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逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6/Smads通路表达的影响
目的:观察逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6、BMPR Ⅱ、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4表达的影响.方法:将200只雌性小鼠按随机数字表法分为疏肝高、低剂量组、COH组和空白对照组4组各50只.应用免疫组化和real-time PCR方法分别测定卵母细胞中BMP-6、BMPR Ⅱ、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA的表达.结果:与空白对照组比较,COH组BMP-6、BMPR Ⅱ、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,各治疗组BMP-6、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA表达增加,疏肝高剂量组优于低剂量组;疏肝高剂量组BMPRⅡ蛋白和mRNA表达增加.结论:逍遥丸可使BMP-6表达上调,激活其Ⅱ型受体BMPRⅡ形成受体复合物,然后募集Ⅰ型受体ALK-2和ALK-6使其活化,活化的Ⅰ型受体进一步磷酸化细胞内信号Smad1/5/8,然后与Smad4结合,从而启动信号传导干预卵泡发育和卵母细胞的质量.
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补肾调经方对人卵泡壁颗粒细胞BMP/Smads表达的影响
目的 研究补肾调经方对人卵泡壁颗粒细胞Smad1(drosop hila mothers against decapentaplegic protein 1)、Smad5、Smad8及Smad4表达的影响.方法 将66例接受体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)不孕症患者按1∶2的比例分为中药加长方案控制性超排卵组(简称治疗组,23例)和长方案控制性超排卵组(简称对照组,43例).应用实时荧光定量PCR(realtime PCR)法测定取卵日成熟卵泡壁颗粒细胞Smad1、Smad5、Smad8、Smad4 mRNA的表达;应用细胞免疫荧光方法观察两组颗粒细胞Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白的表达.结果 治疗组颗粒细胞Smad1 mRNA及蛋白表达显著高于对照组(P＜0.05);两组Smad5、Smad8和Smad4 mRNA及蛋白表达差异无统计学意义.结论 补肾调经方提高妊娠率、改善卵巢功能的机制可能与上调壁颗粒细胞Smad1 mRNA和蛋白的表达有关.
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2型糖尿病患者尿液Smad1改变与糖尿病肾病关系的研究
目的 探讨T2DM患者尿液Smad1的表达及其与肾脏损伤的关系. 方法 选择T2DM患者(T2DM组)118例及正常对照(NC)组28名,按照尿白蛋白/肌酐比值(UACR)分为正常蛋白尿组64例,微量白蛋白尿组36例及大量白蛋白尿组18例.应用ELISA法测定各组尿液Smad1的含量,常规方法测定Cr、胱抑素C(CysC)、FPG、HbA1c、C-P等临床指标,以Macisaac公式估算肾小球滤过率(GFR),分析尿Smad1含量与常用临床指标的相关. 结果 T2DM组尿Smad1含量高于NC组,与UACR呈正相关(R=0.412,P=0.000),正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组尿Smad1含量呈递增改变；相关分析显示Smad1与FPG、HbA1c呈正相关,与FC-P肽呈负相关；Logistic回归分析表明尿液Smad1是T2DM患者肾功能损伤的独立危险因素. 结论 尿液Smad1可反映DN损伤程度并与DN分期相关；尿液Smad1的检测对DN患者病情观察、疗效判断具有一定的临床价值.
关键词： 糖尿病 2型 糖尿病性肾脏疾病 Smad1 尿白蛋白/肌酐比值(UACR) -
骨关节炎进程中软骨细胞膜受体ALK1在软骨TGFβ信号通路中的作用及调控
软骨细胞的凋亡是骨关节炎(osteoarthritis,OA)进程中的重要步骤,软骨细胞的凋亡会通过一系列复杂的细胞机制介导,TGF β信号通路就是其中重要的细胞机制之一.TGFβ通路中Smad2、3与Smad1、5、8两种通路的平衡失调推动了软骨细胞走向终末分化、终启动软骨细胞凋亡.Smad2、3和Smad1、5、8信号通路的膜受体的ALK1和ALK5,可以通过改变他们之间的比率以及各自的活性等方式来有力地调控TGFβ信号通路的平衡,对TGFβ信号通路产生影响.一系列研究启发我们去寻找人为阻断ALK1通路的有效方法,达到人为调控TGFβ通路平衡的目的,从而预防早期骨关节炎的发生.本文就骨关节炎进程中软骨细胞膜受体ALK1在软骨TGF3信号通路中的作用及调控作一综述.
