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钙敏感受体在缺氧/复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用
目的 探讨钙敏感受体(CaSR)对缺氧/复氧(A/R)所诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 原代培养乳鼠心室肌细胞缺氧2 h/复氧24 h,建立A/R心肌细胞损伤模型.心肌细胞随机分为三组:对照组、A/R组和CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)组.四氮唑嗅盐法(MTT)检测细胞的存活率,原位缺口末端标记法(TUNEL)分析细胞凋亡率,蛋白印迹法检测CaSR、半胱氨酸天冬酶(caspase)-3、9和细胞色素c(Cytc)蛋白的表达.结果 TUNEL染色显示A/R后心肌细胞凋亡为(17±3)%,与对照相比,心肌细胞凋亡明显增加,CaSR表达也增加.CaSR激动剂GdCl3使心肌细胞凋亡进一步增加至(28±4)%,MTT检测表明心肌细胞存活率仅为(51.2±6.8)%;CaSR、caspase-3、caspase-9和Cytc表达进一步上调,明显高于A/R组.结论 CaSR通过线粒体Cytc-caspase-3途径参与了A/R所诱导的心肌细胞凋亡.
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实验性糖尿病大鼠心肌钙敏感受体表达和心功能的改变
目的 观察实验性糖尿病大鼠心肌钙敏感受体(CaSR)蛋白表达及心功能变化,探讨CaSR在DCM发生发展中的作用.方法 SD大鼠随机分为:正常对照组(n=10)和高糖高脂饲喂组,4 w后分为糖尿病4 w组(n=10)、8 w组(n=10).采用高糖高脂饮食加30 g/kg链尿佐菌素尾静脉注射造成Ⅱ型糖尿病大鼠模型,再继续高糖高脂喂养8 w,建立大鼠糖尿病心肌病模型.取血测定乳酸脱氢酶、超氧化物岐化酶的活性和丙二醛的含量,在透射电镜下观察心脏超微结构和导管法测量左室内压大上升和下降速率评价心功能,Western blot法和免疫组织化学法检测心肌CaSR蛋白表达水平.结果 与对照组相比,糖尿病组大鼠出现了多饮和多食,血糖和血清胰岛素、甘油三酯、胆固醇均明显升高.随糖尿病时间延长出现心肌结构变化和左心室泵功能障碍(±dp/dtmax降低)加重;糖尿病4周组心肌组织CaSR蛋白表达轻度增加(P＞0.05),8 w组明显降低(P＜0.05).结论在糖尿病诱导的大鼠心肌损伤时,CaSR蛋白表达降低,参与了糖尿病大鼠心脏泵血功能障碍发生.
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钙敏感受体参与黄芪甲苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨黄芪甲苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制.方法 48只SD大鼠随机分为假手术组、缺血组、黄芪甲苷低剂量组(20 mg·kg-1)、黄芪甲苷中剂量组(40 mg·kg-1)、黄芪甲苷高剂量组(80mg·kg-1)和黄芪甲苷(80 mg· kg-)+ calindol组.采用冠状动脉结扎法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色观察心肌梗死面积;TUNEL染色评价心肌细胞凋亡;酶联免疫吸附法测定血清中CK-MB和cTnI含量;免疫组化法测定钙敏感受体(CaSR)表达,电泳法测定bcl-2,bax蛋白表达.结果 黄芪甲苷(40,80mg·kg-1)可不同程度的降低心肌梗死面积,抑制血清CK-MB和cTnI的释放,减轻心肌细胞凋亡,降低心肌组织CaSR蛋白表达,抑制bax蛋白表达,增加bcl-2蛋白表达.进一步研究显示,黄芪甲苷对心肌缺血再灌注损伤的这种保护作用可被CaSR激动剂calindol部分抑制.结论 黄芪甲苷对缺血心肌再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能通过下调CaSR通路,抑制细胞凋亡有关.
