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血管活性肠肽对MPTP亚急性帕金森病模型小鼠突触的影响
目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠模型突触及其行为学的影响.方法 雄性C57BL/6 J小鼠30只,随机分为生理盐水(NS)组、MPTP组、MPTP+ VIP组.利用Tru Scan系统测定小鼠的行为学变化;免疫组织化学染色法检测黑质和纹状体区酪氨酸羟化酶(TH)的表达及纹状体区突触小泡膜蛋白2(VAMP2)和突触素1(SYN1)的表达变化;运用免疫印迹法检测VAMP2和SYN1的表达变化;并通过透射电子显微镜观察黑质区突触的结构改变.结果 行为学结果统计学分析,MPTP组小鼠的垂直运动距离比对照组明显减少,而给予VIP的小鼠明显高于MPTP组小鼠.MPTP组TH、VAMP2和SYN1表达均明显少于NS组,而MPTP+ VIP组显著高于MPTP组.透射电子显微镜结果显示,NS组神经突触结构完整;模型组神经突触数量少,突触间隙不清,突触前成分的线粒体出现髓样变,并且突触小泡数量减少;MPTP+VIP组神经突触结构基本正常.结论 VIP可使MPTP模型小鼠VAMP2和SYN1的表达上调,减少突触结构的损伤,保护黑质纹状体系统TH的表达,从而改善其运动状态.
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树鼩2型糖尿病加剧缺血性脑损伤的可能机制
目的 建立树鼩2型糖尿病(T2DM) 合并脑缺血模型,探讨代谢异常加剧缺血性脑损伤的可能机制.方法 将36只健康成年树鼩随机分为4组,即对照组、脑缺血组、T2DM组及T2DM + 脑缺血组(每组n =9).采用高脂饲养联合链脲佐菌素(STZ) 注射建立实验性糖尿病模型,通过光化学反应诱导树鼩局部血栓形成,以临床症状突出的缺血后24 h作为观察的时间点,通过血清生化指标的检测了解机体代谢状态,采用2,3,5-氯化三苯基甲氮唑(TTC) 、HE染色及透射电子显微镜观察超微结构对缺血性脑损伤进行评价.结果 树鼩T2DM和T2DM合并脑缺血组树鼩的体重有所降低[(120.29 ± 13. 82) g],但差异无统计学意义,而血糖(FBG) 、总胆固醇(TC) 、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 及甘油三酯(TG) 明显升高,分别为(26. 75 ± 10.60) mmol /L、(7. 40 ± 3. 26) mmol /L、(2. 93 ± 0.70) mmol /L、(1.93 ± 0.63) mmol /L(P＜0.05) 和(32. 29 ± 6. 08) mmol /L(7. 80 ± 3. 41) mmol /L、(3. 06 ± 0.95) mmol /L和(1.73 ±0.29) mmol /L,(P＜0.01);血清C-反应蛋白(CRP) 水平明显升高[(1.43 ± 0.53) mg /L,P＜0.01].糖尿病树鼩合并脑缺血时上述指标的改变更为明显,神经元受损及脑梗死面积明显增加[(19. 56 ± 1.25) ％,P＜0.01].结论 T2DM树鼩代谢异常可加剧缺血性脑损伤,其机制可能与高血糖及CRP协同作用引起的炎症反应有关.
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微管相关蛋白1轻链3及 Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达
目的：观察自噬相关蛋白---微管相关蛋白1轻链3（ LC-3）、Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达，从细胞自噬角度探讨硅沉着病形成的分子机制。方法50只成年雄性SD大鼠随机分为2组（ n＝25）：对照组和硅沉着病模型组，每组再分5个时相组。采用非暴露气管灌注二氧化硅（ SiO2）粉尘混悬液法（50g／L）建立大鼠硅沉着病模型。分别于造模后1、3、7、14及28 d分批处死5只大鼠，进行原位支气管肺泡灌洗，获取肺泡巨噬细胞，进行培养纯化和富集后用于后续研究。 HE染色及透射电子显微镜观察肺泡巨噬细胞形态学改变；免疫细胞化学法检测LC-3、Beclin-1的表达及分布；免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果与对照组相比模型组肺泡巨噬细胞体积较大，胞质丰富，部分细胞内可见硅沉着吞噬颗粒，电镜下可见自噬体形成；模型组LC-3、Beclin-1在各时间点的表达较对照组均增多（P＜0．05），1 d即开始增多，随着时间的延长表达逐渐增多，至14 d时达高峰（P＜0．05），28d时回落，但仍高于对照组的表达。结论在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中有自噬的激活，肺泡巨噬细胞自噬参与了大鼠硅沉着病的病理进程。
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甲磺酸伊马替尼调控Telocytes对下颌下腺唾液分泌功能的影响
目的 探讨甲磺酸伊马替尼调控Telocytes(TCs)对下颌下腺唾液分泌功能的影响.方法 采用免疫荧光染色技术对TCs免疫标记物(C-kit/CD 117、CD34)进行双标记染色,进而对小鼠下颌下腺内TCs进行定位.采用透射电子显微镜(TEM)显示小鼠下颌下腺内TCs的超微结构及其与周围细胞之间的关系.建立甲磺酸伊马替尼干预模型,实验小鼠分5组:正常组(共24只),用药1周、2周、3周、4周组(共24只),药物以80 mg/(kg·d)每日灌胃,免疫荧光显示,用药前后下颌下腺内TCs的变化;免疫印迹法(Western blotting)观察用药前后CD117、CD34及下颌下腺内α唾液淀粉酶(α-Amy)蛋白表达水平的变化.结果 免疫荧光染色显示,TCs广泛分布于下颌下腺结缔组织内,胞体较小有突起(Tps),Tps相互连接成网络样结构,包绕着腺泡及导管,随甲磺酸伊马替尼干预时间延长,用药组Tps构成的网络样结构变稀疏.超微结构显示,Tps呈念珠状,与邻近组织紧密相连,周围可见胞外囊泡.随用药时间的增加Tps减少,TCs胞内囊泡增多,胞内细胞器减少.免疫印迹法显示,用药后CD117、CD34、α-Amy蛋白表达水平相应减少且互为正相关.结论 小鼠下颌下腺内存在TCs,甲磺酸伊马替尼对TCs的干预可能会通过影响TCs的结构、免疫表型和细胞间通讯降低下颌下腺唾液分泌功能.
