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制备硅化玻片技术方法的改进
防止组织切片或细胞涂片在染色过程中组织或细胞脱落(简称脱片)是免疫组织化学及原位分子杂交技术中的重要环节.为此,通常采用载玻片涂胶或硅化处理后再裱贴组织切片的方法来防止脱片.在众多的玻片涂胶和硅化方法当中,我们对一些方法进行了改进和探讨,总结出一种使玻片处理的操作更加简单,防止脱片效果更好的方法.
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胃癌手术前后检测腹腔灌洗液中细胞内端粒酶活性的临床意义
癌细胞腹腔种植及腹膜微转移是影响胃癌预后的重要因素,目前主要诊断方法是腹腔灌洗液细胞学检查,但敏感性较差.而端粒酶在恶性肿瘤细胞中的表达率极高,是诊断恶性肿瘤的可靠指标.我们用原位分子杂交技术(ISH)测定胃癌术前术后腹腔灌洗液中细胞内端粒酶活性,检查腹腔中游离癌细胞,在预测胃癌术后腹膜复发及临床治疗方面有指导意义.
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原位分子杂交中脱片问题浅析
核酸分子杂交技术是当今分子生物学研究的重要手段.原位分子杂交技术是分子生物学和组织化学结合的成果,能准确定位组织细胞内的特定基因表达.但分子杂交实验操作步骤繁琐,实验周期长,条件要求高,涉及实验试剂多,常常因为很小的因素而导致实验失败.原位分子杂交实验中,所有的操作均是针对载玻片上的目的组织进行的,因此,实验中的脱片就是常常困扰实验者的一个问题[1~3].在此,笔者根据自己的实际操作经验和资料研究,对脱片问题进行简单分析,以求对实验有所帮助.
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原发性肺癌患者结核分枝杆菌的耐药性检测
目的 研究原发性肺癌患者结核分枝杆菌(MTB)的感染类型及对药物耐受性分析.方法 选取湖北医药学院附属东风医院2014年6月-2015年8月收治的原发性肺癌患者89例,提取患者肺组织标本,采用原位分子杂交技术对组织标本的MTB及其L-型MTB(MTB-L)进行检测,分析原发性肺癌患者感染类型,同时进行药敏试验,统计对各药物的耐药率.结果 所有肺癌组织标本的MTB-L阳性检出率为38.2%,不同组织学分型肺癌的MTB-L阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05).MTB-L对一线抗结核药物的耐药率为57.1%,对二线抗结核药物的耐药率为31.7%.多重耐药MTB的耐药率(36.5%)明显高于广泛耐药MTB (12.7%)(x2=9.63,P=0.001).结论 原发性肺癌患者以MTB-L感染为主,MTB-L对异烟肼及二线抗结核药物存在较高耐药率,且多药联合使用可能会降低疗效,增加MTB-L的耐药率.本研究结果为临床合理选用抗菌药物,有效治疗提供科学指导.
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大肠癌转化生长因子β受体及其下游分子Mad2基因表达的研究
本文采用免疫组化SP法及原位分子杂交技术,从蛋白水平和mRNA水平分析大肠癌及其癌旁粘膜组织中Ⅰ型转化生长因子-β受体(TβRⅠ)、Ⅱ型肿瘤生长因子-β受体(TβRⅡ)及Mad2(mothers against dpp 2)基因的表达,旨在探讨TβR和Mad2基因改变在大肠癌发生发展过程中的作用及其与大肠癌临床病理特征之间的关系.
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胃肠道癌肿腹腔冲洗液端粒酶检测的临床意义
胃肠道癌肿腹腔微转移及脱落癌细胞腹腔种植复发是影响其预后的主要因素之一.主要诊断方法是检测腹腔中游离癌细胞,目前常用的是腹腔冲洗液细胞学检查,但其敏感性低,而端粒酶在恶性肿瘤细胞中的表达率极高,胃癌中达92.3%[1],大肠癌中达92%[2],是诊断恶性肿瘤的可靠指标.作者用原位分子杂交技术(ISH)测定胃肠道癌肿术前术后腹腔冲洗液中细胞端粒酶活性,来检测腹腔中游离癌细胞,预测胃肠道癌肿术后复发及指导临床治疗.
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DNA原位分子杂交技术的实践体会
原位分子杂交技术是近几年发展起来的一项新技术,我们对实际工作中的一些技术问题进行了探索,现总结如下供大家参考.
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hTERT mRNA在结直肠癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)在结直肠癌(CRC)组织中的表达,分析hTERT与结直肠癌患者临床病理参数及预后的相关性.方法:运用原位分子杂交技术(ISH)检测210例患者结直肠癌组织及其正常组织中hTERT mRNA表达水平,分析在结直肠癌组织中hTERT表达与肿瘤病理特征及预后的关系.结果:在结直肠癌组织中,hTERT mRNA阳性表达率明显高于相对应的正常结直肠组织,两者差异有统计学意义(P<0.05);在≥60岁的结直肠癌患者中hTERT阳性表达率比<60岁的结直肠癌明显增高(P=0.028);在低分化腺癌和粘液癌中hTERT阳性表达率明显高于高中分化腺癌(P=0.029);hTERT的阳性表达与浸润深度、脉管受侵及肿瘤分期均成正相关(P=0.032,P=0.017,P=0.010).结直肠癌患者中hTERT mRNA阴性组的生存期比阳性组长,差异具有统计学意义(P=0.009).结论:hTERT在结直肠癌的发生、发展过程中起着重要作用,而且hTERT表达可能与结直肠癌的年龄、浸润、转移、分期等病理特征相关,它可能成为评价结直肠癌预后的一个重要指标.