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抑制阿萨希毛孢子菌脂筏形成后对其致病性的影响研究
目的：观察阿萨希毛孢子菌（Trichosporon asahii, T. asahii）脂筏形成被抑制后对其致病性的影响。方法建立小鼠免疫抑制模型，将50只小鼠随机分为5组，每组10只。实验组分别接种经0.2、0.5、1.0、2.0μg/ml两性霉素B处理的菌悬液，对照组接种正常生长的菌悬液。连续观察3周，统计不同组别小鼠致死率，同时将内脏进行组织真菌培养及组织病理检查，计算感染率。结果对照组致死率为80%，内脏感染率为90%。接种经浓度为1.0μg/ml、2.0μg/ml两性霉素B处理而破坏T. asahii脂筏的菌悬液后，致死率和感染率分别为37.5%、20%以及50%、40%，与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；接种经浓度为0.2μg/ml、0.5μg/ml两性霉素B破坏脂筏的菌悬液后，其致死率和感染率亦有不同程度的降低，但与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。感染小鼠的各脏器组织病理改变主要为急性化脓性炎症及肉芽肿性炎症，组织中可见关节孢子和菌丝。结论 T. asahii脂筏形成受到两性霉素B抑制后，其致死率和感染率明显降低，并随着药物浓度的增加而梯度减弱，即致病性相应降低。提示脂筏有可能成为抗真菌药物研究的新的靶位。
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CARD9基因敲除小鼠骨髓来源树突状细胞对阿萨希毛孢子菌临床株的免疫反应缺陷
目的 初步探讨CARD9基因敲除小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cell,BMDC)对阿萨希毛孢子菌临床株(Trichosporon asahii,T.asahii)的免疫反应缺陷.方法 体外培养野生型(wild type,WT)与CARD9基因敲除型(CARD9 knockout,CARD9-/-)小鼠BMDC并分别与热灭活的T.asahii进行共培养,比较两者对菌体的黏附吞噬能力、表面共刺激分子的激活、细胞因子的表达以及两种小鼠感染菌株后的生存率.结果 共培养24 h后,WT与CARD9-/-小鼠BMDC对T.asahii的黏附吞噬情况比较未见明显差异;经T.asahii刺激的CARD9-/-小鼠BMDC的CD80、CD86激活情况以及白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α 表达水平均明显低于WT小鼠BMDC(P<0.05);感染T.asahii的CARD9-/-小鼠的生存率明显低于WT小鼠(P<0.05).结论 CARD9-/-小鼠BMDC对T.asahii的免疫反应缺陷主要体现在共刺激分子的激活以及促炎细胞因子的表达,但并未影响其对T.asahii的吞噬识别.
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格尔德霉素和环孢素联合常用抗真菌药对阿萨希毛孢子菌临床株体外药敏研究
目的 研究格尔德霉素和环孢素(热休克蛋白90与钙调磷酸酯酶抑制剂)抗阿萨希毛孢子菌活性,及联合常用抗真菌药物后的体外药物敏感性.方法 通过美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的M27-A3肉汤稀释法检测格尔德霉素和环孢素对21株阿萨希毛孢子菌临床株的体外抗真菌活性,棋盘微量液基稀释法检测上述2种抑制剂与5种常用抗真菌药(氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B和卡泊芬净)的相互作用.结果 格尔德霉素对阿萨希毛孢子菌临床株有较好的体外抗真菌活性,而环孢素作用较弱.此外,格尔德霉素和环孢素与5种常用抗真菌药联合使用,均显示具有良好的体外抗阿萨希毛孢子菌协同作用.结论 格尔德霉素和环孢素可以提高常用抗真菌药对阿萨希毛孢子菌的敏感性,提示一种针对侵袭性毛孢子菌病的潜在治疗策略.
