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聚焦超声有效破坏猪离体皮下脂肪的理想辐照剂量探讨
目的 评价聚焦超声在相同功率(200 W)不同辐照时间下对猪离体皮下脂肪的破坏效应从而筛选出安全有效的辐照剂量.方法 新鲜猪离体皮下脂肪分成A(60块)、B(30块)两组,A组辐照时间为5、10、20、30、60及90 s,辐照后行MTT检测脂肪细胞活性并计算凝固性坏死体积；B组辐照时间为30、60及90 s,测量辐照前后辐照区皮肤和靶区脂肪的温度,并取辐照区皮肤行组织学检查.结果 当辐照时间为5 s时,MTT检测未见凝固性坏死.在之后≥10 s的时间剂量中,靶区坏死体积、辐照区皮肤和靶区温升与辐照时间成正比(P＜0.05).当辐照时间为90 s时,辐照区皮肤明显损伤.结论 当辐照功率为200 W时,辐照时间10～60 s,能有效的破坏靶区脂肪而不损伤皮肤.
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顺铂耐药及非耐药肺癌细胞对竹红菌乙素的吸收及其光动力杀伤效应的比较
目的对比研究耐药及非耐药肺癌细胞株对竹红菌乙素(HB)-PDT的反应性,对比研究细胞耐药对光敏剂竹红菌素的吸收是否造成影响,探讨肿瘤细胞耐药的相关机制及HB-PDT对耐药肿瘤杀伤的可能性.方法 (1)以不同浓度的竹红菌乙素(HB)分别孵育人肺腺癌细胞系A549细胞及经顺铂诱导耐药的多药耐药细胞系A549/DDP细胞,然后分别以铜蒸气激光混合光在饱和光剂量条件下进行照光处理,照光后置于37℃含5% CO2的孵箱中继续孵育24 h,然后用MTT法分别测定不同HB浓度、不同细胞的存活率,分别绘制HB对2种细胞杀伤曲线并拟合曲线方程,根据方程求出HB对2种细胞的半数杀伤浓度(IC50).根据曲线、拟合曲线方程及IC50比较经顺铂诱导耐药及非耐药细胞系HB-PDT杀伤效应有无差别.(2)对人肺腺癌细胞系A549细胞以及顺铂诱导的多耐药细胞系A549/DDP细胞进行光敏剂吸收实验,分别测定并绘制光敏剂被2种细胞吸收的标准曲线、浓度-含量关系曲线、时间-含量关系曲线,根据曲线及拟合方程比较分析2种细胞对光敏剂竹红菌素的吸收差异.结果 HB-PDT对经顺铂诱导耐药及非耐药细胞系均具有很强的杀伤效应,二者无统计学差异(P>0.05):竹红菌乙素-PDT对A549细胞及A549/DDP细胞的半数杀伤浓度(IC50)分别为33.82 ng/ml和34.19 ng/ml.A549/DDP细胞与A549细胞对光敏剂吸收的标准曲线、浓度-含量关系曲线、时间-含量关系曲线均极为相似,顺铂诱导耐药的细胞系A549/DDP细胞与亲代细胞系A549细胞间对光敏剂的吸收无统计学差异(P>0.05).2种细胞吸收曲线对比后未见到耐药细胞在光敏剂吸收过程中将光敏剂排出细胞外所引起的细胞内光敏剂含量降低,证实A549/DDP细胞中不存在将光敏剂"泵"出细胞外的作用.结论 HB-PDT对经顺铂诱导耐药及非耐药细胞系均具有很强的杀伤作用.对顺铂产生多药耐药的肿瘤细胞与非耐药肿瘤细胞对HB的吸收无明显差别,因而对顺铂耐药的肿瘤细胞对于PDT仍然非常敏感.
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大黄提取液体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的实验研究
目的:研究大黄提取液在体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用.方法:用hela细胞做体外培养实验,以不同剂量的大黄提取液作用于病毒复制周期的各个阶段,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变(CPE)、MTT染色细胞保护率(MTT法)作为评价指标,判断药效,对大黄提取液抗HSV-Ⅱ作用进行评价.结果:大黄提取液对hela细胞的增殖无明显作用,且对hela细胞毒性极低,对病毒有直接灭活作用;可干扰病毒向宿主细胞吸附,还可有效抑制病毒复制.结论:大黄提取液在体外对HSV-Ⅱ有显著的抑制和杀伤作用,并且有效抑制病毒复制.