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西那卡塞在慢性肾脏病所致甲状旁腺功能亢进中的临床应用进展
20年前人们发现了钙敏感受体（CaSR），在随后的时间里围绕调节CaSR活性的药物有了快速的发展，包括CaSR激动剂和 CaSR抑制剂。CaSR激动剂主要用于治疗原发性和继发性甲状旁腺功能亢进，而 CaSR 抑制剂的主要用于骨质疏松的治疗。本文主要介绍CaSR及CaSR的Ⅱ型别构激动剂西那卡塞的临床应用进展，同时对西那卡塞及维生素D及其衍生物的临床应用比较展开讨论。
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钙敏感受体对内皮祖细胞数量及功能的影响
目的：观察钙敏感受体（ CaSR）对人外周血内皮祖细胞（ EPCs）数量及功能的影响。方法培养并鉴定EPCs；RT-PCR和 Western 印迹检测EPCs中CaSR的表达情况；MTT法观察CaSR对EPCs增殖能力的影响；Tube形成和迁移实验评价CaSR对EPCs血管新生能力和迁移能力的影响；Western印迹检测CaSR对EPCs中血管内皮生长因子（ VEGF）蛋白表达的影响。结果 RT-PCR和Western 印迹结果显示在EPCs中有CaSR的表达；MTT法、Tube形成和迁移实验检测结果显示与正常对照组相比较，CaSR激动剂组EPCs增殖、迁移能力和血管形成能力明显增强（P＜0.05），而CaSR抑制剂组EPCs增殖、迁移能力和血管形成能力明显降低（ P＜0.05）；Western 印迹检测发现与正常对照组相比较， CaSR 激动剂组 VEGF 和CaSR表达明显增强，而CaSR抑制剂组VEGF和CaSR表达明显降低。结论 EPCs中有CaSR的表达，并且CaSR可以影响EPCs的数量、迁徙和血管形成能力。
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钙敏感受体在癫痫大鼠发作中的表达和凋亡通路的变化
目的 观察钙敏感受体(CaSR)在癫痫大鼠发作中的表达和凋亡通路的变化.方法 采用连续28d亚惊厥剂量的戊四氮pentetrazole(PTZ 35 mg/kg)腹腔注射制备大鼠癫痫模型.Wistar大鼠随机分为2组:正常对照组(control group);癫痫组(epilepsy group),癫痫模型组用PTZ(35 mg/kg)腹腔注射,每天1次.采用Westernblotting分别观察CaSR、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达;TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况;光镜观察海马神经元尼氏染色形态学结构变化;紫外分光法检测髓过氧化物酶(MPO)和黄嘌呤氧化酶(XOD).结果 与正常组比较,癫痫组XOD、MPO的含量明显增高,细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均达高峰,同时Bcl-2表达减少,海马神经元超微结构损伤严重.结论 CaSR表达增多可能参与了大鼠癫痫的发生,氧化应激和凋亡可能参与癫痫的发生.
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花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠肌肉组织中CaSR基因、蛋白表达及AKT活性的影响
目的:通过观察花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠肌肉组织中钙敏感受体(CaSR)基因、蛋白表达及AKT活性的影响,探究花旗泽仁治疗胰岛素抵抗的作用机制.方法:取雄性Wistar大鼠持续灌胃脂肪乳、腹腔注射链脲佐菌素的方式复制2型糖尿病胰岛素抵抗模型.将造模成功的胰岛素抵抗大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、花旗泽仁组.花旗泽仁组给予花旗泽仁水煎液,阳性对照组给予罗格列酮药液.给药结束后,分别检测各组大鼠空腹血糖(FBG)及空腹血清胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI),并且取大鼠肌肉组织,采用qRT-PCR和Western blot技术检测钙敏感受体CaSRmRNA、CaSR蛋白和磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平.结果:胰岛素抵抗大鼠模型被成功建立.CaSR mRNA、CaSR蛋白表达水平明显降低(P ＜0.001),磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白含量明显下降(P ＜0.001,P＜0.01);花旗泽仁组与模型组比较,FBG及HNS水平明显降低(P＜0.01),ISI显著升高(P＜0.01),CaSR mRNA、CaSR蛋白和磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平均明显增加(P＜0.01,P＜0.05).结论:花旗泽仁可能通过上调CaSR表达水平,上调与胰岛素抵抗关系密切的PI3 K/AKT信号通路中的AKT蛋白(Ser473、Thr308位点)磷酸化水平,从而改善胰岛素抵抗.
