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HCMV感染对宫颈癌细胞Siha发生上皮—间质转化的作用
目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对宫颈癌细胞Siha发生上皮—间质转化的作用及意义. 方法 实验组用HCMV AD169(MOI=5)和5 ng/ml TGF-[31作用宫颈癌Siha细胞,同时将仅TGF-β1作用的Siha细胞作为对照组,分别在0、24、48、72 h观察细胞形态的变化,应用RT-PCR检测E-钙粘蛋白和波形蛋白的转录水平,采用Western blot检测E-钙粘蛋白、波形蛋白和MMP-2的表达水平. 结果 实验组细胞于48 h发生细胞形态学的变化,早于对照组的72 h;实验组上皮细胞标记物E-钙粘蛋白的转录和表达水平较对照组显著下调(P＜0.01),间质细胞标记物波形蛋白的转录和表达较对照组显著上调(P＜0.01)且表达提前,MMP-2的表达较对照组显著上调(P＜0.01)且表达提前.结论 HCMV感染可促进宫颈癌细胞Siha发生化上皮—间质转化.
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MiR-152在膀胱癌中的表达以及对ERBB3/AKT2信号通路的调节作用
[目的]探讨miR-152对ERBB3/Akt信号通路的靶向调控作用以及对膀胱癌细胞UM-UC-3增殖、侵袭和迁移活性的影响.[方法]收集2016年7月至2018年6月接受手术治疗的56例膀胱癌患者的肿瘤组织及相应的癌旁组织,提取总RNA,检测miR-152表达水平.体外培养UM-UC-3细胞,转染miR-152 mimics(模拟物组),同时设置空白对照组(CTL)和空转染组(NC),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-152的表达.采用MTT法、划痕实验和transwell小室侵袭实验观察CTL组、NC组和模拟物组细胞增殖、迁移和侵袭能力.采用双荧光素酶报告基因方法验证ERBB3与miR-152的关系.采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测UM-UC-3细胞中Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-myc表达量.[结果]MiR-152在肿瘤组织中的表达量明显低于癌旁组织(P＜0.05).与膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1相比,miR-152在膀胱癌细胞T24、UM-UC-3和J82中的表达量明显降低(P＜0.05),其中在UM-UC-3细胞中表达量低.经qRT-PCR法检测,模拟物组UM-UC-3细胞miR-152的表达量明显低于CTL组和NC组细胞(P＜0.05).模拟物组UM-UC-3细胞的增殖率、迁移活性以及划痕愈合率均明显低于CTL组和NC组细胞(P＜0.05).经双荧光素酶基因报告分析,ERBB3是miR-152的下游靶基因.模拟物组UM-UC-3细胞Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-mycmRNA和蛋白表达水平均低于CTL组和NC组细胞(P＜0.05).且miR-152表达量与ERBB3呈负相关性(r=-0.875,P＜0.05).[结论]上调miR-152可抑制ERBB3/Akt/c-myc和ERBB3/Akt/Snail信号通路的异常激活,逆转膀胱癌UM-UC-3细胞上皮一间质转化,从而降低膀胱癌生长、侵袭和迁移的风险.
关键词： 膀胱癌 miR-152 ERBB3/Akt信号通路 上皮—间质转化 侵袭 -
上皮—间质转化在恶性肿瘤中发生机制的研究进展
研究表明肿瘤细胞发生上皮—间质转化(EMT)时所涉及的分子机制相当复杂,涉及到的信号通路在转录、翻译和翻译后水平均发挥调控作用.全文就EMT在恶性肿瘤中发生机制的研究进展作一综述.
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ZNF488基因对鼻咽癌细胞HONE1生物学行为的影响
[目的]探讨ZNF488基因对鼻咽癌细胞HONE1生物学行为的影响.[方法]构建携带空载体、人ZNF488基因的逆转录病毒质粒pMSCV和pMSCV-ZNF488,以磷酸钙法转染293FT细胞并收集病毒液,感染鼻咽癌细胞株HONE1,经嘌呤霉素筛选及Western Blot鉴定,建立稳定表达ZNF488的HONE 1-pMSCV-ZNF488和空载体HONE 1-pMSCV的细胞株.应用噻唑盐(MTT)法、平板克隆形成实验检测ZNF488过表达对HONE1细胞生长增殖的影响,同时应用流式细胞术检测ZNF488对细胞周期增殖指数的影响.划痕实验及Transwell体外侵袭实验观察ZNF488对HONE1迁移侵袭能力的影响.Western Blot检测上皮—间质转化(EMT)相关蛋白及抑癌基因PTEN的表达情况.[结果]成功建立稳定表达ZNF488的HONE1-pMSCV-ZNF488细胞株,MTT法及平板克隆形成实验结果显示,与空载体组HONE1-pMSCV细胞相比,HONE1-pMSCV-ZNF488细胞增殖及克隆形成能力均增强.流式细胞术显示过表达ZNF488细胞S期百分比较空载体组高,增殖指数增加.划痕实验、Transwell体外侵袭实验示ZNF488能够显著增加细胞的迁移、侵袭能力.Western Blot检测发现上皮标志E-Cadherin、α-Catenin表达降低,间质性标志Fibronectin、Vimentin表达升高,同时抑癌因子PTEN表达下降.[结论]过表达ZNF488可通过诱导鼻咽癌细胞HONE1发生上皮间质转变及下调抑癌基因PTEN,促进细胞的增殖及迁移侵袭能力.