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应用快速微量培养人肝癌细胞抗癌药敏试验的临床意义
目的:为肝癌治疗中合理使用抗癌药提供可靠的科学依据.方法:采用改良MTT比色分析法测定35例肝癌细胞原代培养药敏.结果:35例人肝癌细胞抗癌药敏试验有33例获得成功,在六种抗癌药中敏感率高的为EPB,其后依次为DDP、MMC、5-Fu、MTX和VCR;人肝癌细胞对6种抗癌药敏感性的不同浓度间比较皆有显著性.结论:EPB和DDP一般为肝癌化疗的首选药,而VCR几乎没有作用;肝癌细胞对抗癌药有明显的药物浓度依赖性.
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骨水泥中抗癌药的释放、活性及抗肿瘤效应的实验研究
目的:确定化疗药丝裂霉素、长春新碱和5F-尿嘧啶掺入骨水泥后的释放及活性,评价其掺入骨水泥后经皮介入治疗小鼠移植瘤模型的抗肿瘤效应.材料和方法:采用洗提法和MTT法测量药物的释放及活性.60只昆明种小鼠,每只小鼠皮下注射,S180肉瘤细胞1×106,7天后随机分为4组,每组15只.3组为治疗组,每一组各以上述一种抗癌药骨水泥0.5ml瘤块内注入;另1组为对照组,仅注入单纯骨水泥0.5ml.记录每组10只荷瘤小鼠肿瘤大小变化,余5只作病理检查.结果:三种药物均可从骨水泥中释放并具有杀伤肿瘤细胞效应;3组治疗组中,肿瘤体积在1～10天内逐日缩小或不增大;而对照组中肿瘤体积持续增大.病理检查见治疗组水泥块周边肿瘤组织片状坏死.结论:骨水泥携带常用抗癌药具有抗肿瘤效应.
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HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用
目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯化HSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响.方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化,所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定,Bradford法测定蛋白浓度;利用MTT方法检测HSP70-肽复合物对HepG-2细胞增长的情况.结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带,分子质量为70 kDa;Western blot结果证实为HSP70,每10 g组织终获得1.5 mg的HSP70;HSP70刺激组12,48,72 h与对照组的A值之间有显著差异(0.1 mg/L:t=-0.2500,P=0.00;t=-0.1777,P=0.001;t=-0.3094,P=0.001;0.5 mg/L:t=-0.2878,P=0.00;t=-0.2044,P=0.00;t=-0.3285,P=0.00;1 mg/L:t=-0.3118,P=0.00;t=-0.2592,P=0.00;t=-0.1994,P=0.025;5 mg/L:t=-0.4007,P=0.00;t=-0.1302,P=0.016;t=-0.2537,P=0.005),细胞存活率明显高于对照组(P＜0.01).结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP70肽复合物;HSP70肽复合物可以促进HepG-2细胞的生长.
关键词： HSP70-肿瘤肽复合物 纯化 肝癌 HepG-2细胞系 Western blot MTT -
用MTT和resazurin对一线抗结核药物进行药物敏感性检测的多中心研究
目的:多中心评价两种快速价廉方法,MTT(3-[4.5-二甲基噻唑-2-一价烃基]-2.5-溴化二苯基四唑)和resazurin(刃天青)试验用于一线抗结核药物利福平(RMP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)和链霉素(SM)的药敏检测.方法:30株编过号的结核分枝杆菌被送往拉丁美洲6个国家的7个试验室.每个试验室使用盲法,应用MTT和刃天青显色法进行一线药物利福平、异烟肼,乙胺丁醇和链霉素的药敏检测.获得的低抑菌浓度的结果与传统的罗氏培养基比例法的结果进行对比.结果:确定临界浓度后,RMP,INH和EMB的结果非常好,特异性和敏感性介于96%-99%之间.结论:MTT和刃天青试验是非常有希望的一种方法,为中等资源以及资源贫乏国家进行一线结核药物的快速、价廉药敏试验方法提供了选择.
