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四跨膜蛋白8对糖尿病肾小管上皮细胞自噬活性的实验研究
目的 探讨四跨膜蛋白8(Tspan 8)对糖尿病肾小管上皮细胞自噬活性的影响及机制.方法 将HK-2细胞分为正常组(NG,5.5mmol/L D-葡萄糖)和高糖组(HG,30mmol/L D-葡萄糖).高糖培养的HK-2细胞分别转染Tspan 8基因的随机无靶点阴性对照(shCtrl)和特异性基因敲减序列(siRNA).Western blot和qPCR检测Tspan 8表达;Western blot检测蛋白激酶B(Akt)及其磷酸化水平(p-Akt),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化水平(Ⅱ/Ⅰ).结果 高糖刺激后,Tspan 8表达升高约1.5倍(P<0.01);与shCtrl组比较,Tspan 8 siRNA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高3倍,p-Akt表达降低约1.5倍,p-mTOR表达降低约2倍(P<0.01).结论 Tspan8可能通过激活mTOR信号通路,负向调节糖尿病肾小管上皮细胞的自噬活性.
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四跨膜蛋白CO-029在肝内胆管细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨四跨膜蛋白CO-029在人肝内胆管细胞癌中的表达及其临床意义.方法 应用蛋白印迹与实时-PCR检测20例患者肝内胆管癌组织、相应癌旁组织及肝内胆管细胞癌细胞系HCCC-9810中CO-029的表达水平.应用组织芯片检测40例肝内胆管细胞癌病理标本中CO-029的表达,并分析其与肿瘤的临床病理特征及预后的关系.结果 蛋白印迹与实时-PCR检测显示CO-029在20例肝内胆管癌患者组织中高表达,且表达水平明显高于相应癌旁组织,在HCCC-9810细胞系中亦显著高表达(P＜0.05).组织芯片检测显示CO-029阳性表达率为65％(26/40).按复发时间(TTR)分组,术后早期复发组(TTR ＜1年)CO-029的表达明显高于未复发组(TTR≥1年),且CO-029表达与肿瘤包膜、肝门淋巴结转移、TNM分期及预后密切相关(.P＜0.05).结论 CO-029在胆管细胞癌组织中的差异表达与肿瘤复发转移及预后密切相关.
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Tspan8过表达与肝癌上皮间变及转移的关系
目的 探讨四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌转移、上皮间变的关系及其机制.方法 利用前期构建的TSPAN8 shRNAs慢病毒质粒并筛选稳转细胞株MHCC97-H-LV-GFP-shRNA-Tspan8,沉默Tspan8基因表达.WST法检测细胞增殖变化;蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶12表达改变;应用Transwell检测细胞侵袭能力变化;5.0×106肝癌细胞肝内注射行体内实验,检测肿瘤生长及肺转移情况.在层黏蛋白-5(laminin-5)作用于肝癌细胞株MHCC97-H-Mock和MHCC97-H-shRNA-Tspan8两天后,观察2组细胞形态差异,是否发生EMT改变并检测上皮及间质分子标志物.进一步应用免疫共沉淀和荧光分析Tspan8可否与整合素α6形成复合物.结果 体内外实验显示,与Tspan8-RNA干扰的MHCC-97H细胞(MHCC97-H-shRNA-Tspan8)比较,Tspan8高表达的肝癌细胞MHCC-97H和对照组MHCC97-H-Mock(LV-GFP)增殖侵袭能力、成瘤生长及肝癌肺转移等方面明显增强(P＜0.05).MHCC97-H-shRNA-Tspan8细胞中MMP-12表达抑制明显,细胞侵袭能力明显下降.进一步的研究显示:在层黏蛋白-5的诱导下四跨膜蛋白Tspan8可与α6结合并诱导高表达肝癌细胞MHCC97-H发生上皮间质转化,而在RNA干扰组肝癌细胞中(MHCC97-H-shRNA-Tspan8)未见发生;免疫共沉淀显示Tspan8可与α6结合形成复合物,提示Tspan8偶联α6后形成复合物并可促进肝癌侵袭转移.结论 四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌侵袭转移正相关,并可能与整合素α6结合而诱导肝癌细胞发生上皮间质转化有关,是肝癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标.
