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rhBMP2与 rhVEGF 联合用药对大鼠成骨细胞及跖骨的作用
目的：观察rhBMP2（重组人骨形成蛋白-2）与rhVEGF（重组人表皮生长因子）联合用药对体外培养SD大鼠成骨细胞不同成熟阶段的增殖、分化及胎鼠跖骨生长的影响。方法分离新生大鼠颅盖骨的细胞培养获得前成骨细胞（ preosteoblast ， pOB），再诱导分化为成骨细胞（osteoblast，OB），以rhBMP2和低（2μg/L）、中（4μg/L）及高（8μg/L）剂量rhVEGF干预48 h，比较乳酸脱氢酶（ LDH）活性、细胞相对增殖率（ RGR）和碱性磷酸酶（ AKP）活性。另取胎鼠跖骨，以rhBMP2和rhVEGF干预7 d和14 d，比较其纵向骨生长率（ longitudinal bone growth rate ，LBDR）。结果①LDH组间差异无统计学意义。②RGR：pOB的中、高剂量联用组较同剂量rhBMP2组高。 OB的中、高剂量联用组较同剂量rhBMP2及rhVEGF组高。③AKP：pOB的中、高剂量联用组较同剂量rhBMP2及rhVEGF组高。 OB的组间差异无统计学意义。④LBDR；7d联用组较rhBMP2及rhVEGF组高，但14d联用组差异无统计学意义。结论适量联用rhBMP2与rhVEGF对骨再生诱导及骨组织早期生长有协同促进效应。
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 重组人表皮生长因子 联合用药 成骨细胞 跖骨增长 -
rhBMP-2复合生物活性玻璃诱导成骨的实验研究
目的:探讨生物活性玻璃(bioactive glass BG)对重组人骨形成蛋白-2(recombinant human bonemorphogenetic protein-2,rhBMP-2)诱导骨形成的影响.方法:6只大鼠皮下袋植入rhBMP-2/BG,0.2mg0.5mg rhBMP-2,并设空白对照组.植入后3周行组织学检查.结果:0.5mg组rhBMP-2/BG具有成骨作用,其骨化过程类似于膜内化骨的直接骨形成.结论:rhBMP-2/BG复合物能诱导新骨形成,表明BG适合作为rhBMP-2载体.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 载体 骨替代材料 -
骨形成蛋白与胶原基纳米骨修复牙周骨缺损的实验研究
目的 探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和胶原基纳米骨复合材料(nHAC)修复牙周骨缺损的效果.方法 制备小型猪牙周骨缺损模型,设立rhBMP-2-nHAC复合材料植入组、空白对照组和单纯植入胶原基纳米骨组,术后8周观察各组间修复效果及组织病理学变化,通过骨组织形态计量学测定分析评价牙周骨组织的再生情况.结果 术后8周可见复合材料植入组大量新生牙周组织生长,四环素单标记表面、四环素双标记表面、骨矿化沉积率、骨体积、类骨质表面、成骨细胞表面等骨组织形态计量学结果 与空白对照组和单纯胶原基纳米骨组比较,差别均有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 rhBMP-2和nHAC可明显促进牙周骨缺损修复.
关键词： 牙周骨缺损 重组人骨形成蛋白-2 胶原基纳米骨 骨组织形态计量学 -
rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的初步研究
目的 合成rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料,检测其生物相容性和活性.方法 用胶原复合rhBMP-2/hTGF-β1形成复合材料,通过兔眼结膜刺激试验和溶血试验对其生物相容性进行检测,观察复合材料对Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)生长及增殖的影响,通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对复合材料的活性进行检测.结果 rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料呈白色棉絮状或团块状.对兔眼结膜无刺激作用,对兔血也无溶血作用.复合材料明显影响体外培养的Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)的增殖和碱性磷酸酶水平.结论 按以上方法合成的rhBMP-2/gTGF-β1/胶原复合材料具有良好的生物相容性和生物学活性.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 人转化生长因子-β1 胶原 复合材料 -
一种新型复合人工骨修复家兔下颌骨骨缺损的扫描电镜观察
目的探讨珊瑚转化型羟基磷灰石-胶原-重组人骨形成蛋白-2(CHA-Co-rhBMP-2)复合人工骨在修复颌骨缺损上的应用价值,为临床应用提供理论依据.方法健康家兔18只,随机分为实验组和两组对照组,每组6只.在双侧下颌骨体部制造1.0cm×1.0cm贯通性骨缺损,实验组用CHA-Co-rhBMP-2复合人工骨充填修复,对照组分别用CHA-Co复合骨和单纯CHA充填修复.每组动物各取3只分别在术后 6周、12周处死,进行组织学观察及统计学分析.结果与对照组相比实验组材料具有明显的骨诱导活性,6周可见明显新骨形成,12周材料大部分降解,降解区域被大量成熟骨组织所取代,骨材料界面结合紧密,无纤维结缔组织.骨密度分析结果认为骨缺损区的骨密度随时间延长有逐渐增高趋势,统计学分析实验组与对照组之间骨密度有显著性差异.较对照组具有明显优势.实验动物均无感染和不良反应出现.结论 CHA-Co-rhBMP-2复合人工骨具有良好的生物相容性、降解性及骨诱导活性,是一种理想的颌骨缺损修复材料.