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洛铂对肺癌HTB-56、HTB-56/DDP细胞株生长抑制作用的研究
目的 探讨不同浓度洛铂(LBP)对肺癌HTB-56、HTB-56/DDP细胞株生长抑制作用的影响,及不同药物浓度对细胞影响之间的关系.方法 选择人肺癌HTB-56及其耐DDP细胞株HTB-56/DDP为研究对象,用MTT比色法检测不同浓度LBP作用于腺癌细胞株不同时间的OD值(optical density,光密度),比较药物剂量与其生长抑制效应之间的关系.结果 LBP能够抑制肺癌细胞株HTB-56及其耐DDP细胞株HTB-56/DDP的生长,并呈浓度与时间的依赖关系,随着浓度的升高和时间的延长对两种细胞的抑制率也随之增大.结论 LBP能够显著的抑制HTB056及其耐DDP细胞株HTB-56/DDP的细胞增殖,并不与DDP交叉耐药.随着小剂量LBP作用时间的延长,细胞的生长抑制呈现浓度与时间的依赖.
关键词： 支气管肺癌 HTB-56、HTB-56/DDP细胞株 洛铂 MTT -
不同浓度DAPT对体外培养的糖尿病大鼠动脉血管平滑肌细胞增殖影响的研究
目的 探讨不同浓度DAPT对体外培养的糖尿病大鼠动脉血管平滑肌细胞增殖的影响,探寻适宜浓度,为研究糖尿病血管再生奠定基础.方法 取已完成鉴定冻存的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞,进行复苏与传代,分为实验组和对照组.对照组不加抑制剂,实验组不同浓度的DAPT(0.15、0.30、0.45、0.60、0.75、1.25、2.50、5.00、7.50、10.00、20.00μmol/L),观察0、12、24、48、72 h后进行MTT监测.结果 DAPT对DM大鼠VSMCs有抑制作用,这种抑制作用在0.15～7.50μmol/L浓度之间呈时间-浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),7.50μmol/L浓度以上无明显变化,无统计学意义(P>0.05);根据作用曲线,各时间段DAPT对DM大鼠VSMCs细胞的半抑制率大约出现在0.15μmol/L和2.50μmol/L,且72小时时对DM大鼠VSMCs细胞的半抑制率较其余各时间段明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DAPT对DM大鼠VSMCs有抑制作用,一定浓度之间呈时间-浓度依赖性,浓度过低或过高均无抑制作用,为糖尿病血管再生提供了新位点.
关键词： 血管平滑肌细胞 体外原代培养 γ-分泌酶抑制剂(DAPT) MTT -
依普拉芬对鸡胚成骨细胞的增殖和分化的影响
目的建立鸡胚额骨成骨细胞的培养方法,研究依普拉芬对其成骨细胞增殖和分化功能的影响.方法采用混合胶原酶和胰酶、两次消化的方法,获取成骨细胞,经培养传代,取状态良好的第3代细胞在96孔板上进行增殖率和碱性磷酸酶活性的测定.结果消化培养的细胞具有明显的成骨细胞的特点:属于成纤维目细胞型、碱性磷酸酶黑染、基质前体红染,长期培养能形成矿化结节.应用依普拉芬后发现10-4mol/L IP可抑制成骨细胞增殖,而10-8mol/L对改善成骨细胞的增殖和分化有显著功效(P＜0.01),小于10-10mol/L浓度的IP则对成骨细胞与对照组无差异.结论酶混合消化可以得到较纯的成骨细胞,应用依普拉芬研究表明,适宜浓度的IP可促进鸡胚额骨成骨细胞增殖和分化,提高其碱性磷酸酶活性,增强成骨细胞矿化,促使骨形成.
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细胞因子提取液对心肌细胞活力的影响
目的 探讨不同浓度细胞因子提取液对心肌细胞活力的影响.方法 本研究利用培养乳鼠的心肌细胞,用台盼蓝染色法检测细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞形态变化及其搏动率.细胞因子提取液以O、1％、5％、10％、20％、40％浓度对培养48 h的心肌细胞进行刺激,继续培养至96 h,用甲基噻唑基四唑(MTT)法测定各组光密度(OD)值,其中以O组作为对照组.结果 发现在培养过程中加入不同浓度细胞因子提取液刺激心肌细胞48 h后,由低浓度到高浓度,心肌细胞MTT产物的OD值依次为:(0.3456±0.0327)、(0.3044±0.1914)、(0.3052±0.1112)、(0.3354±0.2816)、(0.4902±0.2749)、(0.018±0.045),其中1％、5％与对照组比较P＞0.05,无统计学差异,其它组分别与对照组比较P＜0.05,有显著性差异.细胞存活率均在95％以上.结论 10％、20％细胞因子提取液能高心肌细胞的活力.
