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小鼠调节性树突状细胞分泌的外泌体诱导免疫耐受的实验研究
本研究探讨小鼠调节性树突状细胞(rDC)分泌的外泌体(regulatory exosomes,rDex)诱导免疫耐受的作用,并与正常未成熟树突状细胞的外泌体(immature exosomes,iDex)诱导免疫耐受的作用进行比较.取C57BL/6(H-2b)小鼠骨髓细胞诱导未成熟树突状细胞(iDC),TGF-β1联合IL-10诱导调节性树突状细胞(rDC),流式细胞术检测两种DC的表型.采用超速离心结合膜超滤的方法分别提取rDex和iDex.建立小鼠皮肤移植模型,以C57BL/6小鼠为供者,以BALB/c(H-2d)小鼠为受者,按对受者处理的不同实验分3组,iDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的iDex,rDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10 μg供者的rDex,另设PBS对照组,观察移植皮肤存活情况.通过单向混合淋巴细胞反应(MLR)观察供者及非亲缘异基因供者DBA/2对同种异基因小鼠T细胞增殖情况.结果表明:TGF-β1、IL-10可下调DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达.移植皮片平均存活时间(MST),在对照组为7.8天,iDex组为10.7天,rDex组为18.8天;iDex组的移植皮片MST明显长于对照组(p<0.05);rDex组的移植皮片MST明显长于iDex组(p<0.01).MLR结果证明iDex组和rDex组B/C小鼠均对C57小鼠的脾细胞产生特异性耐受,尤其是rDex组;对非亲缘异基因DBA供者的脾细胞两组仍表现出强烈的免疫应答.结论:iDex和rDex均有诱导免疫耐受的作用,且rDex作用较iDex作用好.
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调节性树突状细胞与脓毒症关系的研究进展
脓毒症是感染诱发的全身性炎症反应综合征，是内外科及烧伤危重症患者常见的并发症，进一步发展可导致脓毒症休克、多器官功能障碍综合征，系临床危重症患者主要的死因之一。脓毒症中免疫功能紊乱贯穿于病理过程的始终，宿主的免疫功能状态在很大程度上决定着炎症反应的预后。树突状细胞（dendritic cell，DC）作为免疫系统的关键调节细胞，是机体免疫系统的重要调节细胞之一。而调节性树突状细胞（regulatory dendritic cell，DCreg）作为一类具有负向调节免疫功能的未成熟DC亚型，在保持机体免疫平衡或免疫耐受方面发挥着极其重要的作用，已引起免疫学界的高度重视。本文就DCreg在脓毒症中的研究新进展作一综述，阐述其与脓毒症免疫功能紊乱的关系及作用机制。
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树突状细胞体内回输对烫伤小鼠过度炎症反应的调控作用
目的:观察树突状细胞(DCs)与调节性树突状细胞(CD11clowCD45RBhigh DCs)体内回输对烫伤所致腹腔炎症反应的影响.方法:采用15%体表面积Ⅲ度烫伤[(99.0±0.5℃)沸水中8 s]小鼠模型.伤后即刻腹腔注射林格液(1 ml/只)抗休克治疗(烫伤组,n=21)或者腹腔注射加入自小鼠脾脏分离纯化而得DCs(106/ml,DCs组,n=21)或CD11clowCD45RBhigh DCs(106/ml,CD11clowCD45RBhigh DCs组,n=21)的林格液(1 ml/只)治疗.DCs和CD11clowCD45RBhigh DCs的分离纯化采用MiniMACS免疫磁性分离系统进行;应用流式细胞术检测DC表型表达及各组小鼠腹腔液中炎症因子水平.结果:CD11clowCD45RBhigh DCs组小鼠伤后12、24、48 h腹腔液IL-6含量分别为(296.57±11.40)、(152.89±6.03)、(53.18±3.25)pg/ml,DCs组则分别为(602.44±20.64)、(304.35±9.46)、(118.30±8.90)pg/ml,均明显低于烫伤组[分别为(896.21±24.63)、(451.74±13.22)、(199.02±7.83)pg/ml,P＜0.01].同时,CD11clowCD45RBhigh DCs组腹腔液MCP-1含量[分别为(1 308.40±87.90)、(472.00±29.37)、(61.29±5.20) pg/ml]、DCs组MCP-1含量[分别为(1 708.36±103.22)、(789.23±49.02)、(86.33±6.11) pg/ml]均较烫伤组明显降低[分别为(2 019.59±129.66)、(1 067.90±65.88)、(152.87±14.28) pg/ml,P＜0.01].与烫伤组伤后12、24、48 h腹腔液TNF-α[分别为(81.63±6.02)、(54.74±4.01)、(29.45±2.51) pg/ml]比较,CD11clowCD45RBhigh DCs组和DCs组小鼠腹腔液TNF-α水平显著下降(P＜0.01).并且CD11clowCD45RBhigh DCs组腹腔液中MCP-1、IL-6和TNF-α含量较同时相DCs组下降幅度更为明显(P＜0.01).结论:自身存在的CD11clowCD45RBhigh DCs和DCs具有抑制烫伤小鼠过度炎症反应的作用.