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Tspan 1及Integrin α6在人胰腺导管腺癌中的表达及其与临床特征的关系
目的 探讨Tspan 1及Integrinα6在胰腺导管腺癌(PDAC)及胰腺癌细胞中的表达与临床病理学参数的关系.方法 收集2004年5月至2013年1月收治的95例PDAC患者的组织石蜡切片及55例癌旁正常组织石蜡切片进行免疫组化检测.以Western blot法和实时定量(qRT)-PCR法检测16对配对冷冻保存的新鲜PDAC、癌旁组织及6株胰腺癌细胞中Tspan 1及Integrin α6蛋白和mRNA表达水平.分别采用x2检验、Spearman-rank相关分析、Kaplan-Meier法、多因素回归分析等对数据进行统计分析.结果 Tspan 1及Integrinα6在PDAC细胞膜表达高于癌旁胰腺组织(x2=7.429,P＜0.05;x2=15.100,p＜0.01);Tspan 1表达与淋巴结转移、TNM分期及复发率呈正相关(x2=6.688,P＜0.01;x2=13.055,P＜0.01;x2 =6.116,P＜0.05).Integrin α6表达与TNM分期呈正相关(x2=8.896,P＜0.05);Tspan 1及Integrin α6的相关性有统计学意义(r=0.223,P＜0.05);Tspan 1及Integrin α6高表达与生存期呈负相关(x2=5.263,P＜0.05;x2=10.124,P＜0.01);多因素分析结果显示,Tspan 1及Integrinα6表达水平可以作为PDAC预后的独立预测因素(x2=6.152,P＜0.05;x2=9.479,P＜0.01).16例胰腺癌组织中Tspan 1及Integrin α6的蛋白(t=2.278,P＜0.05;t=3.153,P＜0.05)和mRNA(t=2.439,P＜0.05;t=3.258,P＜0.05)表达均高于配对的癌旁正常组织;6株细胞株中Tspan 1及Integrin α6在蛋白水平及mRNA水平均有表达,来自转移灶的人胰腺腺癌细胞株SW1990中Tspan 1及Integrin α6在蛋白及mRNA水平表达高于来自原发灶的细胞株(P＜0.05).结论 Tspan 1及Integrinα6表达对于PDAC的转移及浸润有促进作用,可能可以作为判断PDAC预后的独立因素.
关键词： 胰腺肿瘤 腺癌 Tspan 1 Integrin α6 四跨膜蛋白 -
四跨膜蛋白在肝癌中的作用
四跨膜蛋白是一组具有四个高度疏水的跨膜结构域的低分子量细胞膜表面蛋白,可广泛参与细胞生长、粘附、迁移等多种生命活动.四跨膜蛋白超家族 (TM4SF) 可与包括四跨膜蛋白、整合素、生长因子及其受体、HLA家族、主要组织相容复合物 (MHC) 等在内的多种细胞表面分子相连接,形成以TM4SF为核心的四跨膜蛋白网络.四跨膜蛋白网络可通过直接或间接作用于细胞信号通道从而影响肿瘤细胞的粘附、分化、迁移及侵袭.目前研究表明四跨膜蛋白CD151、CD82、Tspan8及Tspan1与肝癌密切相关,可参与调控肝癌细胞的粘附、增殖、分化、迁移及侵袭等过程来影响肝癌的发生发展.KAI1/CD82为肝癌的抑制基因,上调其表达可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭; CD151在肝癌组织中大量表达,提示CD151或联合CD151/c-Met是可能预测肝癌的进展新指标,并且CD151可能用于肝癌的靶向治疗; 而Tspan8 (CO-029) 及Tspan1 (NET-1) 则可用于预测肝癌的进展及预后.
