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端粒酶核酶真核表达质粒pBBS212Rz的构建与鉴定
目的:构建含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达质粒pBBS212Rz,为以端粒酶为靶点的基因治疗消化系肿瘤研究奠定基础.方法:将人工合成的端粒酶核酶基因通过基因重组定向克隆插入到真核表达质粒载体pBBS212中.根据260nm的紫外光吸收值计算重组质粒pBBS212Rz浓度.结果:端粒酶核酶基因成功地定向插入了载体pBBS212,经酶切后用聚丙烯凝胶电泳鉴定确认.重组质粒浓度为1.77 g/L.结论:成功构建了含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达重组质粒pBBS212Rz.
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msCs移植对扩张型心肌病TGF-β1、AT1、CYP11B2及心肌胶原表达影响的研究
目的:探讨经外周静脉途径移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, msCs)治疗扩张型心肌病心衰的可行性及对TGF-β1、AT1、CYP11B2及心肌胶原表达的影响。
方法:1.扩张型心肌病心衰动物模型的构建与鉴定SPF级近雄性SD大鼠采用腹腔注射ADR的方法构建DCM心衰模型。给药第10周对两组大鼠行心脏超声检查,心肌组织HE、Masson病理染色、心肌胶原分析及免疫组化检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,鉴定模型。2.骨髓间充质干细胞移植治疗扩张型心肌病将DCM大鼠经尾静脉注射含msCs的细胞悬液。于细胞移植第20周进行心脏超声检查,观察LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS。于末次移植后第20周末行心肌组织HE、Masson病理染色、心肌胶原分析及免疫组化检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,RT-PCR扩增Ⅰ、Ⅲ胶原、TGF-β1、AT1、CYP11B2基因片段,检测其mRNA的表达。数据进行统计学分析。 -
p16基因转染对膀胱癌细胞系BIU-87体外生长的抑制作用
为探讨p16基因在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其在膀胱癌基因治疗中的应用前景,我们将野生型p16基因导入缺失p16基因的BIU-87细胞中,观察p16基因的肿瘤抑制功能.一、材料与方法1.p16基因重组表达载体的构建与鉴定:质粒pGRE5-1含全长0.96 kb的人p16cDNA基因片段,用EcoRI和XhoI双酶切pGRE5-1分离出p16cDNA基因片段,将其插入真核表达载体pcDNA3(5.4kb)的EcoRI/XhoI酶切位点间,构建成重组质粒,命名为pcDNA3-p16,酶切、电泳鉴定.
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人源性基质金属蛋白酶-1原核表达载体的构建与鉴定
目的构建人源性基质金属蛋白酶-1(MMP-1)原核表达载体. 方法从人肝组织提取总RNA,以此为模板,逆转录巢式 PCR扩增MMP-1全编码区基因片段,构建含目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-C2x重组质粒亚克隆,经双酶切及核苷酸测序进行分析鉴定. 结果成功地构建了人MMP-1原核表达载体. 结论构建的人MMP-1原核表达载体,为以后MMP-1融合蛋白的表达并获得具有抗原性的MMP-1融合蛋白奠定了基础.
关键词: 人基质金属蛋白酶-1 原核表达载体 构建与鉴定