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催化甾体羟基化的P450氧化酶BM3的蛋白质工程的研究进展
甾体关键位点的羟基化在药用甾体的合成中发挥重要作用。为探究细胞色素 P450(CYP450)氧化酶 BM3在甾体羟基化合成中的潜在应用,基于细胞色素 P450 BM3的蛋白质工程逐渐发展起来。在取得的若干 P450 BM3突变酶的基础上,通过新一代测序技术和生物信息学分析等方法,筛选出催化甾体羟基化的相关 CYP450。根据易错 PCR等定向进化技术获得了突变位点信息,进一步采用(饱和)定点突变等进化技术对活性氨基酸位点进行分析,再经过筛选获得既高于亲本酶也高于易错 PCR技术得到的突变酶活力的新突变酶,并对突变体进行功能验证,进一步阐明甾体羟基化的可行性和重要性。此外,P450 BM3催化底物和生成产物的选择性可以通过迭代的组合活性位点突变而改变。本文旨在探究近年来科研人员在 P450氧化酶 BM3蛋白质工程催化甾体羟基化的改良领域中所做的尝试、获得的成果以及存在的问题,为 P450 BM3羟基化疏水性甾体的深入研究提供理论依据。
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血清B型钠尿肽与心力衰竭关系的临床观察
B型钠尿肽(BNP)又称为脑钠尿肽,主要由心室分泌.BNP源于在心肌细胞内合成的含134个氨基酸的Prepro-BNP,它在切去N端26个氨基酸信号序列后,在血液循环中继续被内肽酶切割为N端含76个线性氨基酸的NT-proBNP和C端含32个环状具有生物活性氨基酸的BNP.正常时只有少量NT-proBNP/BNP分泌入血循环,在血循环中可检测到它的存在.当心脏负荷增加或心室扩大时,心肌细胞受牵拉而触发NT-proBNP/BNP快速合成并释放入血循环.NT-proBNP比BNP半衰期长,更适合临床检测.我们通过测定不同级心力衰竭(心衰)患者血清中的NT-proBNP浓度,探讨NT-proBNP与心衰患者心功能状态的关系,寻找适用于临床的实验室常规检测指标.
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一种新的心血管活性肽:Salusins
心血管系统合成和分泌多种小分子的生物活性物质,如血管活性多肽、生物活性氨基酸、细胞因子、生长因子和一氧化碳、硫化氢等气体信号分子.这些生物活性分子具有分子量小、种类繁多、分布广泛、调节灵活和生物活性复杂等特点,对循环系统功能进行复杂调节,以维持心血管稳态,在心血管疾病的发生发展中具有重要意义.
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2种海参胶原蛋白多肽对血管内皮细胞保护作用的比较研究
目的 观察革皮氏海参和北极刺参胶原蛋白多肽对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的血管内皮细胞的保护作用,探讨其保护内皮细胞的作用机制.方法 采用ox-LDL处理血管内皮细胞(ECV304)建立氧化应激损伤模型,以MTT法测定ECV304的增殖活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内的丙二醛(MDA)含量,比色法测定一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)释放量,Hoechst33258染色法检测细胞的凋亡,Western blotting法检测caspase-3蛋白的表达.结果 经2种海参胶原蛋白多肽预处理后,ECV304细胞的增殖率显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡比率和MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞NOS活力和NO释放量均显著提高(P<0.05,P<0.01),凋亡蛋白caspase-3的表达量显著降低.结论 2种海参胶原蛋白多肽均能有效保护脂质过氧化物损伤的血管内皮细胞,其中北极刺参胶原蛋白多肽在抑制细胞凋亡和提高NOS活性方面效果更突出,可能与其氨基酸组成有关.
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血管活性肽与微循环
心血管系统合成和分泌多种小分子的生物活性物质,如血管活性多肽、生物活性氨基酸、细胞因子、生长因子和一氧化氮、一氧化碳、硫化氢等气体信号分子.这些生物活性分子具有分子量小、种类繁多、分布广泛、调节灵活和生物作用复杂等特点,对循环系统功能进行复杂调节,以维持心血管稳态,在心血管疾病的发生和发展中具有重要意义.血管活性多肽如内皮素(endothelin,ET)、肾上腺髓质素(adrenomedullin, ADM)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptides, CGRP)、血管紧张素(angiotensin, Ang)、心钠素(atrial natriuretic peptides, ANP)、尾加压素( urotensin Ⅱ, UII)等是其中一类重要的血管活性物质,它们均来源于大分子前体肽原(prepro-peptide)、肽原(pro-peptide).
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星形胶质细胞在听觉形成及听觉中枢重塑中的作用
星形胶质细胞(astrocyte ,Ast)为中枢神经系统中一类具有辐射状星形突起的细胞群体,是神经胶质细胞的主要类型。星形胶质细胞在中枢神经系统的作用体现在以下方面:通过神经元细胞间隙中离子浓度的改变调节神经元的兴奋性[1];通过缝隙连接与神经元相互作用,并分泌多种神经活性物质,促进神经元的发育[2];利用神经活性氨基酸载体,调控突触间隙神经递质的摄取与清除,维持神经元间突触传递效能[3];诱导成年神经干细胞的神经发生及突触形成[4];参与中枢神经系统感觉信息处理[5]。近年来的研究发现,星形胶质细胞在听觉形成与听觉中枢重塑过程中有着不可或缺的作用。为此,本文对星形胶质细胞在听觉形成及听觉中枢重塑中的作用研究进展进行综述。