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不同蜂针剂量对类风湿性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞活力的影响
目的:观察不同剂量的蜂针对佐剂诱导的类风湿性关节炎大鼠成纤维滑膜细胞活力的影响,探讨蜂针治疗类风湿性关节炎的可能机制.方法:建立大鼠佐剂性类风湿性关节炎动物模型,将Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和单蜂1 min组、双蜂1 min组、三蜂1 min组、单蜂30 s组,观察各组足底厚度以及HE染色的病理变化,同时关节滑膜取材,采用MTT法检测成纤维样滑膜细胞增殖情况.结果:足底厚度比较,1 min蜂针组较模型组以及其他蜂针剂量组别低(P＜0.01);HE病理形态学评分,模型组病理形态学改变评分较各蜂针治疗组高(P＜0.05);MTT检测成纤维滑膜细胞活力中,24h时间点开始出现,1min蜂针组抑制成纤维细胞增殖较模型组显著(P＜0.05),48 h较24 h时间点各组差异更显著.结论:适当剂量的蜂针能减轻类风湿性关节炎大鼠足底厚度,降低病理形态学评分,其机制可能跟蜂针抑制成纤维样滑膜细胞增殖活力有关.
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五种中药对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用
目的:观察单味中药黄芪、丹参、淫羊藿及复方右归饮药物血清和煎剂以及雪莲花药物血清及其醇提液对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用.方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌.按10倍于任用剂量进行SD大鼠灌胃,心脏采血,制备血清.取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入含药血清、煎剂及雪莲花醇提液.药物血清分为15％、10％、5％和1％浓度,其煎剂及雪莲花醇提液浓度分为10-2、10-3、10-4、10-5,作用3天后用MTT法测定细胞活力.结果:雪莲花含药血清及其醇提液在4个浓度组均显示促进细胞增殖.结论:雪莲花具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用.
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苏木含药血清联合顺铂对肺癌PG细胞的增殖抑制及Cyclin D1、 CDK4蛋白表达的影响
目的:探讨苏木含药血清对人肺癌PG细胞株的增殖抑制作用及对Cyclin D1、CDK4蛋白表达的影响.方法:将肺癌PG细胞分为空白组、苏木组、苏木+顺铂组、顺铂组4组,四唑盐比色法(MTT)中各组根据血清浓度的不同分为20％、10％、5％、2.5％四组,观察各组PG细胞的增殖抑制作用;免疫荧光法中各组血清浓度为20％,采用激光共聚焦显微镜观察各组Cyclin D1、CDK4蛋白表达.结果:MTT法中10％、20％苏木组细胞的增殖抑制率明显,具有作用时间和剂量依赖性,但低于顺铂组和苏木+顺铂组,苏木+顺铂组PG细胞的增殖抑制率与顺铂组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).免疫荧光结果显示:与空白组比较,苏木组CDK4、Cyclin D1蛋白减少(P＜0.05),顺铂组和苏木+顺铂组CDK4、Cyclin D1蛋白的表达亦减少(P＜0.01);且顺铂组和苏木+顺铂组CDK4、Cyclin D1蛋白的表达低于苏木组(P＜0.05).与顺铂组比较,苏木+顺铂组CDK4、Cyclin D1蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:苏木含药血清通过下调Cyclin D1、CDK4蛋白表达抑制PG细胞增殖.
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半夏泻心汤及其拆方对胃肠平滑肌细胞增殖的影响
目的:通过观察半夏泻心汤及其拆方对大鼠胃肠平滑肌细胞增殖的影响,探讨其调节胃肠运动的作用机制.方法:提取大鼠胃肠平滑肌细胞,免疫组化方法鉴定后稳定培养;采用血清药理学和MTT法观察半夏泻心汤及其拆方各组对胃肠平滑肌细胞增殖的影响.结果:成功获取胃肠平滑肌细胞;24 h,仅甘补组、辛开苦降组OD值均高于空白组,且有统计学差异(P ＜0.05);48 h,全方组、辛开组、苦降组、苦降甘补组OD值高于空白组,且有显著性统计学差异(P＜0.01);72 h时,测得各用药组OD值均高于空白组,且具有显著性统计学差异(P＜0.01).结论:半夏泻心汤及其拆方各组的含药血清,可以不同程度的促进胃肠平滑肌细胞的增殖,推测其可能是半夏泻心汤调节胃肠运动的作用机制之一.