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花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠肝脏CaSR mRNA、蛋白表达及AKT活性的影响
目的:观察花旗泽仁对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝脏组织中钙敏感受体(CaSR) mRNA、蛋白表达及蛋白激酶B(AKT)活性的影响,探讨花旗泽仁改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠用复合脂肪乳连续灌胃4周配合小剂量注射链脲佐菌素的方法复制2型糖尿病胰岛素抵抗模型,将大鼠随机分为花旗泽仁组、阳性对照组、模型对照组、空白对照组.检测空腹血糖(FBG)及空腹血清胰岛素(FINS),并计算胰岛素敏感指数(ISI);采用qRT-PCR、Western blot技术检测CaSR mRNA、CaSR蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,模型对照组组大鼠FBG及FINS水平明显增高,ISI显著降低;与模型对照组相比,花旗泽仁组和阳性对照组大鼠FBG和FINS水平明显降低,ISI明显升高;与空白对照组比较,模型对照组大鼠肝脏组织中CaSR mRNA表达水平明显降低;与模型对照组相比,花旗泽仁组和阳性对照组大鼠肝脏组织中CaSR mRNA表达水平显著增高;与空白对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中CaSR蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达量均显著降低;与模型对照组相比,花旗泽仁组和阳性对照组大鼠肝脏组织中CaSR 蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达量均明显增加.结论:花旗泽仁可能通过调节CaSR基因及蛋白表达,改善2型糖尿病胰岛素抵抗.
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钙敏感受体在中枢神经系统中的研究进展
钙敏感受体(CaSR)是G蛋白偶联的受体C家族成员之一,对机体维持钙稳态、保持正常生理功能起到关键作用.文章对CaSR的生物学特征、功能、信号转导及相关疾病进行了概述.重点阐述了CaSR在中枢神经系统的研究进展,其中包括脑内分布、功能以及与癫痫、阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病关系,后对其在中枢神经系统的研究前景进行了展望.
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钙敏感受体(CaSR)基因986、990多态性与尿石症的相关性研究
目的:探讨钙敏感受体(CaSR)基因单核昔酸多态性与泌尿系结石的关系.方法:选取90例黑龙江地区的泌尿系结石患者及90例健康对照者外周血标本中的基因组DNA,采用PCR(聚合酶链反应)结合DNA测序,检测并分析CaSR基因的单核苷酸多态性位点的分布.结果:泌尿系结石组和对照组CaSR基因第986位、990位频率分布符合Hardy-Weinberg定律,其基因型分布频率在泌尿系结石患者和健康对照者中差异无统计学意义(P＞0.05),但在泌尿系结石患者组内CaSR第990位GG纯合子和RG杂合子出现频率明显偏高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CaSR基因第7外显子第986、990多态性位点与泌尿系结石的形成无直接相关性,但第7外显子第990位A/G单核苷酸多态性可能与泌尿系结石的形成密切相关.
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动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制
目的:探讨动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制.方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组(Control);异丙肾上腺组(ISO);动脉硬化组(AS);动脉硬化+异丙肾上腺素组(AS/ISO).采用腹腔注射VD3和高脂饮食及大剂量异丙肾上腺素(ISO 200 mg/kg)皮下注射复制大鼠在体动脉粥样硬化心肌梗死模型,应用RT-PCR测定心肌组织中CaSR、Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA的表达变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜观察心肌形态学变化;紫外分光法检测血清肌酸激酶(CK)、电化学免疫发光法检测肌钙蛋白T(cTnT)水平.结果:与正常组比较,ISO组CK活性、cTnT水平以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均增加,同时Bcl-2表达减少,心肌细胞损伤严重,AS/ISO的心肌损伤进一步加重.结论:CaSR的表达增多参与了动脉硬化大鼠心肌梗死的发生,其机制可能与促进心肌细胞凋亡有关.
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钙敏感受体在骨代谢中的研究进展
钙敏感受体感受细胞外的钙离子水平,调控一系列激素的释放以维持机体的钙稳态.钙稳态的调节过程与骨代谢相偶联,钙敏感受体通过直接或间接对破骨和成骨细胞的调控,动员或者抑制骨钙入血.虽然钙敏感受体己被证实调控骨代谢,但是详尽的调控机制仍在不断探究中.目前认为细胞外的高钙水平会激活钙敏感受体,抑制甲状旁腺激素分泌并促进降钙素释放,进而破骨细胞被抑制,成骨细胞动员,增加了骨质合成.本文就近年来关于钙敏感受体调控骨代谢的研究进展作一综述,为促进钙敏感受体及相关作用因子治疗骨代谢疾病的研究提供参考.