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阿萨希毛孢子菌相关实验研究进展
阿萨希毛孢子菌（Trichosporon asahii，T. asahii）是一种可引起免疫缺陷患者机会性感染的酵母样真菌。目前认为该菌是播散性毛孢子菌病主要致病菌。该文综述了近年来阿萨希毛孢子菌相关实验研究进展。
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阿萨希毛孢子菌抗氧化酶活性研究
目的：观察和测定44株不同来源阿萨希毛孢子菌（Trichosporon asahii，T.asahii）抗氧化酶活性。方法收集44株不同来源T.asahii，将其分为环境组（3株）、临床组（9株）、体内传代组（20株）和体外耐药组（12株），分别用羟胺法和可见光法测定其抗氧化酶超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和过氧化氢酶（catalase，CAT）活性，并进行比较和分析。结果环境组：SOD酶活性均值为（4.01±0.66）U/mgprot，CAT酶活性均值为（48.51±7.60）U/mgprot；临床组：SOD酶活性均值为（10.45±3.87）U/mgprot，CAT酶活性均值为（110.56±35.77）U/mgprot；体内传代组：至传代第5代，菌株SOD酶活性均值为（8.65±4.15）U/mgprot，CAT酶活性均值为（71.36±12.19）U/mgprot；耐药组：至诱导末期第10代菌株SOD酶活性均值为（8.02±1.56）U/mgprot，CAT酶活性均值为（80.43±8.92） U/mgprot。结论 T.asahii具有较强的抗氧化能力。不同来源T.asahii抗氧化能力不同，主要体现在抗氧化酶活性的不同。其中，临床组菌株抗氧化能力强，体内传代组菌株和体外耐药组菌株次之，环境组菌株低。
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阿萨希毛孢子菌感染1例的报道
阿萨希毛孢子菌是一种临床少见的致命真菌，存在于自然环境以及正常人的皮肤、呼吸道、和消化道等部位，在机体免疫力下降时可致病。我科于2013年11月在一患者痰与尿标本中分离出阿萨希毛孢子菌现报道如下。
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壳聚糖对阿萨希毛孢子菌生物被膜形成的影响
目的 观察不同浓度壳聚糖对阿萨希毛孢子菌(asahii trichosporon,T.asahii)生物被膜(biofilm,BF)形成的影响.方法 以T.asahii聚苯乙烯表面形成生物被膜48 h为评价标准,观察其在0.25 mg/ml,0.50 mg/ml,0.75 mg/ml,1.0 mg/ml,1.25 mg/ml和1.5 mg/ml壳聚糖溶液下观察T.asahii BF的差异性;并应用XTT法测定生物膜活性并定量分析.结果 48 h内0.25 mg/ml,0.5 mg/ml,0.75 mg/ml和1.0 mg/ml壳聚糖溶液没有明显抑制生物被膜形成的作用;1.25 mg/ml壳聚糖溶液明显具有抑制T.asahii BF形成的作用,96 h后逐渐消失抑制作用.结论一定浓度壳聚糖可明显抑制生物被膜的形成,但具有一定时效性.
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膀胱造瘘患者尿液中分离出阿萨希毛孢子菌一例
阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)为条件致病菌,属于皮肤毛孢子菌,为酵母样真菌,恶性肿瘤、白血病、免疫缺陷、中性粒细胞减少等患者较易感染,国内杨蓉娅等[1] 2002年首次报道了该菌引起的感染.2010年12月,我们从一位长期住院膀胱造瘘术后患者尿液中分离出一株阿萨希毛孢子菌,现报道如下.一、病例资料患者,男,84岁,5年前患急性脑梗死后开始出现记忆力减退、反应迟钝、语言能力下降,生活能力进行性减退,后无法进食,吞咽困难、易呛,反复发生呼吸道感染而住院治疗,多次行痰培养显示铜绿假单胞菌和嗜麦芽寡养假单胞菌.
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阿萨希毛孢子菌致急性心肌梗死患者肺部感染一例
阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)原属皮肤毛孢子菌,为酵母样真菌,目前认为该菌为条件致病菌,国外报道多见于血液病、恶性肿瘤、免疫缺陷、白细胞减少症等患者的皮肤感染[1,2] .我们于2007年3月发现了1例心肌梗死继发阿萨希毛孢子菌所致肺部感染的患者.