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Tspan8在结肠癌细胞中的表达及小干扰RNA干扰后对SW620细胞功能的影响
目的 检测Tspan8在结肠癌细胞中的表达,采用siTspan8下调Tspan8的表达,观察其对SW620细胞转移、浸润及增殖功能的影响.方法 采用Western blot和实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测4种结肠癌细胞系中Tspan8蛋白和mRNA表达水平,以siTspan8对SW620细胞中Tspan8进行干扰,干扰后采用MTT及Transwell对增殖、转移及浸润进行检测.结果 4种结肠癌细胞系中Tspan8在蛋白水平及mRNA水平均有表达,Western blot显示来自转移灶的人结肠癌细胞系SW620中Tspa8表达水平高于来自原发灶的Colo-205、HCT-116及HT-29,差异有统计学意义(均P＜0.05),qRT-PCR显示SW620中Tspan8 mRNA表达高于Colo-205、HCT-116及HT-29,差异有统计学意义(均P＜0.05).MTT及Transwell显示siTspan8对SW620中Tspan8进行干扰后,结肠癌细胞增殖没有改变,转移及浸润能力减弱.结论 Tspan8在结肠癌细胞中有表达,下调Tspan8表达对结肠癌细胞的转移及浸润有抑制作用.
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四跨膜蛋白CD151在肝内胆管细胞癌中表达及与临床病理特征的关系
目的:探讨四跨膜蛋白CD151在肝内胆管细胞癌中的表达及与临床病理特征的关系.方法:应用RT-PCR与Western blot检测36例肝内胆管细胞癌标本中四跨膜蛋白CD151的表达,免疫组织化学检测100例胆管癌组织中四跨膜蛋白CD151的表达,分析其与病理特征的关系.结果:18例早期复发肝内胆管细胞癌组织中CD151 mRNA的表达明显高于未复发组(P<0.05);免疫组织化学检测显示CD151蛋白阳性表达率为61% (61 /100),其表达程度与肿瘤大小、组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关;肿瘤越大、分化程度越差、TNM分期高及有淋巴结转移者CD151表达越高(P<0.05).结论:肝内胆管细胞癌CD151表达与其恶性表型相关,可能参与其侵袭和转移.
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两个旋毛虫新抗原基因的生物信息学分析及表达鉴定
目的 预测旋毛虫成虫期Ad48 h-Ts3基因和旋毛虫四跨膜基因的抗原性,合成和表达这两个基因并评价其潜在诊断价值. 方法 对旋毛虫四跨膜基因和成虫期Ad48h-Ts3基因采用生物信息学分析其亲、疏水性,预测其可能的抗原表位,对其密码子优化后进行基因序列合成,并亚克隆至pET28a表达载体,在大肠埃希菌中表达获得重组蛋白,以小鼠感染血清进行Western blotting识别重组蛋白,评估其诊断价值. 结果 生物信息学分析表明,旋毛虫四跨膜基因在其他物种中存在同源序列,具有两个跨膜区;而成虫期基因Ad48 h-Ts3具有丰富的抗原表位,为旋毛虫所特有;这两个基因经亚克隆至表达载体后,可观察到Ad48 h-Ts3基因有较明显的表达,且表达产物可被感染旋毛虫的小鼠血清识别,而四跨膜蛋白未见明显表达. 结论 旋毛虫成虫期蛋白Ad48 h-Ts3原核表达成功并可作为旋毛虫病诊断的潜在候选抗原.
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血吸虫体被被膜蛋白质组研究进展
血吸虫成虫外层的体被被膜由两层双分子层组成,可能涉及血吸虫营养、免疫逃避与免疫调节、排泄、渗透压调节和信号转导等重要功能,因而血吸虫体被被膜蛋白成为当今研究的热点.随着蛋白质组学研究技术的发展和应用以及血吸虫基因组计划的实施,血吸虫体被被膜蛋白质组研究取得了重要的进展.该文就近年来血吸虫被膜蛋白研究进展作一综述.