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IL-6对脓毒症小鼠调节性树突状细胞分化与功能影响的研究
目的:探讨IL-6对脓毒症小鼠脾脏调节性树突状细胞(DCregs)的免疫调节作用.方法:85只雄性BALB/c小鼠随机分为5组:假手术组(n=5),除不行盲肠结扎穿孔(CLP)外,其余操作同模型组;CLP组和3个IL-6治疗组(n=20)均采用CLP方法制备脓毒症模型.假手术组于手术当天处死,其余4组小鼠分别于CLP模型制作后1、2、3、4d处死,获取脾脏DC细胞和T细胞,3个IL-6治疗组细胞分别给予IL-6(50、100、200u g/kg)体外刺激24 h,收集DC细胞和T细胞,并进一步分离和培养DCregs(CD11c-CD45RBhighDCregs)和CD4+T淋巴细胞,观察各组小鼠DCregs细胞比例和DCregs分泌IL-10的变化.以假手术组CD4+T细胞为对照组,将CLP小鼠的DCregs分别和CLP小鼠CD4+T淋巴细胞(IL-6未刺激组)、经IL-6刺激的CLP小鼠CD4+T淋巴细胞+IL-10抗体、经IL-6刺激的CLP小鼠CD4+T淋巴细胞+IL-10同型对照抗体混合培养24 h,观察各组CD4+T淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平的变化.结果:IL-6可呈剂量依赖性促进DCregs分化及促进Dcregs分泌IL-10;IL-6还抑制了CLP小鼠CD4+T淋巴细胞增殖和诱导Th2极化,降低CLP小鼠IL-4的水平,这一作用与IL-10的分泌相关.结论:IL-6可诱导CLP小鼠DC向调节性DC细胞亚群分化并诱导IL-10的分泌,诱导CD4+T淋巴细胞向Th2分型,从而调节机体免疫功能.
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调节性树突状细胞在免疫反应中的作用
树突状细胞(dendritic cells,DC)是专职的抗原提呈细胞(APC),起源于骨髓CD34+造血祖细胞,在各种细胞因子的刺激下分化为前体DC(pDC)、未成熟 DC(iDC)和成熟 DC(mDC).DC广泛分布于脑以外的全身组织和脏器,数量较少,仅占人外周血单个核细胞的1%.DC是一类高度异质性的APC,因其在先天免疫或启动获得性免疫中的重要作用,一直受到免疫学家的重视.DC对免疫反应的作用决定于其在体内的分布位置、分化程度及其表达的细胞因子,且根据其不同的细胞表面标记区分为不同的亚型.DC对免疫系统的作用终是由其对"下游"细胞(如B细胞或T细胞)的作用体现出来的.
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肿瘤相关免疫抑制性细胞的研究进展
肿瘤相关调节性T细胞、髓系来源抑制细胞和肿瘤相关巨噬细胞、调节性树突状细胞等免疫抑制细胞在肿瘤免疫逃逸过程中能够诱导免疫抑制反应.这些细胞在肿瘤源性因子等因素的影响下分化成熟、产生效应,并可迁移至其他部位,参与肿瘤的转移.在肿瘤免疫中,对这些肿瘤相关免疫抑制细胞的研究能够为发展新的抗肿瘤免疫治疗提供依据.