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川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达的影响
目的 观察川芎嗪治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)大鼠模型关节软骨中骨形态发生蛋白-2 (bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、Smad1表达的变化,并探讨川芎嗪治疗KOA的作用机制.方法 制作大鼠膝关节炎模型,将建模成功的大鼠纳入模型对照组,常规饲养,川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组行灌,正常组和模型组行等量生理盐水治疗6 w,实验结束后,各组大鼠分别行HE切片软骨Mankin评分、Western Blot 检测软骨组织BMP-2、Smad1及实时荧光定量PCR检查BMP-2mRNA、Smad1mRNA的变化.结果 各组软骨Mankin评分中,川芎嗪各剂量组和阳性对照组均较空白组高(P＜0.05),均较模型组低(P＜0.05),且川芎嗪高剂量组＜阳性对照组＜川芎嗪低剂量组(P＜0.05).正常组、川芎嗪各剂量组及阳性对照组中软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA相对表达量较模型组均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);与阳性对照组相比,川芎嗪高剂量组BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达量明显高于阳性对照组(P＜0.05),而川芎嗪低剂量组其表达则均低于阳性对照组.结论 川芎嗪可能通过上调早期KOA大鼠BMP-2mRNA及Smad1mRNA基因的表达,从而促进BMP-2及Smad1蛋白的表达,这可能是在某种程度上减轻关节软骨退变、修复软骨损伤作用的机制之一.
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Smad1在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞中的表达及意义
目的:探讨Smad1在青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨髓间质干细胞(MSCs)中的表达及其在发病机制中的作用.方法:30例12～18岁志愿者分为两组:AIS组20例,同年龄正常对照组10例.分别从髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝.采用密度梯度离心法分离MSCs,体外培养并传至P2代行表型鉴定,分别采用RT-PCR及免疫蛋白印记法检测两组患者MSCs中Smad1的表达情况.结果:AIS组与对照组Smad1 mRNA水平的平均表达率分别为4.48±0.58和1.03±0.22,蛋白水平的平均表达率分别为2.62±0.55和0.84±0.22.不论是核酸水平还是蛋白水平AIS组Smad1的表达均高于对照组(P＜0.01).结论:Smad1在AIS患者MSCs中表达强度异常,可能与AIS发病的分子机制相关.
关键词： Smad1 青少年特发性脊柱侧凸 骨髓间质于细胞 -
Smad1在糖尿病大鼠肾组织中的表达及作用
雄性Sprague-Dawley大鼠64只,SPF级,6～8周龄,体重(215±25)g,由大连医科大学动物实验中心提供。研究时间2009年1～12月。
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Cx43与Smad1在胃癌组织中的表达及相关性研究
目的：检测Cx43与Smad1在胃癌中的表达，探讨其与胃癌发生发展的关系以及两者的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测Cx43和Smad1在胃癌和正常胃组织中的表达，研究它们的表达与胃癌的关系以及二者的相关性。结果在胃癌中，Cx43的阳性表达率以及染色强度均随分化程度的降低而呈现出下降趋势（P＜0.05）。Smad1的阳性表达率随分化程度的降低而呈现出上升趋势（P＜0.05）。Cx43与Smad1在胃癌组织中的表达呈现出负相关性。结论 Cx43在胃癌组织中的低表达与Smad1高表达显示二者存在负相关，可能对胃癌的发生发展起一定作用。
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Cx43、Smad1蛋白在胃癌中的表达及意义
目的：探讨Cx43、Smad1蛋白在胃癌中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学染色法检测Cx43和Smad1在胃癌和癌旁组织中的表达情况。结果：胃癌组织Cx43的阳性表达率明显低于正常胃组织，Smad1的阳性表达率明显高于正常胃组织(P＜0.05)。胃癌组织Smad1、Cx43蛋白的表达与年龄、性别无关，与分化程度、淋巴结转移和浸润深度有关(P＜0.01，P＜0.05)。胃癌组织Cx43与Smad1的表达呈显著负相关(P＜0.01)。结论：Cx43、Smad1蛋白的异常表达可能在胃癌的发生发展中具有重要作用。
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信号蛋白Smad1对2型糖尿病肾病诊断意义的初步研究
目的 探讨信号蛋白Smad1在2型糖尿病肾病诊断中的价值.方法 选择我院2型糖尿病患者50例,根据24 h尿微量白蛋白定量分为2组:糖尿病无肾病组27例和糖尿病肾病组23例;同期相匹配的健康体检者24例为正常对照组,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定所有受试者血和尿中Smad1的水平.结果 血Smad1在正常对照组为41.4(32.8,66.7)ng/L,糖尿病无肾病组为23.6(19.7,29.3)ng/L,糖尿病肾病组为24.3(22.3,25.9)ng/L.尿Smad1在正常对照组32.7(29.1,36.7)ng/L,糖尿病无肾病组24.3(17.0,32.1)ng/L,糖尿病肾病组19.1(13.8,23.6)ng/L.血和尿Smad1在糖尿病无肾病组和糖尿病肾病组均低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),但在糖尿病无肾病组和糖尿病肾病组间差异无统计学意义(P＞0.05).多元线性回归分析显示,血和尿Smad1与肾功能相关指标均无相关性.结论 信号蛋白Smad1可能不是2型糖尿病肾病诊断中一个有价值的指标.
