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MH2结构域文献资料
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人腱细胞Smad2、Smad4基因MH2结构域的克隆和序列鉴定
目的从人腱细胞内克隆转化生长因子-β特异的细胞内信号转导基因Smad2、4的功能性结构域-MH2结构域.方法原代培养人腱细胞,从培养的细胞中提取总RNA,逆转录合成单链cDNA;设计引物进行PCR,扩增Smad2、4基因MH2结构域的基因片段,将其定向插入pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α.挑选阳性克隆并进行核苷酸序列测定分析.结果测序结果与Genebank中克隆的基因序列完全一致.结论从人腱细胞中克隆成功Smad2、4基因的MH2结构域,证实了Smad2、4基因在人腱细胞中的表达;提示人腱细胞内存在SMAD2、4信号转导途径,TGF-β对人腱细胞分化的调节可能是通过SMAD2、4信号转导途径实现的.
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人牙乳头细胞Smad1基因MH2结构域的cDNA的分子克隆
目的:从人牙乳头细胞内克隆骨形成蛋白(BMP)细胞内信号转导基因Smad1的功能性结构域-MH2结构域.方法:原代培养人牙乳头细胞,从培养的细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第1条链;设计上下游引物,进行RT-PCR,扩增Smad1基因MH2结构域的基因片段;将所获得的基因片段定向插入PUC19载体;转化大肠杆菌JM109,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定.结果:获得的Smad1 MH2结构域的cDNA片段大小为444bp,并且成功构建PUC19/MH2重组质粒.结论:人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,BMP调控人牙乳头细胞分化可能是通过Smad1信号途径实现的.