关键词： 珊瑚转化型羟基磷灰石 胶原 重组人骨形成蛋白-2 骨修复 -
重组人骨形成蛋白-2、胶原、珊瑚复合人工骨异位诱导成骨的实验研究
目的采用珊瑚作为载体,胶原作为缓释系统,制备出重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)胶原/珊瑚复合人工骨,并评价其骨诱导活性.方法 rhBMP-2、胶原和珊瑚以一定的方式复合后,植入小鼠股部肌袋内,以单纯珊瑚植入作对照,术后不同时间取材,通过组织学方法检测骨诱导活性.结果复合人工骨植入1周诱导软骨形成,2周形成编织骨,4周形成含骨髓的板层骨,同时珊瑚被部分降解吸收.结论胶原、珊瑚是rhBMP-2较理想的载体,有缓释BMP的作用,该复合骨具有良好的异位诱骨活性,是一种比较理想的新型生物性植骨材料.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 胶原 珊瑚 诱导活性 -
重组人骨形成蛋白-2结合胶原膜在兔颅骨引导骨再生模型中的成骨效应研究
目的 探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)与胶原膜靶向结合后在兔颅骨引导骨再生(GBR)模型中的成骨效应.方法 将20只普通级雌性健康新西兰大白兔随机分成2周组和6周组,每组10只.所有大白兔均制备颅骨GBR模型,在颅顶骨植入4个钛筒,分别盖rhBMP-2/CBD胶原膜(rhBMP-2/CBD胶原膜组)、rhBMP-2胶原膜(rhBMP-2胶原膜组)、胶原膜(胶原膜组)和不盖膜(空白组).分别在2周和6周时处死各对应组的大白兔,取样制作硬组织切片和石蜡切片,染色后进行组织学观察.结果 2周时可见胶原膜阻挡了纤维组织的长入,4组钛筒上层均无新骨生成,其中rhBMP-2/CBD胶原膜组钛筒顶端毛细血管增生量明显较其余3组多.6周时可见rhBMP-2/CBD胶原膜组钛筒上层大量新骨生成,与来源于颅骨骨面的新骨界限明显,而其余3组钛筒顶端未见新骨生成.结论 rhBMP-2与胶原膜靶向结合可形成具有骨诱导性的胶原膜,缓释rhBMP-2使胶原膜下方大量新骨生成,表层成骨可阻止纤维组织的长入和防止植骨床的塌陷,使成骨速度加倍.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 胶原膜 引导骨再生 -
重组人骨形成蛋白-2的质量控制
目的 建立重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)质控方法和质量标准.方法 以小鼠体内异位成骨试验测定rhBMP-2的生物学活性,HPLC-SEC法测定纯度,蛋白N-末端测序仪测定N-末端15个氨基酸残基序列,其余检测项目按<中国药典>三部(2005版)规定进行.结果 1批rhBMP-2原液鉴定结果显示,样品比活性为5.9×104 BU/mg,纯度为97.6%,N-末端序列为(MKR)LKSSCKRHPLYV,其余项目检测结果均符合<中国药典>三部(2005版)的要求.结论 该质控标准可用于rhBMP-2产品的常规检定.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 质量控制 标准 -
rhBMP-2诱导异位软骨修复重建兔气管缺损的实验研究
目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)作为激活物诱导异位软骨修复并重建兔气管缺损的可行性.方法:取24只新西兰大白兔,制备气管前壁软骨1/3缺损模型.随机分为A、B组,每组12只A组为实验组,在气管缺损处前壁颈前肌肉修补,多点注射rhBMP-2;B组于气管软骨缺损部位直接颈前肌群修补.术后观察动物一般情况,于4、8、12周取材进行大体观察、HE染色观察重建区域情况.结果:术后A组动物均存活至实验完成,B组因气道感染及气道分泌物堵管潴留致使实验兔死亡,其余动物出现皮下气肿,呼吸不畅等情况.组织学观察A组有明显的新生软骨细胞及少量软骨样组织,可见结缔组织包绕,周围肌肉组织完整,排列整齐,未见明显坏死组织,有少量淋巴细胞浸润.B组未见软骨组织生成,可见大量肉芽组织增生,结缔组织排列紊乱,伴少量坏死组织,大量淋巴浸润.结论:rhBMP-2可通过注射到颈前肌肉修补肌群中诱导软骨细胞和软骨样组织生成,减轻炎症反应,联合颈前肌辩修复重建气管缺损能充分维持修复重建后的气道形态,具有减少术后皮下气肿、气管狭窄的作用,有望用于临床修复重建气管组织缺损.
