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生长因子在形觉剥夺性近视形成中的作用
通过对形觉剥夺性近视(form-deprived myopia,FDM)动物模型的大量研究证实,FDM的形成过程中视网膜表达的生长因子的量发生变化,从而通过受体机制作用于巩膜,引起巩膜的变化,导致近视形成.多种生长因子与此过程的关系密切,但它们在FDM中发挥作用的具体机制仍不清楚.本研究对生长因子与近视形成和发展的关系做一综述.
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视网膜神经递质系统在形觉剥夺性近视中的调控作用
形觉剥夺可诱导实验性近视动物模型,形成形觉剥夺性近视(form-deprivation myopia,FDM).FDM的变化主要表现在眼球局部,有关调控眼球生长的神经递质主要分布于眼后极部,神经递质的变化可能与FDM的形成有关.视网膜神经递质单独或相互作用,通过多种途径,传递视觉信号,调控眼球的生长.我们就视网膜神经递质系统在FDM中调控作用的研究进展作一综述.
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形觉剥夺性近视中巩膜变化的生物学机制
近视眼的发病机制不明,形觉剥夺可以诱导典型的近视动物模型,形成形觉剥夺性近视眼(form-deprivation myopia,FDM).通过细胞和分子水平的研究发现,FDM的变化主要表现在眼球局部,形觉剥夺可诱导巩膜软骨细胞增殖,细胞外基质(extracellular material,ECM)基因表达异常,ECM增加,巩膜胶原纤维改变等引起巩膜重塑,导致眼轴延长,近视屈光度增加.本文就FDM巩膜变化生物学机制的研究进展作一综述.
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TIMP-2基因转染后豚鼠形觉剥夺眼后极部巩膜Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的表达
背景 细胞外基质(ECM)蛋白和酶参与眼球后极部巩膜主动的重塑过程,主要通过影响Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)纤维连接蛋白(FN)发挥作用.目的 通过对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠经脉络膜上腔注入转染有TIMP-2基因的脂质体,观察基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)对细胞外基质中Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和FN mRNA 表达的影响.方法 半透明眼罩遮盖36只豚鼠的右眼14d建立FDM动物模型,用随机数字表法分组后分别于右眼脉络膜上腔注入5μl TIMP-2脂质体质粒、空质粒和生理盐水,每组12只眼,左眼为自身对照.另12只豚鼠持续遮盖右眼为模型对照组.分别于脉络膜上腔注药后的2、7、14d过量麻醉处死豚鼠,获取眼球后极部巩膜组织,用RT-PCR法分别检测各组豚鼠眼巩膜组织中Col-Ⅰ和FN mRNA 的表达.结果 TIMP-2组豚鼠后极部巩膜Col-Ⅰ mRNA表达降低,FN mRNA表达升高,与自身对照相比差异均有统计学意义(P＜0.05).注入TIMP-2后,Col-Ⅰ mRNA表达水平从第2天开始升高,第7天达到高峰,第14天时有所回落;FN mRNA表达水平则呈相反变化.二者在第7天、第14天的表达与其他3组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).Col-ⅠmRNA和FN mRNA表达水平在注射后第7天与第2天或第14天比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 TIMP-2注入FDM豚鼠脉络膜上腔可上调Col-Ⅰ mRNA表达,下调FN mRNA表达,早期可有减缓豚鼠FDM巩膜重塑的作用.