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化疗药物敏感和耐药试验在卵巢癌中的研究现状
化疗药物敏感和耐药试验是近几十年发展起来的一种新技术,主要包括四甲基偶氮唑盐比色法、三磷酸腺苷-肿瘤药物敏感试验、ChemoFx、极端耐药试验等十几种方法,这些方法各有所长；尽管通过多年的研究,国内外学者在CSRA试验结果与卵巢上皮癌临床治疗结果的一致性方面、CSRA指导治疗与经验治疗的疗效对比方面,仍存在一定争议,需要前瞻性大样本随机对照研究确定CSRA在临床应用方面的价值.
关键词： 化疗药物敏感和耐药试验 卵巢癌 ATP-TCA MTT 极端耐药试验 -
结外NK/T细胞淋巴瘤敏感药物筛选
目的 应用无血清培养基(serum free medium,SFM)初步富集肿瘤耐药细胞,筛选出结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-celllymphoma,ENKTCL)的敏感药物.方法 应用加入10％人血清和700 U/mL人白细胞介素-2(interlukin-2,IL-2)的1640培养基和加入700 U/mL人IL-2的SFM VIVO-15TM,分别培养SNK-6细胞;MTT法分别检测2种培养体系中表柔比星(adriamycin,ADM)、奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)、吉西他滨(gemcitabine,GEM)、左旋门冬酰胺酶(L-Asparaginase,L-ASP)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)等药物作用的IC50;2种培养体系中分别加入上述各种药物作用32 h后,7AAD/PE-Annexin Ⅴ染色法流式细胞术检测各处理组细胞的凋亡率,并分析比较.结果 无血清培养体系中细胞部分悬浮生长,每个悬浮球由＞50个数目不等的细胞组成,悬浮球体积较有血清中明显增大.有血清和SFM中IC50含量,ADM分别为(0.12±0.018)和(0.751±0.14) μg/mL,P＜0.001;Ara-C分别为(0.217±0.002)和(0.822±0.028) μg/mL,P＜0.001; MTX分别为(0.023±0.001)和(0.032±0.002) μg/mL,P=0.002.药物作用后,有血清和SFM中SNK-6细胞的凋亡率,ADM分别为(45.23±2.58)％和(30.91±2.13)％,P=0.041;Ara-C分别为(56.12±2.32)％和(41.47±2.46)％,P=0.034;MTX分别为(24.42±1.92)％和(13.01±2.28)％,P=0.045;GEM分别为(15.05±2.05)％和(41.45±1.74)％,P＜0.001.结论 SFM VIVO-15TM可用于ENKTCL SNK-6细胞培养;无血清培养后的SNK-6细胞对ADM、Ara-C和MTX耐药性增强,对L-OHP、GEM和L-ASP敏感.
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康莱特注射液对肝肿瘤细胞作用的实验研究
目的:研究康莱特注射液对原发性肝癌患者肿瘤细胞的细胞毒性和协同化疗药物增敏的作用.方法:用MTT法测定31例肝癌患者肿瘤细胞对康莱特和常用5种化疗药物及康莱特分别与单个化疗药联合作用的敏感性,并与对照组比较.结果:康莱特和卡铂、顺铂、5-氟尿嘧啶等化疗药对肿瘤细胞的平均抑制率达30%以上;康莱特联合的顺铂、丝裂毒素、5-氟尿嘧啶、卡铂等药的平均抑制率明显高于单药组,P＜0.05.结论:康莱特注射液对群体原发性肝癌患者肿瘤细胞有较好的抗肿瘤和化疗增敏双作用.
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曲安奈德对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增生抑制作用的实验研究
目的观察曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对培养的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增生的影响.设计实验性研究.研究对象ARPE-19.方法采用MTT比色法和TUNEL染色法观察不同终质量浓度(0、10、30、300mg/L)TA分别作用于培养的ARPE-19细胞24、72小时后细胞的增生和凋亡的情况.主要指标吸光度,凋亡指数.结果(1)TUNEL法:质量浓度10mg/L TA不影响ARPE-19细胞的生长,随着质量浓度增大,细胞凋亡程度逐渐增强(t=2.921,P＜0.01),随着时间延长,ARPE-19细胞的凋亡指数逐渐增大(t=2.306,P＜0.01).(2)MTT法:TA浓度和作用时间均对ARPE-19细胞的增生具有显著影响,随着浓度增加和时间延长,其抑制作用的差别有显著性意义(F0.05,3,16=3.24,P＜0.05;F0.05,1,16=4.49,P＜0.05),而且,TA浓度和作用时间相互影响着ARPE-19细胞的生长,对其抑制作用具有统计学意义(F0.05,1,16=4.49,P＜0.05).结论TA能够抑制ARPE-19细胞的增生,通过玻璃体腔内注射TA或联合玻璃体切割手术可能成为增生性玻璃体视网膜病变的有效治疗.