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低氧环境下罗勒多糖对卵巢癌细胞生物学行为的影响
目的:观察不同氧环境下中药罗勒多糖对人卵巢癌细胞株SKOV3生物学行为的影响,探讨其抗卵巢癌作用的可能机制.方法:罗勒多糖分别在常氧(21%O2、5%CO2)和乏氧(1%O2、5%CO2和94%N2)环境中作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,形态学观察不同氧环境下各组细胞形态差异;细胞凋亡-Hoechst 33258染色检测药物对人卵巢癌细胞凋亡情况的影响;MTT法检测各组细胞增殖能力的变化.结果:与对照组相比,乏氧环境下罗勒多糖能够促进人卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡,抑制SKOV3细胞增殖,而常氧环境下罗勒多糖作用相反.结论:罗勃多糖在常氧及乏氧环境下对人卵巢癌细胞株SKOV3生物学行为的影响效应截然相反,提示抗肿瘤药物及生物疗法的体外机制研究设计应充分考虑氧环境的影响.
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噻唑蓝法检测中药黄芪等复方制剂对人白血病细胞的影响
目的:运用噻唑蓝(MTT)法检测3种不同浓度中药黄芪复方药液对人白血病细胞的影响.方法:分离人白血病骨髓单个核细胞,MTT法检测不同浓度中药黄芪复方药液对细胞生长的影响.结果:浓度为1g/mL的药液与0.5g/mL、1.5g/mL药液比较差异均有统计学意义(P<0.05).浓度0.5g/mL与1.5g/mL药液比较差异无统计学意义.结论:中药黄芪药液对人白血病细胞体外生长抑制的影响不与药物浓度成正比.
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小鼠体外T淋巴细胞模型的优化及在中药筛选中的应用
目的:优化MTT法测定小鼠体外T淋巴细胞的实验条件,并对6种种子类中药的活性进行筛选.方法:无菌分离小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,与待测药物预孵1h后,加入刀豆蛋白A刺激剂继续培养,总计培养72h后收获细胞,进行MTT染色,以酶标仪进行测定.结果:应用MTT法,在(2～30)×109/L范围内细胞密度与A值呈线性正相关,优化后的测定条件为细胞悬液中加入10μl的Con A,孵育72h后再加入20μl的MTT,继续孵育4h,测定波长为512nm.结果表明,这6种种子类中药对小鼠T淋巴细胞均有一定的抑制作用.结论:用于进行中药的抑制T淋巴细胞活性的体外筛选.
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中药方剂体内及含药血清抗肿瘤作用的比较
目的:通过动物体内抑瘤实验和血清药理学实验比较,探讨体内押瘤试验与血清药理学实验的一致性.方法:选择4个体内抗癌试验有效的样品(中药复方制刺)进行体内及血清药理学的试验.其中血清药理学实验采用10%和20%的含药血清进行体外抑瘤试验,用MTT法检测4种样品含药血清对不同肿瘤细胞的细胞增殖的影响.结果:4种样品体内抑瘤实验显示明确的抗肿瘤活性,血清药理学同样显示一定的抗癌活性,且G、H药P<0.01.X、T药P<0.05.结论:体内抑瘤有效的抗肿瘤方剂血清药理学检测均有抗癌活性,与体内试验一致.
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三种姜黄色素对体外人肝癌细胞HepG2PPARγ蛋白的影响
目的:研究3种姜黄色素对体外培养人肝癌细胞HepG2 PPARγ蛋白的作用.方法:MTT法检测3种姜黄色素对体外培养人肝癌细胞HepG2的抑制作用;酶联免疫吸附检测人肝癌细胞HepG2 PPARγ蛋白的量;免疫组化法检测三种姜黄色素对人肝癌细胞的作用.结果:3种姜黄色素在高浓度时对人肝癌细胞HepG2有明显的抑制作用(P＜0.01);且在4～16 μg· mL-1的剂量范围内,随浓度升高抑制效果呈剂量依赖关系.在高浓度时,二脱甲氧基姜黄素比一脱甲氧基姜黄素组抑制作用好(P ＜0.001);3种姜黄色素都能增加PPARγ蛋白的量,结论:三种姜黄素均能激活PPARγ蛋白活性,这可能也是它体外抑制肝癌细胞HepG2生长的机理之一.