关键词： 形觉剥夺性近视 基质金属蛋白酶抑制剂-2 细胞外基质 Ⅰ型胶原蛋白 纤维连接蛋白 -
左旋多巴对豚鼠形觉剥夺性近视形成的影响
目的 研究腹腔注射左旋多巴(L-dopa)对豚鼠形觉剥夺性近视眼屈光状态及视网膜多巴胺含量的影响.方法 眼罩遮盖建立豚鼠形觉剥夺性近视眼模型,分为正常对照组、L-dopa组(10mg/kg)、生理盐水组、遮盖组、遮盖+L-dopa组、遮盖+生理盐水组6个组.遮盖10d后,测定角膜曲率半径、眼球屈光度和眼轴长度,高效液相色谱检测视网膜多巴胺含量.结果 眼罩遮盖10d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长、近视形成,视网膜多巴胺含量降低(P＜0.05),但角膜曲率半径无明显变化.腹腔注射L-dopa引起遮盖眼视网膜多巴胺含量增加、近视程度减轻(P＜0.05),但对正常豚鼠眼球的屈光发育无明显影响(P＞0.05).腹腔注射生理盐水后,豚鼠眼球屈光状态和视网膜多巴胺含量无明显变化(P＞0.05).结论 腹腔注射L-dopa能通过补充遮盖眼视网膜多巴胺含量,抑制豚鼠形觉剥夺性近视的形成.
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视黄酸在早期形觉剥夺性近视豚鼠后巩膜中的变化
目的 检测豚鼠早期形觉剥夺性近视(FDM)眼巩膜中视黄酸(RA)的水平,探讨RA在FDM眼后极部巩膜中的作用.方法 3周龄三色豚鼠30只随机分组,正常对照组6只,形觉剥夺15 d组和形觉剥夺24 d组各12只,左眼用气球头套分别遮盖15 d和24 d,右眼为自身对照.实验前后均测量屈光度,实验结束后摘除眼球,测量眼轴长,应用高效液相色谱法(HPLC)测定后极部巩膜RA含量.结果 形觉剥夺15 d组、形觉剥夺24 d组动物实验眼诱导出明显的相对近视,且与正常组比较差异有统计学意义(F=23.053,P<0.05).形觉剥夺15 d组、形觉剥夺24 d组实验眼眼轴均长于自身对照眼(P<0.05).形觉剥夺15 d 组、形觉剥夺24 d组实验眼巩膜中RA水平较自身对照眼均明显升高(P<0.01),但形觉剥夺15 d 组、形觉剥夺24 d组间比较差异无统计学意义(P=0.857).结论 形觉剥夺可诱导近视,且近视程度在早期随时间递增,形觉剥夺眼眼轴增长.豚鼠早期形觉剥夺眼后极部巩膜RA含量增多,但在15～24 d时段内差异无统计学意义.
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豚鼠形觉剥夺性近视视网膜中视黄酸转运系统的研究
目的 了解视黄醇(RA)转运系统在豚鼠近视发生发展中的作用.方法 2周龄英国短毛豚鼠48只,随机分为形觉剥夺组(n=24)和正常对照组(n=24).形觉剥夺组随机取1只眼,用白色半透明眼罩遮盖形成形觉剥夺,遮盖时间为2周,干预前后均采用睫状肌麻痹后带状光检影法测定其屈光不正状态,用Cinescan A/B型超声仪测定玻璃体腔深度和眼轴长度.处死后取视网膜,用HPLC法测定视网膜中的RA水平,Western blot法定量检测视网膜中视黄酸结合蛋白-Ⅰ (CRABP-Ⅰ)和视黄酸核受体-β(RAR-β)的蛋白水平,并用 Real-time PCR 法测定其 mRNA水平.结果 形觉剥夺后模型眼的等效球镜为(-3.82±0.13) D,对照眼为(1.99±0.58) D,差异有统计学意义(t=8.376,P＜0.01);形觉剥夺组眼轴长度为(8.346±0.047) mm,对照组眼轴长度为(7.888±0.042) mm,差异有统计学意义(t=3.343,P＜0.05).形觉剥夺组视网膜RA水平较对照组高,差异有统计学意义(t=4.934,P＜0.01);模型眼视网膜中CRABP-Ⅰ和RAR-β的含量较对照组均提高(P＜0.05).结论 豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜中RA转运系统水平显著上升,RA可能是近视发展的信使.
