2结构域的cDNA的分子克隆

目的:从人牙乳头细胞内克隆骨形成蛋白(BMP)细胞内信号转导基因Smad1的功能性结构域-MH2结构域.方法:原代培养人牙乳头细胞,从培养的细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第1条链;设计上下游引物,进行RT-PCR,扩增Smad1基因MH2结构域的基因片段;将所获得的基因片段定向插入PUC19载体;转化大肠杆菌JM109,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定.结果:获得的Smad1 MH2结构域的cDNA片段大小为444bp,并且成功构建PUC19/MH2重组质粒.结论:人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,BMP调控人牙乳头细胞分化可能是通过Smad1信号途径实现的.

BMP2对人牙乳头细胞c-fos和c-jun诱导作用的研究

目的:探讨生长因子BMP2对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的诱导作用.方法:采用免疫组织化学和图像分析的方法,观察特定浓度的BMP2在不同时问点对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的影响.结果:不加刺激时人牙乳头细胞c-fos、c-jun在胞浆阴性表达,胞核不表达或弱阳性表达.200 ng/mL BMP2刺激30 min后,c-fos和c-jun在胞浆胞核均出现表达,但较稀疏;刺激lh胞核胞浆内表达明显增强,浆内表达较核内弱;2 h c-fos和c-jan在细胞核内表达强,12 h胞核着色明显变浅,24 h基本已无阳性着色.结论:生长因子BMP2可诱导体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达,整个过程约持续24 h;c-fos和c-jun的表达存在核转位现象,提示c-fos和c-jun参与了BMP2的信号转导过程.

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

目的:观察甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)对体外培养的人牙乳头细胞(humandental papilla cells,HDPC)牙本质基质蛋白1(dental matrix protem,DMP1)合成分泌的影响.方法:原代方法培养出人牙乳头细胞,用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第5代人牙乳头细胞,免疫组化观察结果,并采用图像分析的方法,进行半定量分析.结果:PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达,诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内,呈一定的浓度依赖性,0.3μg/mL为刺激佳浓度.结论:PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1,对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用,可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一.

BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达的变化

目的:观察人牙乳头细胞内Smad1 mRNA 的表达及在BMP2作用下,细胞内Smad1 mRNA的表达变化,探讨人牙乳头细胞内Smad1 信号途径在BMP2调控牙乳头细胞分化中的作用.方法:原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理后,提取总RNA,采用Northern blot法,从mRNA水平观察Smad1基因的表达及含量变化.结果:从mRNA水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达,但在BMP2作用6、12、24h后,Smad1 mRNA表达量无显著变化.结论:人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,牙乳头细胞内Sma d1 mRNA表达量不受BMP2调控.

Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达及其意义的探讨

目的:观察转化生长因子-β超家族特异的细胞内信号转导基因Smad4在人牙乳头细胞内的表达,及其在转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨形成蛋白-2(BMP-2)作用下的变化,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制.方法:原代培养人牙乳头细胞,用TGF-β1和BMP-2刺激培养的细胞,分别从刺激前后的细胞中提取总RNA和总蛋白,采用Northern和Western印迹杂交方法,从mRNA和蛋白水平观察Smad4基因的表达及变化.结果:从mRNA和蛋白水平观察到Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达.但在TGF-β1和BMP-2作用下表达无变化.结论:研究证实Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达,Smad4基因在信号转导过程中无量的变化,其活化可能是通过蛋白磷酸化途径实现的.

牙齿感觉过敏症的研究现状和展望

牙齿感觉过敏症通常称之为"牙本质过敏症",本文就近年来有关牙齿感觉过敏症的发病机理、病因、诊断和治疗等方面的研究进展加以综述.

人牙乳头细胞内Smad5蛋白表达的免疫组化研究

目的：观察Smad5蛋白在体外原代培养的人牙乳头细胞内的表达及其在转化生长因子-β超家族信号转导中的作用。方法：原代培养的人牙乳头细胞，分别以骨形成蛋白-2 (bone morphogenetic protein-2, BMP-2)和转化生长因子- β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)刺激，免疫组化检测Smad5的表达，图像分析仪半定量。结果：人牙乳头细胞（空白对照组）胞浆内可见Smad5阳性表达，胞核内未见阳性表达；BMP-2实验组胞核内Smad5强阳性表达，胞浆内为弱阳性表达； TGF-β1实验组细胞胞浆Smad5阳性，胞核未见表达。结论：人牙乳头细胞内存在Smad5的表达，Smad5能转导BMP-2信号至核内发挥作用，但不能转导TGF-β1信号，提示BMP-2在牙齿发育过程中信号传递可能是通过Smad5的信号转导途径实现的。

Smad2蛋白在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程

目的:观察体外原代培养的人牙乳头细胞内 Smad2蛋白的表达,以及Smad2蛋白在转化生长因子-β1(transforming growth factor- β1, TGF-β1)信号转导中的作用.方法:原代培养人牙乳头细胞, 用TGF-β1和骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein, BMP2)刺激培养的细胞,免疫组化观察.结果:TGF-β1和BMP2刺激组均可见Smad2蛋白表达,但与对照组相比无明显差异.TGF-β1组可见Smad2从胞浆转位至核内聚集,BMP2组未见此作用 .结论:人牙乳头细胞内存在Smad2蛋白的表达,Smad2 能特异地转导TGF-β1信号至核内发挥作用,提示TGF-β1调控成牙本质细胞分化的作用可能是通过Smad2信号途径实现的.

人牙乳头细胞内Smad4表达的免疫组化研究

目的:观察转化生长因子-β超家族的细胞内信号转导分子Smad4在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程.从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制.方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)和骨形成蛋白-2(recombinant human bone morphogenntic protein,rhBMP-2)刺激培养的细胞 ,免疫组化观察.结果:TGF-β1和rhBMP-2实验组胞核内均可见S mad4蛋白强阳性表达,但胞浆内未见Smad4蛋白阳性表达;对照组胞浆内可见Smad4蛋白阳性表达,核内未见阳性表达.结论:观察到Smad4在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示Smad4可能同时参与TGF-βs和BMPs的细胞内信号转导过程.TGF-βs和BMPs 在牙齿发育中信号传递可能都是通过Smad4的信号传导途径实现的.

核心结合因了α1诱导人牙乳头细胞矿化的相关蛋白表达