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铜对斑马鱼鳃的损伤及其作用机制
目的 探讨铜对斑马鱼鳃的生物毒性作用及其机制.方法 设置0.05 mg /L、0.1 mg /L、0.2 mg /L 3个铜离子暴露浓度和1个对照组,研究铜离子对斑马鱼鳃组织显微和超微结构,抗氧化防御系统超氧化物歧化酶(SOD) 活性和丙二醛(MDA) 含量及免疫相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α) 、白细胞介素-6(IL-6) 、白细胞介素-1β(IL-1β) 水平的影响.结果 铜离子暴露组斑马鱼鳃均出现不同程度的损伤,中低浓度组以防御损伤为主,高浓度组以直接损伤为主.光学显微镜下可看到上皮细胞肿胀、脱落,表面大量黏液,鳃小片基部细胞增生甚至融合;透射电子显微镜下可观察到暴露组线粒体、粗面内质网等细胞器肿胀,线粒体嵴崩落或消失等细胞胀亡形态特征;SOD活性和MDA含量随铜离子浓度增加和暴露时间的延长出现不同程度的上升趋势,铜离子暴露对斑马鱼SOD、 MDA为诱导效应;与对照组相比,不同时间、不同浓度重金属铜处理后TNF-α、IL-6、IL-1β 水平出现不同程度的上升趋势.结论 重金属铜对斑马鱼鳃组织结构和抗氧化系统有明显的损伤,能够诱导免疫炎症反应.
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沉默二氢叶酸还原酶基因对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响
背景与目的：二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase，DHFR)在卵巢上皮癌铂类耐药细胞中高表达。该研究旨在探讨DHFR基因沉默对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响，为卵巢癌铂类耐药的治疗奠定基础。方法：设计DHFR基因靶向的发夹状siRNA，筛选出佳siRNA沉默片段，构建携带有目的基因的慢病毒载体细胞即转染组(DHFR-pGCSIL-SKOV3细胞)及阴性对照组细胞(pGCSIL-SKOV3细胞)。采用流式细胞仪检测3组细胞在不同的顺铂质量浓度(2.5、5.0、10.0和20.0μg/mL)下不同时间段(24、48及72 h)的凋亡情况以及IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)的周期变化；采用高效液相色谱法检测不同顺铂质量浓度(2.5、5.0和7.5μg/mL)不同时间段(24和48 h)药物作用后3组细胞内的顺铂浓度。采用透射电镜观察IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)3种细胞的超微结构变化。结果：将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGCSIL/GFP载体，测序结果正确。转染SKOV3细胞后，蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定干扰效果。在给药24、48和72 h后，DHFR-pGCSIL-SKOV3、pGCSIL-SKOV3及SKOV3三组细胞的凋亡率随着顺铂质量浓度(2.5、5.0、10.0和20.0μg/mL)的上升而升高， DHFR-pGCSIL-SKOV3细胞给药48和72 h后的凋亡率明显高于pGCSIL-SKOV3及SKOV3细胞，差异有统计学意义(P<0.05)。3组细胞在IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)给药24和48 h后，转染组G0/G1期细胞比例较阴性及空白对照组明显增多，G2/M、S期则反之；而给药72 h后，3组细胞以G2/M及S期为主，转染组低于阴性及空白对照组。采用高效液相法检测细胞内顺铂质量浓度时，转染组在2.5和5.0μg/mL顺铂质量浓度给药24和48 h后，其细胞内顺铂浓度均明显高于对照组。转染组在7.5μg/mL顺铂质量浓度给药24 h后，其细胞内顺铂浓度均明显低于对照组细胞，在48 h后却又高于对照组，差异有统计学意义(P=0.034，P=0.014)。未给药时，转染组细胞的微丝明显多于对照组，线粒体亦改变明显。IC50(4.4μg/mL)给药24和48 h后3组细胞均未见微丝；而给药72 h后微丝明显增多，且排列紊乱。结论：成功构建携带DHFR基因的pGCSIL干扰慢病毒载体的卵巢癌细胞。通过对DHFR下调后耐药性能研究得知，DHFR的下调与经过铂类药物作用的体外卵巢癌细胞的药物耐药性有一定的联系，卵巢癌细胞中下调DHFR基因可以考虑作为多药耐药的逆转机制。
关键词： pGCSIL/GFP载体 二氢叶酸还原酶 高效液相色谱法 凋亡 透射电子显微术 -
大鼠硒性白内障晶状体的超微结构
目的: 观察大鼠硒性白内障晶状体的超微结构. 方法: 出生8～10 d的SD大鼠连续5次皮下注射亚硒酸钠生理盐水(每日2 mmol*L-1),2只正常和2只白内障的晶状体按透射电镜标本制备成超薄切片,在电镜下观察细胞的超微结构. 结果: 硒性白内障大鼠的晶状体在电镜下细胞间连接破坏,胞质密度降低,胞质轻度液化,线粒体囊状变性,胞质内出现大量数目不等、分布不均匀的高密度球形结构. 结论: 这种高密度球形结构的出现可能参与硒性白内障的形成.