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半成熟树突状细胞与 Tregs 水平对ESCs分化的肝细胞移植小鼠模型免疫耐受的影响
目的：观察半成熟树突状细胞（ smDCs ）在小鼠胚胎干细胞（ ESCs ）来源的肝细胞移植中诱导免疫耐受的作用及机制，并分析smDCs与调节性树突状细胞（ regDCs ）之间的关系。方法将绿色荧光蛋白（ GFP）标记的129系小鼠ESCs按前期方法向肝细胞诱导分化，同时诱导129系小鼠骨髓单核细胞向smDCs和regDCs分化。将smDCs、regDCs分别预先输入BALB／c小鼠体内，3 d后再将ESCs分化的肝细胞移植入BALB／c小鼠肝实质内。观察移植细胞生存时间、生长状况、局部免疫反应情况；检测分析受体血CD4＋T细胞Foxp3表达情况等。结果对照组小鼠肝实质内移植细胞仅生存1周，smDCs组与regDCs组生存时间可达4周，移植部位CD3＋T细胞浸润较对照组明显减轻；smDCs与regDCs在形态和表型方面相似，二者均中度表达MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD86；smDCs组受体小鼠外周血CD4＋T细胞Foxp3表达量明显升高由1.11％上升至5.38％；regDCs组Foxp3表达量亦有所升高达3.87％。结论 smDCs能诱导ESCs源性肝细胞移植耐受，其机制可能与Foxp3＋Tregs产生相关。 smDCs与regDCs作用类似，且均中度表达MHC-Ⅱ、CD40等，推测为同一类型的耐受性树突状细胞。
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丹柴合剂对树突状细胞的诱导分化作用
目的：研究中药复方制剂丹柴合剂对树突状细胞（DCs）的诱导分化作用，并探讨其机制。方法制备丹柴合剂的大鼠含药血清。分离人外周血单个核细胞，经磁珠筛选出CD14+单核细胞，培养5~7 d获得未成熟树突状细胞（imDCs），分为空白血清组与含药血清组，空白血清组分别加入含或不含脂多糖（LPS）的大鼠空白血清，含药血清组分别加入含或不含LPS的大鼠含药血清。用流式细胞术检测DCs表面分子CD86、CD11b和人白细胞抗原（HLA）-DR的表达；用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测DCs分泌白细胞介素（IL）-10的水平；用流式细胞术检测DCs对T细胞增殖能力的影响；用实时定量PCR检测吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）基因的表达。结果经丹柴合剂作用后，DCs高表达CD11b，低表达CD86与HLA-DR，IL-10分泌增加。且该制剂通过促进DCs表达IDO进而抑制DCs介导的T细胞增殖能力。结论丹柴合剂可诱导DCs分化为调节性树突状细胞（DCregs）并发挥免疫调节作用。
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调节性树突状细胞的获取途径及其诱导免疫耐受的临床应用
树突状细胞（DCs）是体内作用强的抗原提呈细胞，具有双向免疫调节功能，既可诱导免疫应答，又可诱导免疫耐受。调节性树突状细胞（DCreg）具有负向免疫调节功能，可降低T细胞的免疫活性，诱导免疫耐受。DCreg可通过不同机制经药物、细胞因子、局部微环境产生，其诱导的免疫耐受作用在器官移植、自身免疫性疾病中具有重要的临床意义。近期，DCreg的耐受性和安全性已在1型糖尿病和类风湿关节炎的临床试验中得到证实。本文就DCreg的获取途径及其诱导免疫耐受的临床应用综述如下。
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树突状细胞与自身免疫的关系
树突状细胞(DC)是一类专职抗原递呈细胞(APC),通过传导不同的调节信号调节T细胞应答 或耐受.因此,DC很有可能成为免疫治疗的有力工具和靶点.近来很多数据表明DC在启动自身免疫应答中发挥重要作用.通过分析啮齿类动物和人体自身免疫病中的DC表型和DC-T细胞的相互作用可以阐明自身免疫病的部分发病机制,并且可以通过调节异常DC的功能达到免疫治疗的目的.
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肿瘤来源的调节性树突状细胞的研究进展
调节性树突状细胞(regulatory dendritic cells,DCreg)是树突状细胞(dendritic cells,DCs)亚群之一,具有抑制T细胞增殖、诱导调节性T细胞分化和支持肿瘤免疫耐受的功能.DCs的调节能力取决于它们的未成熟状态和不同的亚群,以及它所处的环境,可由免疫抑制因子、遗传操纵、某些致病刺激、免疫细胞或凋亡细胞的信号、组织或肿瘤微环境引起,因此DCs的致耐受性是一个复杂的环境信号与细胞内在机制的网络控制.对肿瘤环境中刺激DCs分化成DCreg的抑制/极化因子鉴定,有助于设计有效的肿瘤治疗疫苗和恢复DCreg功能,维持肿瘤患者的临床相关抗肿瘤免疫具有重要意义.