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NO-cGMP信号通路对豚鼠形觉剥夺性近视的调控
目的 建立豚鼠形觉剥夺性近视动物模型,观察一氧化氮-环磷酸鸟苷(NO-cGMP)信号通路在视网膜上的动态表达,探讨其在近视发病机制中的作用.方法 豚鼠分为3组:未遮盖组(Ⅰ)、遮盖2周组(Ⅱ)、遮盖3周组(Ⅲ),其中右跟遮盖为实验眼,左眼为自身对照眼.行视网膜检影和眼轴测量,原位杂交法检测神经细胞性一氧化氮合酶(ncNOS)的表达,放射免疫法检测c-GMP的含量,并对ncNOS和c-GMP的表达行直线相关分析.结果 Ⅱ组、Ⅲ组实验眼随形觉剥夺时间延长近视形成,眼轴延长.ncNOS主要表达在豚鼠视网膜的内核层(INL)及神经节细胞层(GCL),ncNOS及cGMP随形觉剥夺时间的延长明显上调,两者具有高度相关性.结论 NO-cGMP信号通路在豚鼠视网膜上有表达,形觉剥夺可明显上调视网膜上NO-cGMP信号通路的表达,该信号通路可能参与了近视的调控.
关键词： 形觉剥夺性近视 视网膜 豚鼠 一氧化氮-环磷酸鸟苷 -
豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜Müller细胞中bFGF的表达
目的 观察视网膜Müller细胞中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)中的表达,进一步探讨近视眼的发病机制.方法 用半透明眼罩遮盖法建立豚鼠FDM模型;采用玻璃体腔注射L-α-氨基己二酸(L-α-AAA)破坏视网膜Müller细胞,观察其对豚鼠FDM形成的影响.视网膜检影验光测屈光度,A型超声测量眼轴长度.免疫组织化学法观察bFGF在视网膜Müller细胞中的表达.结果 遮盖眼与对照眼相比,产生了相对性近视(P＜0.05),眼轴增长(P＜0.05);去遮盖后,近视度数降低(P＜0.05);破坏视网膜Müller细胞后,近视度数较单纯遮盖眼降低(P＜0.05).近视眼与对照眼相比,视网膜Müller细胞中bFGF表达减弱.结论 视网膜Müller细胞可能参与了FDM形成的调控;视网膜Müller细胞中bFGF的表达可能与FDM有关.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 视网膜 Müller细胞 形觉剥夺性近视 -
形觉剥夺性近视豚鼠视网膜中神经生长因子及其受体的表达
目的 探讨视网膜神经生长因子(NGF)及其受体(TrkA)在豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)视网膜中的表达.方法 对出生7 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月制备FDM动物模型,左眼作为对照.遮盖前及遮盖2、4、8周后,检影验光检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学和逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)检测视网膜NGF和TrkA的表达变化.结果 形觉剥夺使豚鼠眼轴增长,近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比屈光度差异有统计学意义(P＜0.01).遮盖眼NGF与TrkA免疫活性逐渐降低,NGF与TrkAmRNA表达下调,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 NGF和TrkA可能参与调控FDM的形成.
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转化生长因子-β2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达
目的 观察形觉剥夺性近视(FDM)形成中视网膜转化生长因子-β2(TGF-β2)水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨.方法 出生3 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达.结果 形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义(P＜0.01),遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少(P＜0.01),TGF-β2 mRNA的表达下调.结论 TGF-β2参与调控FDM形成.