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阿萨希毛孢子菌泌尿系感染的流行病学及药物敏感性分析
目的 分析阿萨希毛孢子菌泌尿系感染的流行病学、感染状况、危险因素以及微生物学的特征,指导临床选择及时、有效的抗真菌治疗.方法 收集分离自2013至2016年泌尿系感染患者的18株阿萨希毛孢子菌,对该病原菌的分离鉴定、药敏试验以及病历资料进行流行病学回顾性调查.结果 18株阿萨希毛孢子菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的耐药率分别为0、5.6％、0、0、0,但是伊曲康唑的敏感率仅为50.0％.阿萨希毛孢子菌泌尿系统感染的风险因素以男性、患有基础疾病(占100％)、长期使用广谱抗菌药物(占100％)、留导尿管(占83.3％)、皮质激素的应用(占50.0％)、免疫抑制剂应用(占38.9％)为主,粒细胞减少的比例较少(占5.6％).临床16例选用氟康唑治疗好转,另2例用伊曲康唑、伏立康唑治疗后死亡,其主要死亡原因与真菌治疗无关.结论 阿萨希毛孢子菌可引起泌尿系统感染,高危因素主要有基础疾病、广谱抗菌药物的长期使用和留置导尿管等,治疗首选氟康唑.及早明确病原学诊断、正确选用抗真菌药物是成功治疗阿萨希毛孢子菌感染的关键.
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侵袭性阿萨希毛孢子菌和克柔假丝酵母菌双重感染1例
我科从1例慢性肾功能衰竭患者多标本中分离培养出侵袭性阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)和克柔假丝酵母菌,报告如下.1 临床资料患者,女,35岁,2007年6月25日因患狼疮性肾炎(肾功能衰竭期)并发腹膜感染入住我院肾科.
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阿萨希毛孢子菌感染致病机制的研究进展
阿萨希毛孢子菌是一种条件致病菌,也是毛孢子菌病常见的致病菌,可引起表浅部位感染,也可导致深部侵袭性感染,且发病率逐年增高,对其致病机制尚缺少系统及足够的认识,该文综述了阿萨希毛孢子菌致病机制的新进展,涉及基础免疫状态、生物膜形成、形态转换与免疫逃逸、毒力因子及皮脂腺分泌活性等方面,为临床治疗和预防感染提供了思路与对策.
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氟康唑诱导耐药的阿萨希毛孢子菌ERG11基因表达研究
目的 探讨ERG11基因在阿萨希毛孢子菌耐药的作用以及基因表达量与药物浓度间的关系.方法 通过氟康唑体外诱导获得阿萨希毛孢子菌耐药菌株,将敏感株与耐药株同时置于含0~64μg/ml浓度氟康唑的培养基中培养,用实时PCR检测ERG11基因的表达情况.结果 在无药情况下,阿萨希毛孢子菌耐药株组ERG11基因表达(7.542±5.311)高于敏感株组(1.014±0.012),两组比较t=3.002,P=0.03.在不同浓度氟康唑作用下,耐药株组ERG11 mRNA水平分别为9.183±3.226,13.657±5.428,15.292±7.007,13.720±8.550,13.949±2.960,13.123±6.429,亦高于敏感株组3.281±2.068,3.459±1.923,3.242±2.530,3.651±0.728,3.969±1.924,3.824±1.875,均P<0.05.但ERG11表达量与氟康唑浓度之间差异无相关性(耐药株rs=0.229,P=0.096;敏感株rs=0.166,P=0.357).结论 阿萨希毛孢子菌ERG11基因过表达与氟康唑耐药有关.ERG11基因mRNA表达与氟康唑浓度之间无相关性.
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阿萨希毛孢子菌对氟康唑耐药性的体外诱导及其稳定性研究
目的 探讨体外以浓度梯级倍增的氟康唑诱导不同来源阿萨希毛孢子菌(T.asahii)获得耐药子代,并观察它们的耐药稳定性.方法 保存的11株T.asahii中筛选出的氟康唑MIC值较低的临床分离株CBS2479及环境分离株CBS8904,在含氟康唑浓度梯级倍增的PDA固体培养基中分别传代培养,每次转种前均用E-test法测定氟康唑对其MIC值,直至其＞256 μg/ml;选用氟康唑MIC值＞256 μg/ml的耐药菌株CBS2479R/CBS8904R分别在不含氟康唑的PDA培养基中连续传代培养,并监测每代菌株MIC值,观察其耐药稳定性.结果 氟康唑MIC值分别为0.25 μg/ml及1.5 μg/ml的T.asahiiCBS2479/CBS8904均被成功地诱导为氟康唑MIC值＞256 μg/ml的耐药子代菌株CBS2479R/CBS8904R;将其在不含氟康唑PDA培养基中连续传代18d,CBS2479R氟康唑MIC值未见下降;CBS8904R氟康唑MIC值逐渐下降,至第18天时降为64 μg/ml.结论 氟康唑在体外能诱导不同来源的T.asahii均对其产生耐药性,不同来源的T.asahii其耐药子代的稳定性不同.