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蒺藜皂苷对体外培养视网膜神经节细胞的保护作用
目的 观察不同浓度蒺藜皂苷(CSTT)对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)存活率的影响.方法 将出生后1～3天的SD乳鼠视网膜细胞,应用不同浓度的蒺藜皂苷分别与细胞共培养24h后,用MTT法检测492nm吸光度A值,并计算相应的存活率.结果 10-7g/L浓度的GSTT组RGCs的存活率为112.86%,(设对照组存活率为100%),10-7g/L浓度的GSTI组RGCs的存活率高于对照组(P<0.05).结论 GSTT能增加体外培养的大鼠视网膜神经节细胞的存活率,具有促进混合培养RGCs生长的作用.
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碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖与ALP活性表达的影响
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶(ALP)活性表达的影响,为bFGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据.方法:采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度(0.1～10 ng/ml)的bFGF第24、48和72小时对5%和10%胎牛血清(FBS)体外培养的第3代人牙周膜细胞(PDLCs)的作用.结果:与对照组比较,①10%FBS,5ng/ml和10ng/ml的bFGF在第24、48、72小时,可显著促进PDLCs的增殖(P＜(0.01～0.05),5%FBS,10ng/ml的bFGF在24、48小时,5ng/ml的bFGF在24小时对PDLCs有显著促增殖作用(P＜0.01).②10%FBS,1ng/ml的bFGF在48、72小时,5ng/ml的bFGF在24、48、72小时,10ng/ml bFGF在48小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用P＜0.01-0.05);5%FBS,10ng/ml的bFGF在24、72小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用(P＜0.05).结论:以上结果提示:在一定的作用时间内和一定条件下,5ng/ml和10ng/ml的bFGF可促进人PDLCs的生长和分化.
关键词： 牙周膜细胞 碱性成纤维细胞生长因子 MTT 碱性磷酸酶 -
电纺左旋聚乳酸和左旋聚乳酸羟基磷灰石纳米纤维细胞相容性的比较研究
目的:用MTT法检测电纺左旋聚乳酸和左旋聚乳酸/羟基磷灰石PLLA和PLLA/HA纳米纤维材料,对人牙周膜细胞生长曲线的影响,评价两种材料的细胞相容性.方法:通过电纺技术制备PLLA、PLLA/HA纳米纤维材料,体外分离、培养并鉴定人牙周膜细胞,用MTT法检测人牙周膜细胞在两种材料上的生长曲线,评价两种材料的细胞相容性及其用于口腔组织工程的可能性.结果:成功分离、培养了人牙周膜细胞,通过免疫组织化学染色鉴定细胞来源于中胚层,为牙周膜细胞.电纺法制备的PLLA、PLLA/HA纳米纤维材料具有三维网状空间结构,与人牙周膜细胞共培养,MTT检测结果显示,细胞能够在材料上生长增殖,在第七天时PLLA/HA组细胞增殖好于PLLA组和对照组.结论:电纺PLLA和PLLA/HA纳米纤维材料生物相容性良好,PLLA/HA组较单纯PLLA组能够促进细胞的增殖,有望成为良好的新型口腔组织工程支架材料.
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利用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）测定细胞活力的方法与应用
目的：利用细胞内脱氢酶对2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）的催化作用建立比目前常用的3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四氮唑（噻唑蓝，MTT）法更可靠的测定细胞活力的方法。方法使用不同浓度的TTC溶液测定细胞活力，并确定TTC的有效浓度范围。在计算所测定值与细胞数量函数关系的基础上，通过与传统测定细胞活力的MTT法进行比较，分析该方法的可行性。结果0．5％～1．0％浓度范围内的TTC溶液可用来测定细胞活力，测定值与细胞数量之间存在线性关系，与MTT法得到的结果基本一致，可避免MTT法测定过程中来自于细胞培养体系中其他抗氧化物质的非特异性干扰。结论 TTC可用于测定细胞活力，可替代常规的MTT法，具有操作简便，费用经济，结果可靠等优点。
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