首页 > 文献资料
-
利用RTS500系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达
目的:构建含目的基因葛佬素(gloverin)的重组子并通过体外快速翻译系统RTS500(rapid translation system)对其进行表达.方法:采用PCR方法扩增葛佬素cDNA,将其与表达载体pIVEX2.3连接;采用PCR及双酶切方法鉴定连接产物.将含目的基因片段的阳性重组质粒通过体外表达翻译系统RTS500,使其蛋白能在大肠杆菌(E.coli)裂解产物中进行表达.应用蛋白免疫印迹方法对表达产物进行鉴定.结果:pIVEX2.3-G重组表达质粒通过体外表达翻译系统RTS500可表达出分子量约为14.4的蛋白;蛋白免疫印迹证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白.结论:抗菌肽葛佬素可在体外大肠杆菌裂解产物中进行表达.
-
抗菌多肽葛佬素的原核表达纯化及活性鉴定
目的原核表达抗菌肽葛佬素,并对其生物学活性进行初步鉴定.方法应用pET原核表达系统进行目的蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用鲎试剂法,对表达产物的生物活性进行初步鉴定.结果体外表达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,鲎试剂检测结果表明,该表达产物对LPS有明显的中和活性.结论在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素.
-
抗菌及中和内毒素蛋白葛佬素的克隆、表达
目的:观察人工设计葛佬素的Cdna序列表达产物是否具有抗菌及中和内毒素作用.方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质的Cdna序列氨基酸的偏爱密码子,并以此为基础设计葛佬素的Cdna序列,将合成的葛佬素Cdna插入真核细胞表达载体Pcdsi中后转染CDS7细胞,对转染的COS7细胞上清进行杀菌及中和内毒素活性的检测.结果:转染的COS-7细胞上清进行杀菌及中和内毒素活性.结论:人工设计葛佬素的Cdna序列设计正确,其表达产物具有抗菌及中和内毒素作用.
-
利用RTS500系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达
目的:构建含目的基因葛佬素(Gloverin)的重组子并通过体外快速翻译系统RTS500(Rapid Translation System)对其进行表达.方法:采用PCR方法扩增gloverin cDNA,将其与表达载体pIVEX2.3连接;采用PCR及双酶切方法鉴定连接产物.将含目的基因片段的阳性重组质粒通过体外表达翻译系统RTS500,使其蛋白能在大肠杆菌(E. coli)裂解产物中进行表达.
-
葛佬素的原核表达及其在牙髓细胞中的抗炎效应研究
目的:采用原核表达系统表达抗菌肽葛佬素,并观察其对原代牙髓细胞炎性细胞因子IL-1β分泌的影响.方法:应用pET原核表达系统进行目的蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用ELISA方法,观察重组葛佬素对内毒素诱导的牙髓细胞IL-1β释放的影响.结果:原核表达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,ELISA检测结果表明,该表达产物能够以剂量依赖方式抑制LPS诱导的IL-1β释放.结论:在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素,该表达产物可以抑制牙髓细胞炎性因子IL-1β的释放.
-
抗菌肽葛佬素在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其活性的初步分析
目的观察自行设计的葛佬素cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其表达产物的抗菌作用. 方法分析同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频度,结合已知的葛佬素蛋白质序列,设计、合成其cDNA序列.经测序验证后,将葛佬素基因插入真核细胞表达载体pCDSI中, 构建载体pBZHG.随后以脂质体为载体,对COS-7细胞进行质粒pBZHG和空载体pCDSI的转染,72 h后收集细胞培养上清液,进行杀菌活性的检测(以正常COS-7细胞培养上清作对照). 结果人工设计的葛佬素cDNA序列在COS-7中得到表达.与转染空载体的细胞和正常细胞比较,转染pBZHG的COS-7细胞培养上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性. 结论笔者所设计的葛佬素cDNA序列是正确的,由此可为深入研究葛佬素的抗菌及抗内毒素作用提供实验依据.