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重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团对小鼠免疫保护作用的研究
目的 探讨重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团融合蛋白(GST-TSP2HD)抗血吸虫感染免疫保护效果.方法 采用Glutathione sepharose 4B胶亲和层析法大量制备GST-TSP2HD蛋白.实验组以GST-TSP2HD融合蛋白的福氏佐剂抗原免疫C57BL/6J小鼠,同时设置佐剂对照组及GST蛋白免疫对照组,每2周加强免疫1次.加强免疫2次后每只小鼠经腹部皮肤感染(45±2)条血吸虫尾蚴.感染42 d后剖杀小鼠,经生理盐水静脉灌注收集成虫,计数减虫率,用KOH溶液消化肝组织收集虫卵,计算减卵率.组织切片观察小鼠肝组织病理变化,通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中的抗体水平.结果 与佐剂对照组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组的减虫率为27.10%,减卵率为32.30%;与GST蛋白免疫组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组可获得39.57%的减虫率,43.53%的减卵率.GST-TSP2HD融合蛋白免疫组肝组织中的虫卵肉芽肿数量明显减少,单个虫卵肉芽肿平均直径比佐剂对照组、GST蛋白免疫组分别下降了27.08%(P<0.05)和40.53%(P<0.01),差异均有统计学意义.GST-TSP2HI)能诱导高水平抗TSP2HD蛋白的特异性抗体IgG,其中IgG1、IgG2b和lgG2c亚类可能在小鼠抗血吸虫感染保护性免疫中发挥重要作用.结论 日本血吸虫网跨膜蛋白是一个有效的只本血吸虫病疫苗候选分子.
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四跨膜蛋白CD151在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达及意义
[目的]探讨四跨膜蛋白CD151在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达及意义.[方法]采用免疫组化法检测112例膀胱尿路上皮细胞癌和20例正常组织中CD151蛋白的表达.[结果]正常组织中CD151蛋白表达水平明显低于肿瘤组织(P＜0.001).低级别和高级别膀胱癌中CD151蛋白表达的阳性率分别为38.2％、66.7％(P=0.005).非肌层浸润性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌中CD151蛋白表达的阳性率47.9％、76.9％(P=0.003).73例非肌层浸润性膀胱癌73例中,复发40例,复发组与未复发组CD151蛋白表达的阳性率分别为65.0％和27.3％( P=0.001).[结论]CD151蛋白在膀胱癌组织中表达明显高于正常组织,CD151蛋白检测有助于判断肿瘤恶性分化程度及评估术后复发.
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CD151与肿瘤侵袭转移的关系研究进展
CD151蛋白是第一个被发现的四跨膜蛋白.α3、α6整合素可与CD151紧密结合形成CD151-α3β1/α6β1两种复合体,该两种复合体能够促进内皮细胞迁移和微血管增生,促进肿瘤细胞侵袭转移.CD151可直接与基质金属蛋白酶(MMPs)相互作用,调节其在细胞表面的定位、转运,溶酶体降解和蛋白水解活性.CD151蛋白作为细胞表面分子,有望成为肿瘤治疗的靶标.
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四跨膜蛋白超家族与肿瘤侵袭和转移
四跨膜蛋白超家族包括20个家族成员,以4个高度保守的跨膜结构为特征的蛋白家族.四跨膜蛋白通过与细胞表面多种跨膜蛋白形成复合物,而广泛参与调控细胞生长、黏附、迁移和信号转导等生物学功能,且高表达的四跨膜蛋白CD151、TM4SF5与肝癌、胃癌及乳腺癌的侵袭和转移有关.
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四跨膜蛋白在胃癌中的表达和意义
四跨膜蛋白是一类表达非常广泛的细胞表面糖蛋白,可以与整合素、信号蛋白、生长因子等多种细胞表面分子结合并发挥功能.近年来越来越多的研究提示四跨膜蛋白与恶性肿瘤的侵袭、转移密切相关,并且显示出一定的临床价值,可作为恶性肿瘤诊断和预后的新指标.
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四跨膜蛋白CD151下调E-cadherin促进肝癌侵袭转移的研究
本研究旨在探讨CD151与上皮间皮转化重要标记E-cadherin两者在肝癌中的关系,现报道如下.一、资料与方法1.材料:细胞株购自中国科学院上海生物所.pGCSIL-shRNA-CD151、pGCSIL-cDNA-CD151由复旦大学附属中山医院肝癌研究所樊嘉教授惠赠[1].引物由上海申能博彩生物有限公司合成.