关键词： 气管缺损 移植 重组人骨形成蛋白-2 肌瓣 硅胶管 -
rhBMP-2-PLA纳米微球的制备及生物学效应观察
目的:制备rhBMP-2-PLA纳米微球缓释系统,观察其对兔成骨细胞的生物学效应.方法:采用复乳-干燥法制备rhBMP-2纳米微球,观察其一般特性,并模拟体内条件研究BMP-PLA纳米微球的体外缓释特性.采用MTY法检测微球对成骨细胞增殖状况的影响,并与单纯rhBMP-2的作用进行比较.结果:纳米微球表面光滑圆整,球体大小均匀,平均粒径为45 nm,rhBMP-2-PLA纳米微球的包封率和载药量分别为(90.67±1.23)%和[(134.65±0.44)×10-3]%,微球体外释药符合Higuichi方程.该微球缓释系统有生物活性,能显著促进兔成骨细胞的增殖,其效应高于单纯施加rhBMP-2的效应.结论:rhBMP-2-PLA纳米微球缓释系统的作用明显优于单纯rhBMP-2,在骨创伤的治疗中有良好的前景.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 微球 缓释 生物效应 -
rhBMP-2诱导成肌细胞表达成骨表型的研究
目的:检测不同浓度rhBMP-2对诱导成肌细胞成骨表型表达的影响,探索诱导成肌细胞表达成骨表型的rhBMP-2的适浓度.方法:采用双重酶消化法获取SD大鼠乳鼠的成肌细胞,纯化后,在含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养.取第3代培养细胞,按培养液中不同rhBMP-2浓度分组,分为0、0.1、0.5、1.0、1.5和5.0 μg/ml共6组(0 μg/ml组为对照组),培养1、2和4周.收集不同时期细胞培养上清液和细胞爬片进行检测,检测指标为:细胞形态和数量、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OCN)含量、Ⅰ型胶原合成量和钙化结节染色.采用SPSS10.0统计软件包进行统计分析.各组间比较采用方差分析(ANOVA).结果:应用rhBMP-2后,梭形成肌细胞减少,圆形或多突形成肌细胞明显增加,细胞呈集结性生长,培养4周可形成不透光结节.低、中浓度(0.1～1.5 μg/ml)rhBMP-2组细胞数量和对照组之间无显著性差异(P＞0.05),但高浓度(5.0 μg/ml)rhBMP-2组细胞数量显著下降(P＜0.05).0.1～1.5 μg/ml 4组rhBMP-2均能促进成肌细胞合成分泌ALP、OCN和Ⅰ型胶原(所有组与对照组比较,P＜0.05),其中0.5和1.0 μg/ml 2组促进作用更显著.细胞培养4周后,茜素红S染色法示结节呈红色钙阳性反应.结论:低、中浓度(0.1～1.5 μg/ml)rhBMP-2对成肌细胞增殖无显著影响,但高浓度(5.0 μg/ml)rhBMP-2可显著抑制成肌细胞增殖.rhBMP-2可有效诱导成肌细胞表达成骨细胞各项表型并能体外成骨,其中0.5～1.0 μg/ml是一个较为适宜的诱导浓度.