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左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾脏TGFβ1/Smad1表达的影响
目的:观察左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾脏TGFβ1/Smad1基因与蛋白表达的影响,并探讨补肾法对去卵巢模型大鼠肾脏TGFβ1/Smad1通路的影响.方法:将90只SD雌性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、补佳乐组、左归丸组、右归丸组、共同药组、滋阴药组、补阳药组.除假手术、空白组外均进行双侧卵巢切除.经12周治疗分别以Q-PCR法、Western blot法检测TGFβ1、TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad1在肾脏中基因和蛋白的表达.结果:与空白组相比,除假手术组外,TGFβ1、TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad1 mRNA及蛋白表达降低(P＜0.01);与模型组比较,各用药组TGFβ1、TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad1 mRNA及蛋白表达升高(P＜0.01);与补佳乐组比较,各用药组TGFβ1、TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad1表达低,其中左归丸组表达较高.结论:左、右归丸及其拆方可影响肾脏中TGFβ1/Smad1基因与蛋白的表达,其中以左归丸改变为显著.
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左归丸对去卵巢致绝经后骨质疏松症大鼠骨组织中BMP2、Smad1表达的影响
目的:通过研究去卵巢骨质疏松症大鼠股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达,探讨摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究左归丸的作用机制.方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,采用左归丸对实验大鼠治疗12周,以福善美片作为阳性对照组,正常组、假手术组作为标准对照组,模型组作为空白对照.用ELISA法检测骨质疏松症大鼠股骨BMP2和Smad1的蛋白表达.结果:正常大鼠股骨中存在BMP2和Smad1的蛋白表达.模型组大鼠股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达水平有明显的下降.左归丸组、福善美组用药12周后,与模型组相比较,左归丸组和福善美组可显著上调股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达水平.结论:①股骨中BMP2和Smad1的蛋白表达下降可能是导致骨质疏松症发生的机理之一;②左归丸能够上调BMP2和Smad1的蛋白表达,表明左归丸对骨质疏松症有一定的防治作用.
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兔下颌垂直牵张骨形成中Smad1的表达
目的:观察细胞内信号转导分子Smad1在兔下颌骨垂直牵张后骨组织中的表达,探讨Smad1在新骨形成中的作用.方法:实验于2006-01/03在辽宁医学院动物实验中心完成.实验材料:健康日本大耳白兔18只,雌雄不限,体质量1.5～1.75 kg.自制双螺旋种植型骨牵张器:外直径4.0 mm,螺距0.75 mm;内直径2.0mm,内螺距0.25 mm.实验分组:根据随机排列表分为空白对照组3只(非手术)、牵张组15只,其中牵张组1 d,1,2,4,6周每个时间点各3只.实验干预:①用摆动锯对兔下颌骨截骨,形成8 mm×5 mm骨升段,建立动物模型.②根据升骨段所在的位置安放种植牵张器,对兔下颌骨垂直牵张,1 mm/d,2次/d,牵张4 d.实验评估:分别于牵后第1天,1,2,4,6周取材,通过X射线及苏木精-伊红染色观察新骨形成情况,并用免疫组织化学法检测兔下颌骨垂直牵张过程中不同时期Smad1的表达与分布.结果:18只兔均进入结果分析.①X射线及组织学观察:牵张1周,牵张区呈大的透射区,骨皮质连续性中断,牵张间隙两端界面清晰可见,牵张间隙呈低密度影像,牵张间隙内新骨逐渐形成,6周时牵张区基本被成熟新生骨充填.②免疫组织化学观察,牵张结束后Smad1表达增强,阳性信号主要在间充质细胞和新生骨小梁边缘的成骨细胞表达.Smad1/5在牵张成骨中的定量分析结果,在牵张成骨1 d,1,2,4,6周及空白对照组Smad1表达灰度值分别为:98.18±7.18,78.94±8.58,115.50±14.60,138.48±15.69,150.01±12.81,151.06±12.85.Smad1表达高峰在牵张后1周,以后逐渐下降,牵张后4周在骨细胞微弱表达,6周时恢复到正常水平(P＞0.05).结论:Smad1参与兔下颌骨垂直牵张新骨形成过程,并在牵张成骨的早期诱导间充质细胞分化为成骨细胞过程中可能起重要作用.