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二脱甲氧基姜黄素对体外HepG2 Caspase-3活性的影响
目的:研究二脱甲氧基姜黄素对体外培养人肝癌细胞HepG2 Caspase-3蛋白酶活性的作用.方法:MTT法检测二脱甲氧基姜黄素对体外培养人肝癌细胞HepG2的抑制作用;分光光度检测其对Caspase-3酶活性的影响;免疫组化法检测其对人肝癌细胞HepG2 Caspase-3蛋白的表达.结果:二脱甲氧基姜黄素对人肝癌细胞HepG2有明显的抑制作用(P＜0.001)且呈剂量关系,与姜黄素有显著差异(P＜0.001);二脱甲氧基姜黄素能增强Caspase-3酶活性,增强Caspase-3蛋白的表达.结论:二脱甲氧基姜黄素能激活Caspase-3蛋白活性,这可能也是它体外抑制肝癌细胞HepG2生长的机理之一.
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雷公藤多苷对小鼠腹腔激活巨噬细胞杀伤活性和NO分泌影响的实验研究
雷公藤多苷可以作为免疫抑制剂用于自身免疫性疾病的治疗,如子宫内膜异位症、哮喘、肝炎等,既可以抑制细胞免疫又可以抑制体液免疫.目的:探讨雷公藤多苷(TWP)对小鼠腹腔活化巨噬细胞杀伤活性和NO分泌的影响.方法:分离小鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖(LPS)激活,给予雷公藤多甙(TWP)进行共同孵育;分别以间接MTT法和Griess试剂检测巨噬细胞的杀伤活性和上清NO的含量变化.结果:雷公藤多苷能有效抑制小鼠腹腔激活巨噬细胞的杀伤活性以及NO的生成.
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何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响
目的:观察何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响,考察何首乌入血成分是否具有肝细胞毒作用.方法:采用血清药理学方法制备何首乌含药血清及空白对照组血清,作用于体外培养的人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞,MTT法检测不同浓度血清对两种细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察各浓度血清作用后两种细胞的形态变化;测定含药血清作用于两种细48 h后,细胞培养液转氨酶活性变化.结果:何首乌含药血清对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的活力没有明显影响.两种细胞含药血清组与空白血清组相比,细胞形态都没有发生明显改变,细胞培养液转氨酶活性(ALT、AST)也没有显著差异(P＞0.05).结论:何首乌含药血清对体外培养的两种人源肝细胞活性均没有明显影响.
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全蝎组织提取物抗肿瘤活性的研究
目的:通过对全蝎提取物的初步分析,探讨全蝎组织中的抗癌活性.方法:全蝎组织经粉碎、超声、萃取后提取的物质,采用薄层层析法对全蝎提取物进行初步化学分析,应用MTr法对全蝎组织提取物进行胃癌细胞株(胃癌-823)的细胞毒作用.结果:薄层层析分析显示,全蝎组织提取物中含有类组胺物质,与对照物标准组胺在相应位置显示荧光斑点,细胞毒实验表明全蝎组织提取物对胃癌细胞有一定的杀伤作用.结论:初步分析表明全蝎提取物中含有类组胺化学成分并具有一定的抗肿瘤作用.
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旱生香茶菜总二萜体外对10株人源性肿瘤细胞增殖的影响
目的:研究旱生香茶菜总二萜(Diterpenoids of Isodon Xerophilus,IXD)体外对10株人源性肿瘤细胞增殖的影响.方法:采用改良MTT法或SRB法测试其在体外对10株人肿瘤细胞增殖的影响.结果:IXD对K562、CA、CNE、BGC、MKN、A549、T-24七株人肿瘤细胞增殖的IC50值分别为5.42、6.17、17.05、19.20、24.00、24.04、25.48μg/mL,均小于30.00μg/mL;对SKOV3、HeLa、GLC三株人肿瘤细胞增殖的IC50值分别为735.3、740.5、2.13×108μg/mL,均大于30.00μg/mL.结论:IXD在体外显示较强且广谱的细胞毒活性.