关键词： 成肌细胞 重组人骨形成蛋白-2 骨钙素 成骨 -
rhBMP-2/DFDBA复合材料植入大鼠体内不同部位后血管再生的实验研究
目的:比较rhBMP-2/DFDBA复合材料和单纯DFDBA材料在大鼠体内血管及肌、肌、皮下和脂肪组织4个不同部位异位植入后的血管再生能力.方法:72只健康成年雄性Wistar大鼠,先根据植入材料不同分2组,即rhBMP-2/DFDBA复合材料(A组)和单纯DFDBA材料(B组),再按植入部位不同进一步分为4组,分别植入大鼠的背阔肌及血管(血管及肌组)、背阔肌(肌组)、背部皮下组织(皮下组)和腹部脂肪组织(脂肪组)4个不同部位.于术后2、4、8周处死动物后进行大体观察、HE染色、血管内皮生长因子(VEGF)免疫组化染色观察及VEGF表达的图像分析.采用SPSS11.5统计软件包对数据进行t检验.结果:A组新生血管数量和VEGF的表达均高于B组.不同的植入部位,以血管及肌组新生毛细血管数量多,VEGF表达强,其次是肌组、皮下组,脂肪组弱.结论:当加入外源性rhBMP-2时,rhBMP-2/DFDBA复合物可以表现出更强的血管再生能力;不同组织中,rhBMP-2/DFDBA复合植入物的血管再生能力有所不同,其中以血管及肌组织强,肌组织和皮下组织次之,脂肪组织弱,这可能由各组织的血流速率不同所引起.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 脱钙异体冻干骨 血管内皮生长因子 血管再生 -
活性纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料对拔牙创早期愈合及牙槽嵴吸收影响的实验研究
目的 观察活性纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料(AnHAC/PLA)促进犬拔牙创早期愈合及减少牙槽嵴吸收的效果.方法 将小块状纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料(nHAC/PLA)、AnHAC/PLA、自体牙槽松质骨植入犬拔牙创中,并设空白对照.术后4周、8周、12周通过大体观察测量、HE染色和Masson's三色法染色来观察比较拔牙创骨缺损的修复情况及牙槽嵴的吸收情况.结果 AnHAC/PLA材料修复拔牙创骨缺损及减少牙槽骨吸收的能力强,与自体牙槽松质骨组类似,nHAC/PLA材料的能力较弱,但明显优于空白对照组.结论 AnHAC/PLA可早期修复拔牙创,减少牙槽嵴的吸收.
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重组人骨形成蛋白-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞增殖分化影响的实验研究
目的 明确重组人骨形成蛋白(rhBMP)-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和分化的影响.方法 在rhBMP-2纳米微球作用于BMSCs后,采用嗜银蛋白(AgNORs)染色法检测细胞的增殖状况;采用反转录PCR方法,观察细胞中骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原mRNA水平表达的改变以反映对细胞分化的影响,并与单纯rhBMP-2作用细胞后的结果进行比较.结果 该纳米微球缓释系统能显著促进BMSCs的增殖以及细胞中骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原mRNA水平的表达,且均高于单纯rhBMP-2的作用.结论 rhBMP-2纳米微球缓释系统促进BMSCs增殖以及向成骨细胞方向分化的作用强于单纯rhBMP-2的作用.
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联合应用胰岛素样生长因子-Ⅰ和骨形成蛋白-2促小鼠成骨样细胞及成纤维细胞增殖和分化的效应
目的探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(rhGF-Ⅰ)和重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)单独及联合应用对MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞增殖和分化的影响.方法单独或联合应用不同浓度rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2作用于MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化情况,放射免疫法检测细胞分泌的骨钙素(OC)水平.结果 1～75 ng/ml rhIGF-Ⅰ与10～100ng/ml rhBMP-2作用于MC 3T3-E1和NIH 3T3细胞后,均能显示明显的促细胞增殖(P＜0.01)及使ALP活性增高(P＜0.05)的作用.各浓度rhIGF-Ⅰ或rhBMP-2对MC 3T3-E1及NIH3T3细胞作用8、24和48h的MTT检测结果相似.rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2联合作用后,对两种细胞的促增殖、增强ALP活性的作用均较各自单独作用更为明显(P＜0.05).单独或联合应用不同浓度rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2对细胞分泌的OC水平均无显著影响(P＞0.05).结论 rhIGF-Ⅰ和rhBMP-2具有明显的促细胞增殖及早期分化的协同作用,但对成骨末期细胞分化影响不大,其活性主要与使用剂量有关.