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上皮—间质转化与肿瘤侵袭转移关系的研究进展
上皮—间质转化(EMT)是指上皮细胞在特定的生理和病理情况下转化成有迁移能力的间质细胞的现象.近年来研究发现EMT与肿瘤的侵袭转移密切相关.生长因子、转录因子、microRNA等都可以参与各种信号通路来诱导或调控细胞发生EMT.本文就EMT现象及其与肿瘤侵袭转移的关系进行综述.
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YB-1调控上皮间质转化影响肿瘤的侵袭转移研究
上皮间质转化(EMT)是上皮细胞向间质细胞转化的现象,在肿瘤的发生发展尤其在肿瘤的侵袭转移方面发挥了重要作用.EMT的发生与多种因子相关,近研究表明,YB-1通过作用于EMT相关转录因子,诱导细胞通路改变,以实现对EMT的调控.因此对YB-1调控EMT机制的研究,为发展新的治疗策略提供了重要信息.全文就YB-1在EMT发生中的作用及与肿瘤侵袭转移的关系等作一综述.
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宫颈病变组织中Vimentin、P16INK4A、Smad4的定位、表达及其在EMT中的作用
目的 观察Vimentin、P16INK4A和Smad4在宫颈癌及前期病变中的定位与表达水平,探讨其对宫颈癌细胞上皮—间质转化(EMT)的影响和可能机制.方法 免疫组织化学染色方法检测30例慢性子宫颈炎、30例低级别宫颈上皮内瘤变(CIN)、30例高级别CIN和30例宫颈癌中Vimentin、P16INK4A和Smad4的表达水平和定位.结果 Vimentin、P16INK4A和Smad4在各宫颈病变组织中呈不同程度阳性表达,在细胞质和细胞核均可表达.宫颈癌组织Vimentin 表达水平较慢性子宫颈炎、低级别CIN、高级别CIN高(P均＜0.01).慢性子宫颈炎组织中P16INK4A阴性表达,在CIN和宫颈癌组织中表达水平升高(P均＜0.01).慢性子宫颈炎组织中Smad4在细胞核与细胞质均高表达,低级别CIN、高级别CIN和宫颈癌组织中Smad4细胞核表达水平降低(P均＜0.01).Spearman相关分析显示,120例宫颈病变组织中Smad4核表达与P16ININKA核质表达均呈负相关(r分别为-0.274、-0.387,P均＜0.01),Smad4核表达与Vimentin核表达亦呈负相关(r=-0.209,P＜0.05),P16INK4A核质表达与Vimentin核表达均呈正相关(r分别为0.334、0.443,P均＜0.01).宫颈癌中Vimentin、P16INK4A和Smad4无论细胞核表达或细胞质表达均与宫颈癌的分化和年龄无相关关系(P均＞0.05).结论 Vimentin、P16INK4A和Smad4在各宫颈病变组织细胞质和细胞核中呈不同程度阳性表达.Vimentin核表达是反映宫颈癌细胞EMT的良好指标,P16INK4A核表达和Smad4核表达与宫颈癌细胞EMT密切相关.
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RNA干扰沉默HIF-1α基因对舌癌Tca8113细胞侵袭和迁移的影响
目的 观察RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)基因对人舌癌细胞Tca8113侵袭和迁移的影响.方法 将3个shRNA序列质粒导入pGCsi-H1/Hygro/GFPshRNA质粒表达载体,并将重组质粒经脂质体介导转染人舌癌细胞Tca8113(siHIF-1α组),转染阴性对照质粒的细胞作为空载组.半定量RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α的mRNA及蛋白,细胞侵袭实验和划痕实验检测Tca8113的侵袭和迁移能力,同时采用Western blot法检测其上皮-间质转化(EMT)相关标志蛋白和黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK(P-FAK).结果 测序证实成功构建了HIF-1α shRNA重组质粒(分别为sh1、sh2、sh3),将sh3,转染Tca8113后进行低氧培养,HIF-1α基因表达显著被抑制.与空载组相比,转染sh3的siHIF-1α组穿透Matrigel胶的细胞数明显减少,且迁移能力也显著下降,两组相比,P均＜0.05.与对照组(未转染质粒的Tca8113)相比,siHIF-1α组EMT相关标志蛋白和p-FAK蛋白表达下降,两组相比,P均＜0.05.结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因能有效抑制舌癌细胞的侵袭和迁移,在一定程度上可以逆转舌癌细胞的恶性表型.
