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人类SUZ12基因实时荧光定量PCR检测方法的建立
目的:建立SYBR GreenⅠ实时荧光PCR定量检测人类SUZ12基因的方法.方法:将SUZ12 RT-PCR扩增片段克隆入载体pGEM-T后,经测序鉴定正确后,进行纯化和定量及系列稀释,应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测SUZ12,建立标准曲线,熔解曲线分析产物的特异性.结果:该法检测的低拷贝数为14.2,线性范围为1.42×101-1.42×108拷贝,相关系数r为-1.00,1.42×107拷贝/L标本的批内变异系数(CV)和日间CV分别为1.8%和2.8%.熔解曲线分析显示单一的峰,熔解温度(melting temperature,Tm)为(81.37±0.16)℃.结论:实时荧光定量PCR方法检测SUZ12基因,快速有效、灵敏度高、特异性好.
关键词： SUZ12 SYBR greenⅠ 实时荧光定量PCR -
多梳蛋SUZ12预测吉西他滨治疗肝内胆管癌疗效和预后的研究
目的 本研究探讨了肝内胆管癌(ICC)患者多梳蛋白SUZ12的表达及其在预测ICC患者的生存和对治疗反应的作用.方法 用免疫组织化学方法检测207个肝组织样本(包括ICC患者,胆道上皮内瘤样病变患者BilIN-1,-2,-3,和非瘤样病变的胆管样本)SUZ12和p16INK4a蛋白的表达.评估这些蛋白的表达是否和接受化疗的ICC患者的病理学特征和生存结果相关,以及是否和随后的化疗反应相关.结果 从非肿瘤性胆管组织依次到BilIN-1,-2,-3,ICC,SUZ12表达水平渐进增加.而p16INK4a蛋白在非瘤样病变性胆管组织中大量表达,但在BilIN-1,-2,-3,ICC组织中依次逐渐降低.SUZ12表达与未分化的ICC、淋巴结转移和晚期癌症相关.Kaplan-Meier曲线分析显示,高表达SUZ12的ICC患者与低表达SUZ12的ICC患者相比,总生存期和无瘤生存期显著降低.SUZ12表达与接受吉西他滨为基础的辅助化疗(Adjuvant gemcitabine-based chemotherapy,AGC)的患者的总体存活显著相关.结论 SUZ12表达能够预测用吉西他滨为基础的化疗的ICC患者的总生存期和无病生存期.
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胰腺癌组织中SUZ12蛋白的表达及临床意义
目的 分析SUZ12蛋白在胰腺癌组织中的异常表达及其与临床和病理特征的关系.方法 对2002至2007年哈尔滨医科大学附属第一医院86例胰腺癌患者石蜡标本通过免疫组化方法检测SUZ12蛋白的表达情况.结果 SUZ12蛋白在63％的胰腺癌组织中表达增高,其增高与肿瘤的分化,淋巴结转移相关(P＜0.001);此外,高表达的SUZ12蛋白对吉西他滨有抑制作用(P＜0.05).结论 高表达的SUZ12蛋白促进肿瘤恶性生物学行为并能促使肿瘤细胞耐受吉西他滨.
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SUZ12蛋白对口腔鳞状细胞癌的致癌作用
目的：分析SUZ12蛋白的表达水平与口腔鳞状细胞癌（ OSCC ）患者恶性生物学行为的关系，并研究SUZ12蛋白在口腔鳞状细胞癌细胞系中的生物学功能。方法对2008至2013年哈尔滨医科大学附属第一医院96例口腔鳞状细胞癌患者石蜡标本通过免疫组化方法检测SUZ12蛋白的表达；在体外实验中，通过RNA干扰的手段抑制SUZ12蛋白在口腔鳞状细胞癌细胞系中的表达水平。结果 SUZ12蛋白在OSCC组织中表达增高，其增高与肿瘤的分化，淋巴结转移相关（ P＜0.001）；此外，发现抑制SUZ12蛋白的表达抑制了口腔鳞状细胞癌细胞的增殖，促进了口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡。结论SUZ12起到癌基因的作用，高表达的SUZ12蛋白水平在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中起到重要作用。
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TET1对肾癌786-O细胞增殖的影响及其相关机制
目的:应用小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)沉默TET1 (ten-eleven translocation 1)基因表达,探索其对人肾癌786-O细胞增殖的影响及其可能的机制.方法:采用脂质体转染法将靶向TET1基因的TET1-siRNA转染人肾癌786-O细胞,实验设空白对照组、阴性对照组和干扰组(TET1-siRNA组).分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测转染TET1-siRNA后,786-O细胞中TET1、SUZ12 (suppressor of zeste 12)、EZH2 (enhancer of zeste homolog 2)和EED(embryonic ectoderm development)mRNA及其蛋白的表达；MTT法和克隆形成实验检测786-O细胞的增殖活性和克隆形成率；FCM检测786-O细胞周期.结果:与空白对照组比较,转染TET1-siRNA后,786-O细胞中TET1 mRNA及其蛋白的表达水平分别下降了(85.13±0.03)％和(56.41±0.09)％,差异有统计学意义(P＜0.05); 786-O细胞的增殖受到抑制,克隆形成能力明显下降,G0/G1期细胞百分比明显增加(P＜0.05); SUZ12 mRNA及其蛋白表达水平下调(P＜0.05),EED和EZH2蛋白表达水平变化不明显(P＞0.05).结论:TET1-siRNA可显著下调肾癌786-O细胞中TET1蛋白的表达水平,明显抑制786-O细胞的增殖,并使细胞阻滞于G1期,其机制可能与TET1调控SUZ12的表达,影响其靶基因对PRC2 (polycomb repressive complex 2)的招募有关.
