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抗乙型肝炎病毒核酶的研究进展
全世界大约有3.5亿乙型肝炎病毒(HBV)携带者,这种感染者集中分布于包括我国在内的东南亚、东亚及非洲的撒哈拉地区.HBV的持续存在常可导致肝硬化以及肝癌,对于已感染HBV者,目前常用的化学及免疫疗法通常无效.因此,寻找新的抗HBV感染的手段成为热点.核酶做为一种成熟的、可剪切特异性RNA的分子生物学方法受到广泛重视.由于核酶有严格的序列特异性,长期使用对细胞无副作用,并且结构简单,可人工设计,因此,很有希望成为治疗HBV感染的新方法.目前,核酶已广泛用于抗病毒及抗肿瘤的研究,尤其对HIV的研究,已进入临床工作阶段.本文将从核酶的构成、核酶研究的热点以及抗HBV感染等方面进行阐述.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白5B的研究进展
已知丙型肝炎病毒非结构蛋白(NS5B)具有RNA依赖的RNA聚合酶的功能,负责病毒基因组的复制.通过体外表达及晶体衍射分析,目前对NS5B的三维结构已有了清晰的描述,对NS5B催化该病毒基因组复制的分子机制也有了初步了解;对RNA聚合酶抑制物的研究将为人工设计特异性的抗该病毒药物奠定扎实基础.
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用于放射免疫显像的基因工程抗体简介
近来作为放射性核素高特异性载体的单克隆抗体(简称单抗)在临床应用的发展较慢.其主要原因是,人体内完整抗体由于具有高抗原性、不良的药代动力学等特点而影响了靶向性[1].另外尚缺乏简易快速高效的单抗核素标记方法.基因工程的发展为抗体的人工设计和优化提供了新思路.基因工程抗体不但保留了抗原结合性,降低了免疫原性,有良好的药代动力学和生物学分布,而且易于产业化生产[2].基因工程抗体和新目标抗原的发现必将加速放射免疫显像和治疗的发展.笔者就各型重组抗体的设计、结构、性质、放射性标记和在肿瘤诊疗中的应用进行综述.
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抗菌及中和内毒素蛋白葛佬素的克隆、表达
目的:观察人工设计葛佬素的Cdna序列表达产物是否具有抗菌及中和内毒素作用.方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质的Cdna序列氨基酸的偏爱密码子,并以此为基础设计葛佬素的Cdna序列,将合成的葛佬素Cdna插入真核细胞表达载体Pcdsi中后转染CDS7细胞,对转染的COS7细胞上清进行杀菌及中和内毒素活性的检测.结果:转染的COS-7细胞上清进行杀菌及中和内毒素活性.结论:人工设计葛佬素的Cdna序列设计正确,其表达产物具有抗菌及中和内毒素作用.
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抗菌蛋白葛栳纱在乳酸乳球菌中的表达研究
目的:观察人工设计的葛栳素的cDNA在乳酸乳球菌中的表达及其表达产物的抗菌作用.方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频率 ,并以此为基础根据已知的葛栳素蛋白质序列设计其cDNA序列.采用PCR重叠延伸法合成葛栳素的cDNA序列,在测序完全正确后将葛栳素基因插入适合乳酸乳球菌MG1363表达的表达载体pNZ8048中,采用电穿孔法转化MG1363,转化的MG1363在电转化后涂布于恢复培养基SGM17 MC(含氯霉素)后放入厌氧培养箱中培养72小时后,挑单个菌落于SGM17培养液(无抗生素), 厌氧振荡培养72小时后收集细胞上清并进行杀菌活性的检测.结论:转化的MG1363细胞上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性.结论:人工设计葛栳素的cDNA序列在乳酸乳球菌中得到表达,其表达产物具有抗菌作用.