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树突状细胞与免疫负向调控
以往多数学者认为树突状细胞(dendritic cells,DC)具有激活免疫的功能,但是,近年来愈来愈多的实验证明,DC具有负相调节免疫的功能,其可通过诱导T细胞失能、使免疫反应偏移、诱导调节性T细胞形成及促使活化的T细胞凋亡等方式使机体达到免疫稳定,但同时DC这些特性又会被病原体和肿瘤所利用而达到免疫逃逸.以下综述了各种状态下的DC与免疫负向调控的关系、DC参与免疫负向调控的机制等方面的研究进展.
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调节性树突状细胞对小鼠急性移植物抗宿主病及急性白血病复发的保护作用
同种异基因骨髓移植是治疗白血病及遗传性疾病的有效途径.但是,移植物抗宿主病(GVHD,即由移植物中的淋巴细胞识别宿主抗原而致敏、增生分化,攻击受者靶组织的一种疾病)的发生是它的一个突出问题.在我们的临床治疗中,免疫抑制剂的应用及预先去除供者骨髓中的T细胞虽然在一定程度上减少了GVHD的发生,但同时一些严重的并发症如严重感染及移植物抗白血病的发生率上升.因此需要找到一条有效途径来控制GVHD及GVL的发生.
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调节性树突状细胞对脓毒症的调控效应及潜在问题
失控性炎症反应是严重脓毒症免疫功能紊乱的重要病理生理基础之一,控制烧(创)伤早期过度炎症反应已成为防止并发脓毒症和降低死亡率的关键.因此,对严重烧(创)伤后炎症因子及其受体过度表达进行负向调控,同时维持机体免疫反应平衡状态,已成为防治脓毒症免疫功能障碍的根本策略.
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调节性树突状细胞在直接识别和间接识别反应中的作用
探讨调节性树突状细胞(regulatory dendritic cell,rDC)在移植排斥反应中对T细胞直接识别和间接识别反应的作用.在TGF-β和IL-10的作用下,将小鼠骨髓来源的树突状细胞(D(C)培养成rDC,比较rDC和成熟DC在LPS刺激下表型、细胞因子和对同种异体T细胞的刺激活性,检测调节性DC在对受者小鼠的脾脏T细胞直接识别和间接识别的作用.rDC表达共刺激分子明显低于成熟DC,分泌高水平的IL-10,对同种异基因T细胞有明显的抑制作用.在体外中明显抑制了受者小鼠脾脏T细胞的直接和间接识别的反应性增殖.rDC具有明显的异基因抑制作用,对同种异体T细胞的直接识别和间接识别反应性增殖有抑制作用.
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调节性树突状细胞对白细胞介素-10缺陷小鼠结肠炎模型的治疗作用
目前认为克罗恩病(CD)的主要病理机制是黏膜反应性T细胞过度增生和活化.调节性树突状细胞(DCreg)对CD4+T细胞增殖具有强烈抑制作用.目的:探讨DCreg对病理改变与人类CD类似的白细胞介素(IL)-10缺陷小鼠结肠炎模型的治疗作用.方法:以小鼠内皮型脾脏基质细胞诱导CD117阳性骨髓来源造血前体细胞分化为DCreg,通过观察其对CD4+T细胞增殖的抑制作用进行质控.予IL-10基因敲除小鼠腹腔注射DCreg 2×106/只,每周采集血清测定IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,第8周取肠组织行组织病理学检查和IL-6、TNF-α水平测定.结果:经DCreg治疗后,62.5%(5/8)的小鼠结肠黏膜腺体轻度增生,未见明显免疫细胞浸润,37.5%(3/8)肠道黏膜组织结构接近正常;对照组小鼠结肠黏膜腺体增生明显,伴免疫细胞浸润和成纤维细胞增生.治疗组小鼠血清和结肠黏膜组织培养上清IL-6和TNF-α水平较对照组显著降低.结论:DCreg过继回输对缓解IL-10缺陷小鼠结肠炎具有明显疗效.