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坎地沙坦对糖尿病大鼠肾小球Smad1表达的影响
目的：探讨坎地沙坦对糖尿病大鼠肾小球Smad1表达的影响。方法制备糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病组和坎地沙坦组，另设正常对照组；坎地沙坦组给予坎地沙坦5 mg? kg－1? d－1灌胃。干预12 w后，检测各组大鼠的空腹血糖、血压、24 h尿白蛋白定量、肌酐清除率、肾重指数。光镜和透射电镜观察肾小球形态学改变；Western印迹法检测肾小球 Smad1蛋白表达水平。结果与正常对照组相比，糖尿病组大鼠肾小球Smad1的表达明显增强（ P＜0．01）；坎地沙坦组肾小球Smad1的表达较糖尿病组明显减弱（ P＜0．05），24 h尿白蛋白定量等其他肾功能指标及肾小球病理改变明显改善；三组大鼠血压无差异（ P＞0．05）。结论坎地沙坦具有独立于降压以外的肾脏保护作用，可能与抑制肾小球Smad1表达有关。
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BMP-4在头颈鳞癌中的表达及其临床意义
目的:探讨BMP-4及其信号通路蛋白Smad1与p-Smad1在头颈鳞癌组织中的表达与该疾病临床病理学参数及预后的关系.方法:分别对89例头颈鳞癌与20例癌旁组织标本进行石蜡包埋,预切片染色.采用免疫组织化学方法检测BMP-4、Smad1与p-Smad1蛋白的表达,分析其在头颈鳞癌组织中的表达与各临床病理学参数的关系.应用log-rank检验分析其与头颈鳞癌预后的关系.结果:①BMP-4、Smad1与p-Smad1蛋白在头颈鳞癌组织中的表达均显著高于癌旁组织.②BMP-4与p-Smad1的表达与头颈鳞癌组织的临床分期、淋巴结转移、病理分级、转移以及复发等因素相关,而与患者的年龄无关;Smad1的表达与头颈鳞癌的临床分期和病理分级有关,而与其年龄、淋巴结转移和复发等因素均无关.③BMP-4与p-Smad1的表达与头颈鳞癌患者预后有关,而Smad1的表达与患者的预后无关.结论:检测BMP-4、Smad1与p-Smad1的表达对头颈鳞癌诊断具有重要意义,并可有效地预测其转移与预后.
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Smad1参与调节雌激素在乳腺癌细胞中的促增殖作用
目的:观察在雌激素促进乳腺癌发生、发展的过程中,Smad1与雌激素的相互作用关系,以及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭功能的影响,并探讨其作用机制.方法:通过Western印迹法以及实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)技术检测雌激素作用与Smad1表达的相关关系;采用小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术下调乳腺癌细胞中Smad1表达,并检测其对雌激素作用的影响.通过Transwell法、免疫组化法(IHC)、细胞计数法等研究Smad1表达情况对乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响.结果:Smad1能够在雌激素刺激下提高其转录和翻译效应,雌激素作用4h后磷酸化Smad-1(p-Smad1)被激活,并在12 h达到大值(P＜0.001).乳腺癌肿瘤组织中Smad1的表达强于癌旁组织,且Smad1水平与雌激素受体α(ERα)正相关,而p-Smad1的活化被抑制.应用RNA干扰技术沉默两种乳腺癌细胞中Smad1后,细胞体外增殖速度显著下降(P＜0.05);在体内试验中,肿瘤的生长也受到显著抑制(P＜0.05).结论:雌激素对乳腺癌细胞的促增殖和迁移作用依赖于Smad1;骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-Smad1途径在雌激素促乳腺癌发生和发展过程中可能发挥重要的调节作用.