关键词： 重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ 重组人骨形成蛋白-2 成骨样细胞 成纤维细胞 增殖 分化 -
载药自固化磷酸钙人工骨抗菌活性和骨诱导活性的实验研究
目的评价载药自固化磷酸钙人工骨的抗菌活性和骨诱导活性.方法将自固化磷酸钙人工骨(CPC)与重组人骨形成蛋白(rhBMP)-2和亚胺培南/西司他丁钠(商品名:泰能)复合,制成载药自固化磷酸钙人工骨(diCPC);将diCPC置于接种有金黄色葡萄球菌(简称:金葡菌)的培养基中,检测其体外缓释特性及抗菌活性;将diCPC植入小鼠股部肌肉内,以单纯CPC植入作对照,术后2周和4周,通过组织学检查评价其骨诱导活性.结果diCPC在体外长时间持续释放抗生素并抑制金葡菌生长.diCPC植入小鼠股部肌肉2周,局部有大量的软骨细胞分化及软骨基质形成;术后4周,局部有大量新生的编织骨形成.CPC植入后2周和4周,材料周围仅有纤维结缔组织包裹,未见软骨或骨形成迹象.结论diCPC具有良好的抗菌活性和骨诱导活性,是伴有污染或感染骨缺损较理想的修复材料.
关键词： 自固化磷酸钙人工骨 重组人骨形成蛋白-2 亚胺培南/西司他丁钠 骨诱导 感染 -
重组人骨形成蛋白-2复合1%透明质酸钠骨膜内诱导成骨的实验研究
目的观察重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)复合1%透明质酸钠骨膜内诱导成骨的组织学过程,探讨其诱导成骨的机制.方法将rhBMP-2和1%透明质酸钠复合后植入9只新西兰大白兔胫骨骨膜下骨皮质的表面,对侧植入1%透明质酸钠作为对照,分别于术后第4、8、12周处死3只动物取标本进行大体和组织学观察.结果 rhBMP-2复合1%透明质酸钠组骨膜内侧有明显的新骨形成,新骨呈渐进性的成熟过程,12周时和原有骨的组织结构一致.结论 rhBMP-2和1%透明质酸钠复合后可以用于骨缺损的修复.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 透明质酸钠 诱导成骨 -
重组人骨形成蛋白-2的研究进展
重组人骨形成蛋白-2能诱导骨形成、促进骨折愈合,不同的剂量、不同的部位等因素对重组人骨形成蛋白的成骨能力不同.
关键词： 重组人骨形成蛋白-2 骨形成 骨折愈合 -
重组人骨形成蛋白-2在诱导C3H10T1/2干细胞成骨中对MMP-9 mRNA表达的影响
目的: 测定MMP-9mRNA在C3H10T1/2 clone 8(10T1/2)中的表达,探讨rhBMP-2诱导10T1/2产生成骨细胞时对MMP-9mRNA表达的影响. 方法: 取10T1/2培养至细胞完全贴壁,加入rhBMP-2培养28天,同时利用Real-time PCR检测MMP-9在10T1/2中不同时间段的表达. 结果: 10T1/2经rhBMP-2的诱导14天出现钙化点,MMP-9mRNA也随着rhBMP-2的加入表达降低,而对照组几乎不变化. 结论: rhBMP-2在诱导10T1/2产生成骨细胞的同时抑制着MMP-9mRNA的表达.
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rhBMP-2及rhbFGF对兔骨髓间充质干细胞分化作用长期效应的实验研究
目的: 检测重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)单独、联合及序贯作用对兔骨髓间充质干细胞(BMSC)分化作用的长期效应. 方法:采用考马斯亮蓝测定法检测单独、联合及序贯施加rhBMP-2和rhbFGF后兔BMSC在第2、5、7和10天时的蛋白质含量水平,以反映对细胞分化作用的影响,并进行统计学分析. 结果:rhBMP-2能在较长时间内明显促进细胞的蛋白质含量增加,而rhbFGF则起抑制作用,并且均呈浓度依赖性.rhBMP-2单独应用与两种生长因子联合应用的效应相近,而且均高于rhbFGF单独应用或两种因子序贯应用的效应. 结论:rhBMP-2和rhbFGF的不同应用方式对BMSC分化作用的长期效应不同.