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非诺贝特联合顺铂对A549细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响
目的 探索过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特联合顺铂对人肺癌A459细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响.方法 在体外分别采取单用非诺贝特,顺铂及两者联合干预A549细胞48h后,MTT比色法检测非诺贝特联合顺铂对A549细胞增殖的影响,细胞划痕实验和侵袭小室法检测对A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR和Westem blot实验检测上皮—间质转化相关因子E-cadherin的表达变化.结果 与阴性对照组相比,非诺贝特和顺铂单用与联合均能抑制A549细胞的增殖,减弱A549细胞的迁移侵袭运动能力,同时上调E-cadherin mRNA及蛋白水平的表达,其联合组的效果优于单用组(P＜0.05).结论 非诺贝特联用顺铂能够抑制A549细胞的生长,降低A549细胞的迁移侵袭运动能力,阻止A549细胞发生上皮—间质转化,其机制可能与增加E-cadherin的水平相关.
关键词： 非诺贝特 顺铂 肺肿瘤 上皮—间质转化 E-cadherin -
ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1介导的A549细胞上皮—间质转化的抑制作用
目的 探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y-27632对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的A549细胞上皮一间质转化(EMT)的抑制作用.方法 将常规培养并传代的非小细胞肺癌A549细胞分为3组,分别为对照组、TGF-β1组(用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT)、Y-27632组(对发生EMT的A549细胞行Y-27632干预).采用MTr法检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;免疫细胞化学染色法检测波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(ot-SMA)表达;Western blot法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-SMA、ROCK、血清应答因子(SRF)、心肌相关转录因子(MATF-A)表达.结果 与对照组比较,TGF-β1组能诱导A549细胞发生EMT,伴有迁移能力提高、E-钙黏蛋白表达下调,以及波形蛋白、α-SMA、ROCK、SRF、MATF-A表达上调(P均＜0.05);Y-27632组能显著抑制上述变化(P均＜0.05).结论 Y-27632能通过阻断ROCK蛋白表达,抑制TGF-β1介导的A549细胞发生EMT,并抑制其迁移能力.
关键词： 肺肿瘤 Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 转化生长因子 上皮—间质转化 -
槐耳清膏对人结肠癌HCT116干细胞增殖及迁移的影响
[目的]观察槐耳清膏对人结肠癌HCT116干细胞增殖及迁移的影响,探讨其可能的相关分子机制.[方法]采用无血清培养基培养刺激人结肠癌HCT116原代细胞向干细胞转化的方法来获取人结肠癌HCT116干细胞.不同质量浓度(0、0.5、8、64 g·L-1)槐耳清膏作用HCT116干细胞72 h后,采用CCK-8法、Transwell侵袭实验、流式细胞术及蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测HCT116干细胞增殖、侵袭能力的变化及上皮—间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白E-cadherin和Hippo信号通路核心蛋白Yes相关蛋白(YAP)的表达情况.[结果]槐耳清膏可明显升高HCT116干细胞增殖抑制率,减少迁移细胞数,上调EMT过程中E-cadherin蛋白表达率,并且能够下调Hippo信号通路YAP蛋白的表达水平,且具有剂量依赖性.[结论]槐耳清膏可抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭能力,其作用机制可能与抑制EMT进展和降低Hippo信号通路中核心蛋白YAP的表达有关.
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波形蛋白在结直肠腺癌中的表达及其临床意义
目的:探讨上皮一间质转化(EMT)标志物波形蛋白(Vimentin)在原发性结直肠腺癌中的表达及其临床意义.方法:利用免疫组化染色方法检测116例经病理证实的结直肠腺癌及其相应的癌旁组织中Vimentin的表达,并对Vimentin的表达水平与患者的临床特征进行相关性分析.结果:在结直肠腺癌组织中,Vimentin的阳性表达率为25.0％(29/116),远高于相应的癌旁组织1.7％(2/116)(P＜0.05);患者不同的性别、年龄、肿瘤的分化程度Vimentin的阳性表达率比较差异无统计学意义(P＞0.05),不同肿瘤的TNM分期的Vimentin的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.05).结论:Vimentin与肿瘤的侵袭与转移密切相关,检测Vimentin的表达可作为重要的生物学指标来预测结直肠腺癌的转移和预后.
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肺癌多维度检测方法的研究进展
寻找一种精准、方便,能够动态监测肿瘤细胞发生、发展的检测方法,成为目前全球肺癌研究领域关注的热点.同时,人们也正在探索更多非侵入性的方法来检测肺癌,其中包括对支气管、口腔或鼻腔样本中肺癌标志物上皮—间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的检测,对血清中基础小分子核糖核酸(microRNA,miRNA)及循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的检测,并希望以上方法可在鉴别癌症患者和非癌症患者中发挥作用.本研究就相关内容作一综述,为基础研究和临床工作提供一些思路.
