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端粒酶核酶真核表达质粒pBBS212Rz的构建与鉴定
目的:构建含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达质粒pBBS212Rz,为以端粒酶为靶点的基因治疗消化系肿瘤研究奠定基础.方法:将人工合成的端粒酶核酶基因通过基因重组定向克隆插入到真核表达质粒载体pBBS212中.根据260nm的紫外光吸收值计算重组质粒pBBS212Rz浓度.结果:端粒酶核酶基因成功地定向插入了载体pBBS212,经酶切后用聚丙烯凝胶电泳鉴定确认.重组质粒浓度为1.77 g/L.结论:成功构建了含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达重组质粒pBBS212Rz.
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端粒酶核酶hTERT 5'RZ时辰治疗人肝癌裸鼠移植瘤
我们在既往的研究中,为探讨肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成与端粒酶表达的生物节律,在时辰同步化裸鼠中构建了肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤.继续在程控光照条件下饲养,于光照后3,6,9,12,15,18,21小时取样,用流式细胞仪测定各时期细胞DNA含量,细胞周期分布及端粒酶活性水平.结果,肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成随昼夜节律变化,且伴随端粒酶活性的同步节律变化,均在光照后21小时达高峰,光照后9小时处于低谷;节律周期呈余弦分布.表明,肝癌裸鼠移植瘤的生长与端粒酶活性表达在静止相达高峰,为制定肿瘤时辰化疗方案提供了有价值的参考.