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SUZ12在舌鳞癌中的表达及临床意义
目的 研究多梳蛋白家族成员SUZ12在舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)中的表达及其与多种临床病理参数之间的关系,探讨其在舌鳞癌预后判断中的意义.方法 采用免疫组织化学染色半定量的方法检测72例术前未接受放、化疗或其他特殊治疗的原发性舌鳞癌患者标本及15例正常舌黏膜中SUZ12的表达情况,结合临床资料,对其与舌鳞癌临床病理特征和预后的相关性进行统计学分析.结果 SUZ12在舌鳞癌组中的表达明显高于正常舌黏膜.舌鳞癌组织中SUZ12的表达与患者年龄、性别、抽烟、饮酒、肿瘤大小、病理分级、临床分期之间在统计学上无显著性差异,与颈部淋巴结转移(P=0.032 5)、总体生存率(P=0.022 5)及无瘤生存率(P=0.017 9)相关.结论 SUZ12在舌鳞癌组织中过表达与颈淋巴结转移及低生存率相关,可能作为舌鳞癌诊断和预后判断的指标.
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PRC2成分SUZ12在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性
目的：：探讨并研究多梳抑制复合物2(PRC2)成分SUZ12在结直肠癌组织中的表达情况及其与临床病理特征的相关性。方法：选择85例行腹腔镜结直肠癌切除术的患者为研究对象，术中收集所有患者手术切除后的结直肠癌病理标本，患者术前均未行放化疗，同时另取距离癌组织边缘15 cm的癌旁正常组织为对照组。测定结直肠癌组织及正常组织内的SUZ12蛋白含量，根据细胞核阳性染色强度和阳性细胞所占比例，评价SUZ12阳性表达分数及在结直肠癌组织中的表达水平。结果：左半结肠癌组、横结肠癌组、右半结肠及乙状结肠癌组、直肠癌组与其相应的对照组多梳蛋白SUZ12的阳性标记分数均增加( P<0.05~P<0.01)。大肠癌TNM Ⅲ~Ⅳ期的SUZ12的阳性标记分数均高于Ⅰ~Ⅱ期，中分化及高分化癌组织的分数均高于和低分化及未分化(P<0.01)，有淋巴结转移比无淋巴结转移的分数高(P<0.01)。 SUZ12的阳性标记分数在年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤部位和肿瘤浸润深度各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：SUZ12蛋白可作为评价肿瘤恶性程度的指标，对早期诊断结直肠癌、改善治疗方案、提高患者生存时间至关重要。
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下调SUZ12抑制人宫颈癌细胞的增殖及作用机制
目的 探讨下调SUZ12表达对人宫颈癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法 通过RNAi(RNA干扰技术)下调SUZ12和Cdc25C蛋白的表达,通过慢病毒转染法对Hela细胞构建Cdc25C蛋白过表达及其对照细胞株,并用含嘌呤霉素培养基进行为期14d的筛选,荧光拍照检测绿色荧光蛋白以及Western Blot法进行验证;MTT法检测下调SUZ12和Cdc25C蛋白对细胞增殖的影响;Western Blot法检测下调SUZ12表达后蛋白表达量的改变.结果 MTT结果显示,siSUZ12组中Hela及SiHa的增殖率远低于对照组,细胞增殖明显受到抑制,Hela的生存率为(60.65±7.64)％(P＜0.01),SiHa的生存率为(73.81±9.30)％(P＜0.01).时效研究结果显示,转染siSUZ12后,Hela细胞在转染第2天后开始出现抑制,其中第5天为明显,生存率为(56.13±7.78)％(P＜ 0.01);SiHa细胞在转染第1天后开始出现抑制,其中第5天为明显,生存率为(70.50±3.15)％(P＜ 0.01).细胞周期结果显示,Hela细胞在siSUZ 12作用48 h后,G0/G1期的比例明显增加(P＜0.05),细胞发生G1/S期阻滞.SiHa细胞在siSUZ12作用60h后,G2/M期细胞数比例显著升高(P＜0.01),细胞发生G2/M期阻滞.Western Blot结果显示,下调SUZ12表达后,细胞内Cdc25C的表达明显被抑制.阻断Cdc25C的表达后能显著拮抗siSUZ12对Hela、SiHa细胞的抑制作用,而过表达Cdc25C能降低siSUZ12对细胞的抑制作用.结论 下调SUZ12能通过干扰Cdc25C的表达,产生抑制人宫颈癌细胞增殖的作用.