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抑制钙敏感受体表达对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌H9c2细胞肥大的影响
目的 探讨抑制钙敏感受体(CaSR)表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌H9c2细胞肥大的影响及作用机制.方法 采用细胞培养的方法,用AngⅡ处理H9c2细胞复制心肌肥大细胞模型,并在此基础上,应用CaSR激动剂三氯化钆(GdCl3)、CaSR抑制剂Calhex231或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理细胞.共分为5组:对照组、AngⅡ组、GdCl3+ AngⅡ组、GdCl3+ Calhex231+ AngⅡ组、GdCl3+ 3-MA+ AngⅡ组,每组6例.采用考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定总蛋白含量;蛋白印迹法检测心肌肥大信号蛋白Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMKⅡ)与其磷酸化形式(pCaMKⅡ)表达来评价细胞肥大情况;蛋白印迹法检测CaSR、自噬标志物[Beclin-1、微管相关蛋白轻链(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、P62]和Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β(CaMKKβ)-腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的表达.结果 ①GdCl3能够促进AngⅡ所诱发的CaSR蛋白表达增多(对照组:0.22±0.04; AngⅡ组:0.43±0.02; GdCl3+ AngⅡ组:0.63±0.08,P均＜0.05)、细胞总蛋白含量增多[对照组:(2.52±0.84)g/L;AngⅡ组:(8.72±3.60)g/L;GdCl3+ AngⅡ组:(14.17±4.49)g/L,P均＜0.05]、pCaMKⅡ/CaMKⅡ比值升高(对照组:0.25±0.05; AngⅡ组:0.51±0.03;GdCl3+ AngⅡ组:0.77±0.06,P均＜0.05),而Calhex231则能够抑制GdCl3引起的上述指标的增加[GdCl3+Calhex231+AngⅡ组,CaSR:0.41±0.16;总蛋白含量:(9.92±2.54) g/L;pCaMK Ⅱ/CaMK Ⅱ:0.58±0.08,P均＜0.05].②GdCl3能够促进AngⅡ所诱发的自噬标志物Beclin-1蛋白表达增多(对照组:0.31±0.06; AngⅡ组:0.55±0.09;GdCl3+AngⅡ组:0.74±0.08,P均＜0.05)、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值增加(对照组:0.28±0.06;AngⅡ组:0.56±0.10;GdCl3+AngⅡ组:1.00±0.15,P均＜0.05),P62蛋白表达减少(对照组:0.54±0.03;AngⅡ组:0.34±0.02; GdCl3+ AngⅡ组:0.15±0.03,P均＜0.05);Calhex231则能抑制GdCl3引起的自噬标志物指标的改变(GdCl3+Calhex231+AngⅡ组,Beclin-1:0.53±0.14;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ:0.57±0.12;P62:0.28±0.05,P均＜ 0.05).③GdCl3可引起pCaMKKβ/CaMKKβ(对照组:0.43±0.09;AngⅡ组:0.76±0.12;GdCl3+ AngⅡ组:1.19±0.21)和pAMPK/AMPK(对照组:0.38±0.11;AngⅡ组:0.68±0.08;GdCl3+ AngⅡ组:1.18±0.08,P均＜0.05)比值升高,pmTOR/mTOR(对照组:0.90±0.10;AngⅡ组:0.54±0.04;GdCl3+AngⅡ组:0.29±0.09,P均＜ 0.05)比值降低;Calhex231则能抑制GdCl3引起的上述蛋白表达变化(GdCl3+ Calhex231+AngⅡ组,pCaMKKβ/CaMKKβ:0.75±0.06;pAMPK/AMPK:0.57±0.05;pmTOR/mTOR:0.51±0.08,P均＜0.05).结论 抑制CaSR表达可逆转AngⅡ诱导的H9c2细胞肥大,其机制可能与抑制自噬、抑制CaMKKβ-AMPK-mTOR通路有关.