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鸡形觉剥夺性近视眼形态学及bFGF免疫组织化学研究
目的 了解形觉剥夺性近视(FDM)的参与因素.方法 实验鸡40只孵化2 d,经初筛分为2组,切除实验组(右眼)上下睑缘各1 mm,连续缝合,制造FDM的动物模型,遮盖时间为21 d,常规视网膜检影法测屈光度,A型超声测眼轴长度,光学显微镜观察眼后极部组织病理变化,免疫组织化学法测后极部巩膜、视网膜中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的变化.结果 诱发明显的FDM,实验眼眼轴延长(P＜0.05),镜下见实验眼巩膜软骨层增厚、纤维层变薄,软骨层内软骨细胞数目增多.bFGF免疫组织化学染色显示,bFGF在实验眼与对照眼巩膜、视网膜均有表达,在视网膜的表达实验眼强于对照眼,实验眼的视网膜外层又强于内层,巩膜bFGF的表达在两组间无显著性差异.结论 形觉剥夺性近视中有bFGF的参与.
关键词： 形觉剥夺性近视 免疫组织化学 碱性成纤维细胞生长因子 -
NGF在鸡巩膜中的表达及其与形觉剥夺性近视眼形成的关系
目的探讨神经生长因子(NGF)在鸡形觉剥夺性近视形成中巩膜中的表达和变化情况.方法鸡雏30只,随机分为3组,每组10只,于出生后第2 d将右眼以半透明眼罩遮盖作为遮盖眼,左眼开放作为对照眼.分别遮盖3、7、14 d.运用免疫组织化学和原位杂交技术探测NGF蛋白及其mRNA在鸡巩膜软骨细胞中的表达.结果NGF蛋白及其mRNA均表达于巩膜的软骨细胞中尤其在双核细胞中;两者在各时间段遮盖眼巩膜中阳性细胞数均明显高于对照组(P<0.05);免疫组织化学(FDG=20.556 P<0.01)和原位杂交(FDG=25.520 P<0.01)在对照组(或遮盖组)各组间阳性细胞的表达数目随时间变化明显下降.结论NGF对鸡巩膜软骨层的发育和形觉剥夺性近视的形成密切相关.
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脑源性神经营养因子在鸡形觉剥夺性近视恢复期中的作用
目的观察形觉剥夺性近视(FDM)恢复期中视网膜脑源性神经营养因子(BDNF)水平的变化,探讨BDNF在FDM中的作用.方法鸡雏单眼遮盖建立FDM模型,剥夺眼去遮盖恢复2周,应用免疫组织化学技术检测剥夺眼视网膜神经节细胞层BDNF的表达.结果去遮盖2周后,剥夺眼BDNF阳性细胞数增加.结论形觉剥夺眼去剥夺后,随着近视程度的减轻,视网膜BDNF的表达水平升高.
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小鸡形觉剥夺性近视眼巩膜TIMP-2 mRNA表达的时间动态变化
目的探讨小鸡形觉剥夺性近视眼(FDM)后极部巩膜基质金属蛋白酶2组织抑制剂(TIMP-2)mRNA表达水平的动态变化.方法取1 d龄来亨雏鸡以半透明眼罩分别遮盖右眼4、7、14、21、30 d制备FDM动物模型,未遮盖眼为自身对照眼,并随机选取同数目同龄小鸡作为正常对照眼.实验前及预定实验时间进行视网膜检影验光和眼轴长度测量,摘除眼球,提取后极部巩膜总RNA,采用一步法逆转录-多聚酶链反应检测每组小鸡后极部巩膜TIMP-2 mRNA表达水平.结果与正常组、自身对照组相比,FDM后极部巩膜TIMP-2 mRNA表达明显降低,组间差异非常显著(P＜0.01).随遮盖时间延长其表达降低,7～21 d降低明显,FDM组间差异显著(P＜0.01).自身对照组TIMP-2 mRNA表达水平较同龄正常对照组存在下调趋势,但组间无统计学差异(P﹥0.05).结论后极部巩膜TIMP-2表达抑制极可能作为导致巩膜ECM主动重塑的始发因素之一而参与FDM形成.