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阿萨希毛孢子菌对单核细胞产生细胞因子影响的研究
毛孢子菌(Trichosporon spp.)是一种机会致病真菌,可引起皮肤局限性及系统性感染.近年来国外有关该菌在免疫缺陷和肿瘤患者中引起播散性感染的报道逐渐增多[1,2],但也有报道由该菌所致的播散性毛孢子菌病患者无免疫性或肿瘤疾患存在[3].肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素10(IL-10)是单核细胞抗感染中产生的细胞因子,具有行多种生物学活性.本实验通过阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)与人单核细胞的混合培养,观察该菌对单核细胞产生TNF-α、GM-CSF、IL-10的影响,以探讨细胞因子在阿萨希毛孢子菌致播散性毛孢子菌病感染中的作用.
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国内首株阿萨希毛孢子菌超微结构观察
2001年我们在国内报道了首例播散性毛孢子菌病[1],并对其致病菌进行生化鉴定、DNA测序等,证实该菌为阿萨希毛孢子菌(Trichosporon as ahii)[2].该菌是一种可致白毛结节病及甲真菌病的酵母样真菌,在免疫缺陷和肿瘤患者可致皮肤或脏器感染[3].我们曾对该菌的光镜形态结构及其培养特征进行了观察报道[4].根据Medline(1966-2002)、CBMdisc(1981-2002)、CMCC(2002-)、中国专利文摘数据库、中国科技成果大全等数据库检索,有关阿萨希毛孢子菌的超微结构研究,国内外文献中均未见有报道.现将该菌的扫描电镜、透射电镜超微形态结构观察报道如下.
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Ras1、Rac1、Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异
目的 研究Ras1、Rac1和Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异,探讨其在菌丝生长过程中的作用.方法 分别培养阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相,提取两组的总RNA,采用荧光定量PCR方法测定两组中Ras1、Rac1和Rho1 mRNA的相对表达量.结果 酵母相菌丝生成率(0.40％±0.53％)显著低于菌丝相(99.33％ ± 0.57％,t=13.93,P＜0.05).实时荧光定量PCR显示,以酵母相为对照组,将其Ras1、Rac1、Rho1基因表达量均设为1,则菌丝相的Ras1、Rac1、Rho1基因mRNA相对表达量分别为25.17±10.99、16.81±7.80、42.61±18.50,与酵母相比较,差异有统计学意义(t值分别为3.81、3.51、3.90,均P＜0.05).结论 Ras1、Rac1、Rho1基因可能参与了阿萨希毛孢子菌菌丝的生长过程.
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慢性阻塞性肺疾病患者阿萨希毛孢子菌尿路感染一例
阿萨希毛孢子菌(trichosporonasahii)为条件致病菌,国外的报道多见于血液病、恶性肿瘤、免疫缺陷、白细胞减少症等患者皮肤感染.我院ICU发现了1例慢性阻塞性肺疾病继发阿萨希毛孢子菌尿路感染患者,现报道如下.我院本例泌尿生殖道标本的纯培养,在国内外的报道和危险因素及抗生素治疗方案均为少见.1一般资料患者,男,75岁.因慢性阻塞性肺疾病而多次入院住ICU并使用了大量泰能、万古霉素、替考拉宁等抗生素治疗.近日再次拟诊为“慢性阻塞性肺疾病急性加重期”收入院.入院查体:桶状胸,双肺呼吸音减低,双下肺可闻及散在的湿性哕音,无哮鸣音.辅助检查:血常规白细胞计数11.6×109 L-1,中性粒细胞0.76,绝对值8.8 ×109 L-1;胸部后前位X线片显示两肺感染;尿常规显示白细胞每高倍视野(+),镜检真菌满视野.