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蛋白激酶C与钙敏感受体在心肌缺血预适应中的保护作用
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)与钙敏感受体(CaR),在心肌缺血预适应(IPC)中的保护作用.方法 采用细胞培养方法 ,体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,模拟缺血预适应模型,实验分为7组:①正常对照组(C),②缺血再灌注组(1/R),③IPC组,④IPC+PKC抑制剂组(IPC+PKCI),⑤IPC+PKCI+CaR激动剂组(IPC+PKCI+CARS),⑥IPC+CaRS组,⑦IPC+CaR抑制剂组(IPC+CaRI).分别用TUNEL,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑比色法(MTT)观察细胞存活率,Western Blot法检测胞浆内caspase-12,CaR,钙蛋白酶(calpain)表达.结果 光镜下,I/R组细胞核缩小,呈强蓝色荧光,染色质浓缩,出现凋亡小体,其他各实验组有不同程度的荧光增强,尤以IPC+PKCI+CaRS组多见强蓝色荧光细胞核.心肌细胞存活率和凋亡率,I/R组[(62.99±0.65)%,(19.13±0.87)%],IPC组[(78.67±0.37)%,(14.21±0.74)%],IPC+PKCI组[(71.09±0.52)%.(20.46±0.81)%],IPC+PKCI+CaRS组[(66.10±0.75)%,(24.89±1.43)%],IPC+CaRS组[(69.56±0.44)%,(21.64±0.77)%],IPC+CaRI组[(85.81±0.60)%,(13.12±0.69)%]明显低于或高于对照组[(100.00)%,(6.02±0.31)%],除IPC+CaRI组心肌细胞存活率外,其他各组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01).Western Blot测定,胞浆白CaR蛋白在IPC+PKCI,IPC+CaRS,IPC+PKCI+CaRS组表达较IPC组高,IPC+CaRI组较IPC组低,caspase-12蛋白在I/R,IPC+CaRS,IPC+PKCI+CaRS 组,相对分子质量(胁)为60×103的活性片段表达均较高,calpain在I/R,IPC,IPC+PKCI,IPC+PKCI+CaRS,IPC+CaRS组表达均高于对照组和IPC+CaRI组,其中I/R组高,对照组低,IPC+CaRI组次之.结论 PKC与CaR受体之间的相互作用在IPC中可以通过减少肌浆网钙释放而起到对心肌的保护作用.Protective mechanism of the interaction between protein kinase C and calcium sensing receptor in jschemiapreconditioning DU Li-juan,WANG Yah-li,SUN Zhi-rui,ZHAO Ya-jun,LI Quan-feng,WANG Li-na,ZHANG Wei-hua Departmem of Pothophysioloty,Harbin Medical University,Harbin 150081,China
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钙敏感受体对人单核巨噬细胞株THP-1细胞因子分泌功能的影响
目的 探讨钙敏感受体(Calcium sensing receptor,CaSR)对THP-1源性巨噬细胞分泌细胞因子能力的影响.方法 首先将人单核细胞株THP-1用佛波脂(PMA,100nmol/L)诱导,使之转化为具有贴壁能力的巨噬细胞株THP-1(以下简称THP-1).用CaSR特异激动剂氯化钆(GdCl3,1mmol/L)处理细胞后,用ELISA法检测CaSR的激活对THP-1分泌细胞因子IL-1β、TNFα的影响,并利用Western Blotting方法检测NF-κB信号通路中p65、p50和IκBα蛋白的表达变化.结果 (1)用GdCl3处理后,THP-1细胞上清液中IL-1β、TNF-α的含量明显升高,但该作用可被CaSR特异抑制剂NPS2390(10μmol/L)抑制;(2)在Gd3+作用组,THP-1细胞中NF-κB-p65表达明显上调,同时伴有IκBα的减少;在NPS2390预处理组,Gd3+所引起的NF-κB-p65和IκBα变化被抑制;各组NF-κB-p50变化不明显.结论 CaSR的激活可能通过激活NF-κB信号通路促进THP-1源性巨噬细胞株分泌细胞因子IL-1β、TNF-α,提示CaSR可能参与涉及单核巨噬细胞激活的各种疾病.
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钙敏感受体通过调控线粒体内钙参与心肌细胞缺氧-复氧损伤所致的凋亡
目的 探究在心肌缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)过程中,钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaR)参与IP3通路引起肌浆网的内钙耗竭,从而导致线粒体凋亡通路活化的机制.方法 在培养的乳鼠心肌细胞模拟缺氧-复氧,应用IP3信号通路不同抑制剂激动CaR后观察线粒体内钙的变化,检测对线粒体势能的影响.结果 Hoechst 33342染色法分析发现凋亡细胞呈现典型的染色质浓缩成团块状.细胞凋亡率在H-Re组(33±6)％、Ca+Ni+Cd+ H-Re组(31±5)％和Gd+ Ni+ Cd+H-Re 组(34±3)％明显高于NPS-2390+ Ca+ Ni+ Cd+H-Re组(20±4)％、2-APB+ Ca+ Ni+ Cd+ H-Re组(18±4)％和Ru+Ca+Ni+Cd+H-Re组(23±5)％.线粒体内钙浓度和线粒体膜电位的检测结果显示:在Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙浓度显著升高,线粒体膜电位明显下降；在2-APB+ Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙浓度维持在较低水平,线粒体膜电位维持在较高水平.应用Ruthenium red(线粒体钙单向转运体的抑制剂),观察线粒体内钙浓度变化.结果发现,在Ru+ Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙维持在较低的水平,而线粒体膜电位维持在较高的水平.结论 钙敏感受体通过线粒体-肌浆网膜引起线粒体内钙增加,激活线粒体凋亡途径而导致心肌细胞凋亡.