关键词： 形觉剥夺性近视 金属蛋白酶2组织抑制剂 巩膜 细胞外基质 -
抑制巩膜软骨层增生对鸡形觉剥夺性近视的影响
鸡形觉剥夺性近视是一种常用的近视模型,研究发现在鸡剥夺眼巩膜软骨层细胞增殖活跃,细胞外基质合成增多,为了解巩膜软骨层细胞的异常增殖在剥夺性近视中眼轴延长的作用,本实验利用一种能抑制细胞增殖的药物5-Fu于剥夺眼结膜下注射,观察5-Fu对形觉剥夺性近视的影响.
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蛋白激酶C抑制剂GF109203X对豚鼠形觉剥夺性近视的影响
蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是一类重要的蛋白质磷酸化激酶,哺乳动物视网膜双极细胞~([1-3])、无长突细胞~([3-4])、Müller细胞~([1])均表达多种PKC亚型.目前尚不清楚PKC在近视发生中的作用.本研究将GF109203X注入豚鼠玻璃体,研究其对近视形成的影响,报告如下.
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豚鼠形觉剥夺性近视视网膜组织中褪黑素受体表达及眼压的变化
目的:研究豚鼠形觉剥夺性近视视网膜组织中褪黑素受体MT1的表达,探讨其与眼压变化的关系.方法:将出生5～7 d 20只的豚鼠单眼半透明眼罩遮盖,遮盖眼为实验眼,未遮盖眼为对照眼.实验前及遮盖8周后行带状光检影镜测眼屈光度数.A超测量眼轴长度,确认豚鼠形觉剥夺性近视模型制造成功.于遮盖8周后测量实验组和对照组眼压,并应用免疫组织化学染色方法检测视网膜中褪黑素受体亚型MT1的表达水平.结果:形觉剥夺8周后实验眼眼压(2.51 ±0.10)kPa较对照眼(1.97±0.08)kPa升高(P<0.05),豚鼠形觉剥夺性近视视网膜褪黑素受体免疫反应阳性细胞数目减少(P<0.05).结论:褪黑素可能影响眼压的调节,与形觉剥夺性近视的形成密切有关.
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豚鼠形觉剥夺性近视视网膜组织中神经生长因子受体p75NTR和Caspase-3的表达
目的:探讨豚鼠形觉剥夺性近视视网膜神经生长因子受体p75NTR、Caspase-3表达的变化.方法:出生1周的豚鼠30只随机分为2组,正常组10只,实验组20只.实验组右眼为遮盖眼,通过单眼遮盖法建立豚鼠形觉剥夺性近视模型,左眼为自身对照眼,正常对照组取双侧眼球.检影验光检测屈光度,A超测量双眼眼轴长度.免疫组织化学法检测视网膜p75NTR与Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR检测视网膜p75NTR mRNA的变化,TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡.结果:实验结束,遮盖眼屈光度加深、眼轴长度延长,可见凋亡细胞核.正常对照眼与自身对照眼屈光度与眼轴长度无明显变化,视网膜外核层及内核层几乎无p75NTR、Caspase-3阳性染色,无凋亡细胞.遮盖眼视网膜可见p75NTR、Caspase-3阳性表达、p75NTR mRNA增加和凋亡细胞.结论:形觉剥夺性近视视网膜p75NTR和Caspase-3的表达增加可能与视网膜神经细胞凋亡有关.
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形觉剥夺性近视豚鼠视网膜中脑源性神经营养因子的表达
目的:研究视网膜脑源性神经营养因子(BDNF)在豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)形成中的作用.方法:出生3 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月制备FDM动物模型,左眼作为对照.遮盖前后,检影验光检测双眼屈光度,A超测量双眼眼轴长度.遮盖后免疫组织化学法分析视网膜BDNF的表达,RT-PCR检测BDNF mRNA的表达.结果:形觉剥夺使眼轴增长,近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比屈光度差异有统计学意义(P＜0.01).遮盖眼BDNF免疫活性降低,BDNF mRNA表达下调.结论:BDNF可能参与调控FDM的形成.