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密骨胶囊对自然衰老雄性大鼠骨髓Smad1、Smad5、Smad6基因表达的影响
目的 研究密骨胶囊对自然衰老雄性大鼠股骨骨髓中Smad1、Smad5、Smad6基因表达的影响.方法 取12月龄自然衰老SD雄性大鼠100只随机分为2组,每组50只.自鼠龄12月龄始,分别给予生理盐水、密骨胶囊灌胃,在鼠龄14、16、18、20、22月龄时,每组各取10只大鼠,取右股骨,DEXA检测BMD,取左股骨骨髓,RT-PCR半定量检测Smad1、Smad5、Smad6基因表达.结果 在14 ～ 22月龄阶段,密骨胶囊组与空白对照组相比较,密骨胶囊可维持股骨BMD (P=0.797),上调Smad1、Smad5 mRNA表达水平(P＜0.01),下调Smad6 mRNA表达水平(P＜0.01).结论 密骨胶囊可以上调股骨骨髓中Smad1、Smad5基因表达水平,下调Smad6基因表达水平,这可能是其促骨形成、修复骨损伤作用的分子机制之一.
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Smad1、Smad5在肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的研究
目的:观察Smad1、Smad5在腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中的表达,探讨肾阳虚不育的病理机制,为防治男性不育提供可靠的实验依据.方法:60 d雄性SD大鼠48只,随机分为6组(肾阳虚7、14、21 d组;正常对照7、14、21 d组),每组8只.以腺嘌呤300 mg/kg给大鼠灌胃,诱导肾阳虚不育大鼠模型,于灌胃第7、14、21 d,用免疫组化SABC法测定Smad1、Smad5在其睾丸中的表达.结果:Smad1表达见于所有正常对照组及模型组大鼠睾丸各级生精细胞的胞质内,支持细胞及间质细胞未见表达;灌胃第7、14 d与正常对照组相比差异无显著性(P＞0.05),第21 d的表达较正常对照组及第7、14 d明显减弱(P＜0.05).Smad5表达见于正常对照组及腺嘌呤灌胃第7 d大鼠睾丸的初级精母细胞及精原细胞的胞核内,两组比较差异无显著性(P＞0.05),其余各级生精细胞、支持细胞及间质细胞均未见表达;灌胃第14、21 d大鼠睾丸中未见Smad5表达.结论:肾阳虚大鼠睾丸中Smad1表达的减弱及Smad5的无表达,可能是导致其不育的病理机制之一.
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3,4-二氯异香豆素对胃癌细胞Smad1和PTEN基因的影响
目的:探讨蛋白酶体抑制剂3,4-二氯异香豆素(DCI)对人胃癌细胞株BGC-823细胞Smad1及PTEN基因的影响.方法:MTT法检测DCI、5-FU单药及联合干预后BGC-823细胞的生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率及周期分布状况,RT-PCR法检测Smad1和PTEN基因表达.结果:75 μmol·L-1 DCI干预24 h后,细胞生存率为(84.0±9.60)%,750 μmol·L-1DCI作用72 h后,细胞生存率仅有(20.3±9.7)%;同时,当DCI浓度从150 μmol·L-1上升至600 μmol·L-1时,细胞凋亡率相应地从15.0%增加至27.8%;DCI可以增强5-FU对胃癌细胞的杀伤作用;DCI浓度依赖性地上调Smad1和PTEN基因表达(P<0.05),当DCI浓度从150 μmol·L-1上升至600 μmol·L-1时,Smad1和PTEN基因分别从上调19.45%、6.16%升至上调72.85%、48.46%.结论:蛋白酶体抑制剂DCI可能通过干预骨形态发生蛋白(BMP)信号通路减少Smad1降解、增加PTEN表达,产生抗肿瘤效应.
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硅酸二钙离子溶出液体外促进成骨细胞分化及对BMP2和Smad1表达的影响
目的 探讨硅酸二钙离子溶出液促进成骨细胞分化的能力及其可能的机制.方法 人成骨细胞株MG63细胞分别培养于硅酸二钙离子溶出液条件培养基(实验组)及正常培养基(对照组)中,于培养3、6、9、12 d后检测细胞分化标志物和骨形态蛋白2(BMP2)及其信号传递蛋白Smad1基因的表达,同时以ELISA法检测分泌至培养基中的BMP2浓度.以茜素红S染色定量检测钙矿沉积情况.结果 硅酸二钙离子溶出液条件培养基中硅离子浓度显著高于正常培养基,差异有高度统计学意义(P<0.01).此条件培养基能促进MG63细胞晚期分化,并能促进其钙矿沉积,也能促进BMP2的分泌及其基因表达,以及Smadl基因的表达.结论 硅酸二钙离子溶出液有促进MG63细胞分化的能力,这可能与高浓度硅有关,刺激MG63细胞表达BMP2及其信号传递蛋白可能是其作用机制之一.