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骨髓增生异常综合征患者播散性阿萨希毛孢子菌感染1例
患者男，28岁。2014年6月23日因“血三系低下6年，反复发热4月余”就诊，拟“骨髓增生异常综合征”收入我院。体检：体温39.9℃，脉搏140次/min ，呼吸20次/min，血压109/65mmHg；血白细胞0.2×109/L，中性粒细胞百分数11.4%，淋巴细胞百分数86.9%，血红蛋白66g/L，血小板12×109/L，C反应蛋白81.70mg/L，血糖7.24mmol/L，尿蛋白（++）。神志欠清，精神软，重度贫血貌。全身皮肤广泛瘀斑，右眼角膜色白，双侧颈部、腋下、腹股沟淋巴结未触及肿大。胸骨区明显压痛。双肺听诊呼吸音急促，双下肺可闻及弥漫性湿啰音。心率140次/min，律齐。腹部平软，无明显压痛及反跳痛，肝、脾肋下未及。2014年8月5日患者血液无菌采集后放入 Bact/Alert 3D血培养仪培养，需氧瓶60h报警，直接涂片见真菌孢子，转种血平板、沙保弱培养基，观察菌落形态；同时采用Vitek-2 Compact 自动微生物分析仪的YST卡对该菌进行鉴定，使用 Bruker质谱仪对纯培养物进行质谱分析；提取该菌DNA采用 PCR技术扩增核糖体内转录间隔区（IST）区确定菌种，PCR反应的特异性引物参照 Rodriguez 等[1]文献设计，引物序列为：5′-TCCGTAGGTGAAC-CTGCGG。结果发现，血平板上呈白色干燥的菌落（见图1）；沙保弱培养基上培养24h后呈白色、粉尘状菌落，培养48h后菌落圆形、干燥、中心隆起，有细皱褶的酵母样菌落，以后菌落逐渐变灰，干燥，呈膜样，上有细绒毛（见图2）；挑取菌落镜检，镜下见菌丝、关节孢子和多种形状的小分生孢子，细胞质内可见多量具有折光性的小泡。菌丝分支分隔，粗细不等，1~3滋m。关节孢子数目不等，长短不一，每一关节孢子多呈矩形，（2.4~4.8）滋m×（4.8~9.6）滋m，两端圆滑。小分生孢子多呈卵形（2.4~6.0）滋m×（2.9~9.6）滋m，出芽或不出芽，可见预生、间生或游离圆形厚壁孢子，直径3~6滋m（见图3、4）。Vitek-2 YST卡鉴定和Bruker质谱仪分析结果均为阿萨希毛孢子菌。经PCR扩增，琼脂糖电泳检测，可得540bp的IST区目的片段（见图5），测序后再经Blast比对分析，其与阿萨希毛孢子菌（序列号 gb|JX174411.1|）的符合率为99%，确定该菌为阿萨希毛孢子菌。根据以上结果，诊断为阿萨希毛孢子菌血症--播散性阿萨希毛孢子病。立即静脉滴注伊曲康唑0.4mg/d ，后根据体外药敏结果改用伏立康唑0.4mg/d 和两性霉素 B联合治疗，后者首日1mg ，以后每日增量5~60mg。终患者出现多种并发症及多器官衰竭，播散性阿萨希毛孢子菌病抗真菌治疗效果不佳放弃治疗出院。
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异基因造血干细胞移植过程中并发播散性阿萨希毛孢子菌感染1例并文献复习
目的:提高对异基因造血干细胞移植患者并发播散性阿萨希毛孢子菌感染的认识.方法:报告国内首例非血缘全相合造血干细胞移植过程中并发阿萨希毛孢子菌败血症患者的临床表现、治疗方法及效果.结果:患者,女,7岁,诊断重型再生障碍性贫血行非血缘全相合造血干细胞移植,+7 d患者高热、感染性休克,4次血培养中均见白色念珠菌及阿萨希毛孢子菌生长,经伏立康唑联合两性霉素B治疗后患者体温逐渐正常.结论:阿萨希毛孢子菌是免疫缺陷及肿瘤患者中罕见的条件致病菌,在造血干细胞移植过程中并发阿萨希毛孢子菌败血症为国内首例,应用伏立康唑联合两性霉素B治疗本病疗效显著.