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五种祛风湿类中药对小鼠T淋巴细胞的影响研究
目的:应用小鼠体外T淋巴细胞模型,对几种常见祛风湿类中药进行体外实验研究.方法:无菌分离小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,与待测药物预孵1小时,加入刀豆蛋白A刺激剂继续培养,总计培养72小时后收获细胞,进行MTT染色,以酶标仪进行测定.结果:放线菌酮对T细胞有强的抑制作用,其IC50为4.01×10-4mol/L,五种祛风湿类药材对小鼠T淋巴细胞均有一定的抑制作用,其中五加皮的抑制作用强.结论:可以把应用ConA诱导的T淋巴细胞作为药物抗炎活性筛选的一种模型.
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α-细辛醚对无镁细胞外液培养海马神经元构建难治性癫痫细胞模型的影响
背景:无镁细胞外液处理培养的海马神经元可诱导产生反复自发性癫痫样放电,该模型可作为临床难治性癫痫细胞模型.目的:探讨难治性癫痫细胞模型中α-细辛醚对神经元的保护作用.方法:分离培养新生24 h 内的SD大鼠海马神经元,取经鉴定的海马神经元,加入含终浓度为7.5,15,30,60,120 mg/La-细辛醚的维持培养液培养4 h 后,换为无镁液建立难治性癫痫细胞模型,3 h后恢复含α-细辛醚的维持培养基继续培养24 h,MTT 法检测海马神经元活力.结果与结论:经无镁细胞外液培养后,海马神经元的活力显著降低(P < 0.01),α-细辛醚处理后,海马神经元的活力显著升高(P < 0.01),且随α-细辛醚浓度的增加,海马神经元的相对活力升高.说明α-细辛醚可以抑制难治性癫痫细胞模型中的神经元损伤,发挥神经元保护作用,且具有剂量依赖性.
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纳米银猪脱细胞真皮敷料的细胞毒性评估
背景:传统的猪皮敷料具有保护创面的作用,但不具有主动抗感染功能.目的:评估自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的体外细胞毒性,评价其作为新型敷料的可行性.方法:用四甲基偶氮唑盐比色法检测自制纳米银猪脱细胞真皮敷料100%和50%的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929细胞)相对增殖率的影响,并评价其细胞毒性.倒置显微镜观察各组细胞形态变化,培养2,4,7d后用酶联免疫检测仪测定溶液吸光度值来评估细胞毒性.结果与结论:L-929细胞在自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的浸提液中增殖良好,其细胞毒性实验显示细胞毒级为1级,实验组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无显著性意义(P＞0.05).说明自制纳米银猪脱细胞敷料无细胞毒性,作为新敷料具有可行性.
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改良五黄油对成纤维细胞生长与增殖的影响
背景:烧伤创面外用药五黄油具有抑菌作用,能促进创面愈合:但在抑制瘢痕形成等方面疗效不确切.目的:观察改良五黄油不同药物浓度和药物作用时间对人成纤维细胞体外生长增殖的影响.设计、时间及地点:对比观察,细胞学体外实验于2006-04／2007-01在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成.材料:包皮来自南昌大学第一附属医院和江西省儿童医院泌尿外科行包皮环切术的患者,年龄在2-12岁.患者家属均签署知情同意书.五黄油、改良五黄油复方制剂工作液(水溶性)由南昌大学第一附属医院药剂科提供.方法;体外培养人成纤维细胞.分为实验组和对照组.实验组加入300 g／L改良五黄油工作液;对照组加入300 g／L五黄油工作液.两组分别用无血清培养液配制成为6个质量浓度:0 g／L．(空白对照组),100,150,200,250,300 g／L.主要观察指标:于2,3,4,5,6 d,以MTT法检测细胞生长增殖情况;于2,4,6,8,10 d观察细胞生长抑制率.结果:以0～300 g/L．质量浓度药物作用人成纤维细胞,其增殖抑制程度与改良五黄油的浓度存在正相关性;其抑制程度与培养时间无相关性.实验组与对照组相比,改良五黄油质量浓度在300 g/L时,8～10 d对成纤维细胞的抑制率更强,两组之间差异有显著性意义(P<0．01).结论:在一定的体外作用时间范围内,改良五黄油对体外成纤维细胞的增殖有一定抑制作用,并且抑制增殖的能力与药物浓度呈正相关.与五黄油相比较,300 g／L改良五黄油对体外成纤维细胞的生长抑制,有更好的效果.