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环孢霉素A诱导H9c2类心肌细胞损伤与钙敏感受体的关系
目的 观察钙敏感受体(CaSR)是否在环孢霉素A (CsA)诱导心肌损伤过程中发挥重要作用.方法 10 μg/mL CsA作用于H9c2类心肌细胞不同时间(0.25、0.5、1、4、8、12、24 h),应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测H9c2类心肌细胞CaSR mRNA表达,Western blot方法检测H9c2类心肌细胞CaSR蛋白表达,免疫荧光观察蛋白定位情况.结果 ①CsA作用于H9c2类心肌细胞4h后,与对照组相比CaSR mRNA表达量明显增高(P＜0.01);②CsA作用于H9c2类心肌细胞4h后,与对照组相比CaSR蛋白表达量明显增高(P＜0.01),与RT-PCR结果一致;③免疫荧光观察显示,CaSR蛋白表达分布,CsA作用于H9c2类心肌细胞4h后,与对照组相比,CaSR表达量明显增加,且CaSR表达主要分布在H9c2类心肌细胞的细胞膜和胞浆中.结论 CsA能通过引起CaSR mRNA和蛋白表达增加,导致H9c2类心肌细胞损伤.
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钙敏感受体在阿霉素诱导大鼠心肌损伤过程中的表达
目的 检测阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导大鼠心肌损伤过程中心肌钙敏感受体(calciumsensing receptor,CaSR)表达水平的变化,初步探讨钙敏感受体在心肌损伤中的作用.方法 雄性Wistar 大鼠40只,随机分为对照组(n=10)和损伤组(n=30),损伤组大鼠分为3周组、6周组和9周组.采用腹腔注射阿霉素(2.5mg·kg-1·w-1)诱导大鼠心肌损伤.应用超声心动图检测各组大鼠左心室内径以及功能.取大鼠心肌组织,HE染色观察大鼠心肌形态和结构的变化.Western blot和免疫组化法检测CaSR蛋白的表达.结果 ①与对照组相比,9周组大鼠左室舒张末期内径(LVDD)增加(P＜0.05),左室射血分数(LVEF)明显降低(P＜0.01)；②HE染色显示对照组心肌细胞形态正常,损伤组心肌出现细胞肿胀,胞浆疏松淡染、嗜酸性增强,细胞核增大,横纹不清及空泡样变性；③阿霉素作用3周后CaSR表达明显降低(P＜0.01).6周组与3周组比较无显著性差异.9周组与对照组无明显差异,但明显高于3周组和6周组(P＜0.01).结论 在DOX诱导大鼠心肌损伤过程中,CaSR表达先降低后升高,这可能为临床治疗阿霉素引起的心肌损伤提供药物作用靶点及对心肌损伤和心功能降低的判定具有一定意义.
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钙敏感受体在大脑中作用研究进展
钙作为一种通用信号,参与多种生理活动,包括细胞分化、细胞的分泌调节、维持神经肌肉的兴奋性等,常作为细胞内第二信使.然而,细胞外Ca2+也被证实发挥着的第一信使的作用,在大脑的不同区域均有一定程度的表达,能够调节神经细胞的生长、迁移,以及少突胶质细胞的发育和功能.本文阐述了CaSR在调节大脑功能中起到的作用,同时概述了CaSR的结构、生理功能、以及在脑组织中的分布情况等.
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钙敏感受体在缺氧诱导的A549细胞增殖和迁移中作用的研究
目的 观察A549细胞缺氧时钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)的表达,探讨其与A549细胞增殖及迁移的关系.方法 应用western blot技术分析CaSR、PCNA蛋白在A549细胞的表达;应用BrdU掺入法分析不同处理因素对A549细胞DNA合成的影响,应用细胞划痕实验分析不同处理因素对细胞迁徙的影响.结果 CaSR蛋白在A549细胞中有表达.缺氧能够增加CaSR、PCNA的表达、BrdU掺入率及细胞迁移的距离(与对照组比较,P<0.05).GdCl3(CaSR激动剂)能够增强缺氧的上述作用,NPS2143(CaSR抑制剂)则能够减弱缺氧的作用(与缺氧组比较,P<0.05).结论 缺氧诱导的CaSR表达能够促进A549细胞的增殖和迁移.