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四跨膜蛋白CO-029在肿瘤的侵袭与转移中的作用
CO-029作为四跨膜蛋白超家族的重要成员之一，已有研究显示其在促进肿瘤侵袭与转移中的重要作用，但其具体机制仍知之甚少。研究明确其作用机制，有揭示肿瘤发生发展过程机制，作为预测肿瘤的进展及预后，进而开发新的肿瘤靶向治疗药物的潜在临床价值。
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CD151在原发性肝细胞癌中的表达及其意义
CD151是早发现与肿瘤转移呈正相关的四跨膜蛋白,是四跨膜网络形成为关键的分子之一[1].迄今已在胃癌、前列腺癌、肺癌的研究中均发现其过表达与肿瘤的转移与复发有关[2-5],但在肝癌中的表达情况鲜见报道.我们通过检测原发性肝细胞癌、癌旁与正常肝脏组织中CD151蛋白及mRNA的表达情况并分析其与肝癌临床病理学因素间的关系,对CD151在原发性肝细胞癌的侵袭与转移中的作用作进行了初步探讨.
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四跨膜蛋白分子CD151在胃癌组织中表达及其与临床病理特征的关系
目的:探讨四跨膜蛋白CD151在胃癌中的表达及与临床病理特征的关系.方法:免疫组织化学方法检测70例胃癌组织标本中CD151的表达,分析其与临床病理特征的关系,结合患者的术后随访资料,对患者的预后进行判定.结果:CD151在胃癌组织中的表达比正常胃组织中表达高,其表达程度与肿瘤数目、组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关；肿瘤越大、分化程度低、TNM分期高及有淋巴结转移者CD151表达越高(P＜0.05).结论:胃癌组织中的CD151表达与胃癌的临床病理分期及组织学分型有关,参与胃癌侵袭和转移并且对患者的预后判定有一定的参考价值.
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RNA干扰沉默编码跨膜蛋白35基因表达对肝癌细胞生长及细胞周期的影响
目的 研究跨膜蛋白35(TMEM35)基因在肝癌细胞生长、细胞周期中的作用,探讨跨膜蛋白TMEM35作为潜在肝癌治疗靶点的可行性.方法 利用跨膜蛋白二级结构预测工具SPLIT对TMEM35蛋白的二级结构进行分析；利用实时定量多聚酶链反应技术检测TMEM35基因在肝癌患者癌组织及相应癌旁组织中的表达情况；采用化学合成干扰小RNA片段(siRNA)干扰TMEM35基因在肝癌细胞MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,通过软琼脂克隆形成实验观察肝癌细胞非贴壁依赖性克隆生长情况,流式细胞术分析细胞周期；通过蛋白功能相互作用网络数据库STRING推测TMEM35蛋白发挥相应功能的搭档基因.结果 TMEM35为具有4个跨膜结构域的四跨膜蛋白,实时定量多聚酶链反应检测发现TMEM35基因在肝癌中表达紊乱,其中与相应癌旁组织相比较,TMEM35在14例癌组织中表达显著上调,在20例癌组织中表达显著下调(P＜0.05).针对TMEM35基因设计合成siRNAs能够特异性沉默TMEM35基因在肝癌细胞株MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,并且肝癌细胞在软琼脂培养条件下,形成的克隆显著减少.流式细胞术分析发现干扰TMEM35基因表达,能够减缓细胞周期进展,表现为细胞G1期增多,S期减少.结论 TMEM35基因编码具有四跨膜结构域的膜蛋白,在肝癌细胞生长中发挥重要作用.
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四跨膜蛋白CO-029、CD151与恶性肿瘤
四跨膜蛋白（TM4SF）是一类广泛表达于多种组织、细胞的低分子量细胞膜糖蛋白，其在细胞的活化与增殖、粘附与迁移、分化与癌变等过程中起到了连接膜内外信号通道的功能。其中CO-029及CD151在肿瘤的发展及转移中发挥重要的作用，在多种肿瘤细胞中异常高表达。开展研究CO-029和CD151在肝内胆管癌组织中的表达，可能为肝内胆管癌的早期诊断提供新的诊断依据?