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紫杉醇磁性纳米脂质体的体外细胞抑瘤效果
背景:因紫杉醇的水不溶解性质,目前多采用包埋方式载药,如被脂质体包埋或者与白蛋白结合等.目的:采用磁性纳米脂质体包埋紫杉醇,观察紫杉醇磁性纳米脂质体对几种常见肿瘤细胞株的抑制效果.设计、时间及地点:材料一细胞学体外实验,于2008-10/2009 03在解放军广州军区广州总医院药学部和医学实验科完成.材料:肺癌细胞株(SPCA-1)、卵巢癌细胞株(8910)、肝癌细胞株(HEPG-2)、黑色素瘤细胞株(B16F10)均由解放军广州军区广州总医院医学实验科提供.方法:采用共沉淀法制备Fe3O4纳米粒,同时施加超声处理减少粒子的软团聚合,然后将硬脂酸、乙醇、Tween 80和紫杉醇在(73±2)℃水浴中混合搅拌至透明,迅速加入分散好的磁液,搅拌均匀形成含磁悬液,冷冻干燥后即得紫杉醇磁性纳米脂质体.复苏4种肿瘤细胞,培养至对数生长期后按1×1010L-1接种于96孔板,180 μL/孔,再加入紫杉醇磁性纳米脂质体20 μL,在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养48-72 h.通过预实验,确定以紫杉醇磁性纳米脂质体乳液中含紫杉醇0.19 g/L和0.98 g/L这两个浓度进行MTT细胞毒性实验.主要观察指标:4种肿瘤细胞的MTT毒性结果.结果:两种浓度的紫杉醇磁性纳米脂质体对肺癌细胞(SPCA-1)、人卵巢癌细胞(8910)、肝癌细胞(HEPG-2)、黑色素瘤细胞(B16F10)的抑制率分别达到93.23%和93.13%、47.70%和79.12%、94.94%和99.64%、84.46%和95.03%,具有高敏感性.结论:紫杉醇磁性纳米脂质体对上述4种人肿瘤细胞具有很好的抑制作用,基本达到临床药物需要.
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CM-DiI标记大鼠脂肪干细胞的效力
背景:CM-DiI是DiI的衍生物,因具有一定的水溶性,且含有氯甲基化活性巯基部分,使其更易嵌入、弥散并稳固地结合到整个细胞膜上,使染色更快捷、均匀、持久.目的:进一步验证荧光染料CM-DiI标记大鼠脂肪干细胞的可行性.方法:切取大鼠腹股沟区皮下脂肪组织,采用胶原酶消化法体外分离培养脂肪干细胞,取第3代细胞分为实验组和对照组,用质量浓度4 mg/L的CM-DiI对实验组细胞进行标记,于6,12,24,48 h观察CM-DiI标记脂肪干细胞体内示踪效果.结果与结论:荧光显微镜下CM-DiI标记细胞的胞浆、胞膜均显红色荧光,标记的脂肪干细胞呈梭形,保持了良好的正常形态,CM-DiI标记阳性率为100%,标记早期细胞形态呈荧光环状,48 h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光.与对照组比较,CM-DiI标记的细胞增殖后形态、上清液乳酸脱氢酶含量及MTT值均无明显变化 (P > 0.05).细胞移植后4 h后,在心、肺组织可见到发出红色荧光的标记细胞.提示CM-DiI能有效标记体外培养的脂肪干细胞,并在细胞内稳定表达,且标记细胞形态良好,对活体细胞无毒性.体内移植后,有良好的示踪效果.