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调节性树突细胞与免疫负向调控
树突状细胞(dendritic cells,DCs)是具有强抗原提呈功能的专职抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC),由于它能高水平表达MHCⅡ类分子且高效率提呈抗原,有强大的激活CD8+、CTL及CD4+T辅助细胞的能力,被认为是机体免疫应答的主要启动者,在免疫应答的诱导中发挥主导作用.
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小鼠骨髓来源调节性树突状细胞的体外诱导分化及鉴定
目的 建立小鼠骨髓来源调节性树突状细胞(DCreg)体外诱导培养和扩增的方法,并进行生物学及功能鉴定.方法 取小鼠骨髓单个核细胞(BM-MNCs),用重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)及重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导分化,第6天细胞中含大量DCreg;取部分细胞加脂多糖(LPS),继续培养2 d(第8天)分化为成熟DC(mDC).观察培养过程中细胞形态变化,流式细胞术检测DCreg特异性表面分子CD11b和共刺激分子CD40、CD86.取小鼠脾脏分离的CD8+T细胞,随机分为3组;A、B组将细胞分别与DCreg、mDC以5:1、10:1、20:1混合培养4 d,C组细胞不处理.采用CFSE标记法检测CD8+T细胞增殖情况,Real-time PCR检测CD8+T细胞免疫功能分子穿孔素(Prf1)和颗粒酶B(GzmB)mRNA.结果 新分离的BM-MNCs呈圆形,体积较小;诱导第6天细胞集落数量增多,体积增大,细胞表面突起增多,CD11b阳性细胞比例达96.1%±2.7%.与mDC相比,DCreg中CD40、CD86表达阳性率降低(P均<0.05).与B组比较,A组细胞增殖率降低(P均<0.05);与B、C组比较,A组Prf1、GzmB mRNA表达量降低(P均<0.05),与C组比较,B组GzmB mRNA表达量升高(P均<0.05).结论 rmGM-CSF联合rmIL-4可成功诱导小鼠BM-MNCs向DCreg分化,且纯度高,并具有免疫抑制功能.
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银耳多糖干预后脓毒症小鼠脾脏DCregs对CD4＋T细胞分泌功能的影响
目的：观察银耳多糖（ TPS）干预后脓毒症小鼠脾脏调节性树突状细胞（ DCregs）对CD4＋T细胞分泌功能的影响。方法雄性BALB／c小鼠105只，随机分为5个组：对照组（5只）不制备脓毒症模型；TPS1组、TPS2组、TPS3组、模型组各25只，均制作脓毒症模型；TPS1、2、3组分别腹腔注射50、100、200 mg／kg TPS。处死小鼠，收集脾脏样本，分选并培养DCregs和T细胞。检测CD4＋T细胞、DCregs培养液上清中的IL-10及CD4＋T细胞培养液上清中的IFN-γ和IL-4。另取对照组正常CD4＋T细胞，分为4个组：A组单独培养，B组与模型组DCregs共培养，C组与TPS3组DCregs共培养，D组与TPS3组DCregs、IL-10抗体共培养；培养24 h后检测CD4＋T细胞，检测各组培养液上清IFN-γ、IL-4。结果 TPS各组烫伤后3 d IL-10水平低于模型组，其中TPS2、3组低于TPS1组（P均＜0．05）。TPS各组CD4＋T比例高于模型组，且呈剂量依赖性（P均＜0．05）。模型组CD4＋T细胞培养液上清中IL-4水平增高、IFN-γ水平降低，与对照组相比，P均＜0．05；TPS各组CD4＋T细胞培养液上清中IL-4、IFN-γ水平与模型组相比，P均＜0．05。与A、C、D组相比，B组CD4＋T细胞比例降低，IL-4水平增高，而IFN-γ水平下调（ P均＜0．05）。结论脓毒症状态下小鼠脾脏DCregs可抑制CD4＋T细胞的分泌功能；给予TPS干预后，DCregs分泌IL-10减少，其对CD4＋T细胞分泌功能的抑制作用减弱。
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调节性树突状细胞与移植免疫耐受的研究进展
树突状细胞(DC)具有其他细胞所没有的形态特点和运动功能,体内分布十分广泛,是专职的骨髓来源抗原提呈细胞(APC).它们是体内惟一的既能迅速启动免疫应答又能有效刺激再次应答的APC.新的研究显示,DC是一群异源性、异质性的细胞群体,不但能激活初始T淋巴细胞,促进免疫应答,而且在诱导免疫耐受方面也具有重要作用[1].
