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FLT3-ITD突变阳性急性髓系白血病的临床特征和预后因素
目的 探讨FLT3-ITD突变阳性急性髓系白血病(AML)的临床特征和预后因素,为FLT3-ITD突变阳性AML患者的预后评估提供更多证据.方法 收集98例FLT3-ITD突变阳性AML初诊患者的临床资料,对其临床特征与预后的相关性进行统计学分析.结果 98例FLT3-ITD突变阳性AML患者初诊时中位WBC 58.2 (0.3～ 461.8)×109/L,外周血原始细胞绝对计数中位数42.2(0～397.1)×109/L.71例细胞遗传学中高危组患者1个疗程完全缓解(CR)率为60.6％,原发耐药率为26.8％.单因素分析结果显示外周血原始细胞绝对计数低是影响患者1个疗程CR的良好预后因素(P=0.009).多因素分析结果显示,1个疗程达CR (HR=0.395,95％ CI 0.183～0.850,P=0.001)及第1次CR期行异基因造血干细胞移植(HR=0.180,95％CI 0.043～0.752,P=0.018)是影响患者无复发生存的良好预后因素,1个疗程达CR(HR=0.251,95％CI 0.121～0.523,P＜0.001)及外周血原始细胞绝对计数低(HR=0.219,95％CI 0.088～0.545,P=0.003)是影响患者总生存的良好预后因素.结论 外周血原始细胞计数低的FLT3-ITD突变阳性AML患者预后相对良好,1个疗程达CR和第1次CR期行异基因造血干细胞移植是改善FLT3-ITD突变阳性AML患者预后的重要治疗策略.
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FLT3-ITD突变数量、长度及水平对急性髓系白血病患者预后的影响
目的 探讨FLT3-ITD突变数量、重排碱基长度和比例与急性髓系白血病(AML)患者的总体生存(OS)时间及持续完全缓解时间(CRD)的关系.方法 采用PCR-毛细管电泳法检测130例AML(除外M3)患者的FLT3-ITD突变.根据电泳峰型数量分为单或多个(片段)突变;FLT3-ITD突变比例为突变型峰面积/野生型和突变型峰面积之和;分析FLT3-ITD突变患者临床特征并随访患者预后.结果 FLT3-ITD多个突变常见于60岁以上患者;FLT3-ITD单个突变患者初诊骨髓原始细胞比例高于多个突变患者(0.758对0.638,P=0.028);FLT3-ITD突变数量不影响患者预后.FLT3-ITD突变重排碱基长度亦对患者预后无明显影响.FLT3-ITD突变比例＜10％患者的OS时间和CRD与同期C-KIT突变的中危组AML患者相似,均显著长于突变比例≥10％患者(中位OS时间分别为未达到、未达到、9.9个月,P＜0.05;中位CRD分别为未达到、未达到、6.7个月,P＜0.05).FLT3-ITD突变比例≥10％的AML患者中,FLT3-ITD突变伴随NPM1或CEBPA突变患者的中位CRD显著长于单纯FLT3-ITD突变的患者(25.0个月对5.1个月,P=0.003),但两组中位OS时间差异无统计学意义(11.4个月对8.0个月,P＞ 0.05).结论 FLT3-ITD突变阳性的AML(除外M3)患者中,FLT3-ITD突变比例＜10％的患者预后好于突变比例≥10％的患者.
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FLT3基因表达水平及内部串联重复突变与急性髓系白血病的关系及临床意义
目的 研究FLT3基因表达水平及内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变与急性髓系白血病(AML)的关系及临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR技术检测129例AML患者治疗前后共152份骨髓标本单个核细胞FLT3 mRNA,应用RT-PCR技术检测其中75例初发未治AML患者的FLT3/ITD突变.结果 80例初发未治AML患者FLT3 mRNA表达水平为0.1041(0～33.8736),10名正常人骨髓FLT3 mRNA表达水平为0.0020(0.0006～0.0040),差异有统计学意义(P=0.001).75例初发未治AML患者检出FLT3/ITD突变者11例,突变率14.7%,FLT3/ITD突变组的FLT3 mRNA表达水平为0.2200(0.0297～33.8736),与FLT3/ITD阴性组[0.0975(0～26.2200)]比较,差异无统计学意义(P=0.093).在M,患者中,FLT3/ITD阳性者缓解率显著低于FLT3/ITD阴性者(P=0.015).FLT3/ITD阴性的非M3患者中FLT3 mRNA高表达组(表达水平>0.04)患者的化疗缓解率(37.5%)显著低于低表达组(缓解率100%).追踪观察20例患者,完全缓解组的FLT3 mRNA表达水平迅速或缓慢下降至少1个对数级,未缓解组的FLT3 mRNA表达水平无明显变化.结论 AML患者FLT3 mRNA的表达量及FLT3/ITD突变,可作为评价AML患者治疗效果、估计预后的指标,为微量残留病监测、观察AML患者病情变化提供有用工具.
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胃肠道间质瘤中Cx43、FLT3和RET的表达与临床病理特征及其预后的关系
a以上进行随访者,用流式细胞术定量研究3种蛋白在消化道间质瘤中的表达情况.结果 Cx43的表达与组织学分型有关,上皮型和混合型表达均高于梭形细胞型(P均<0.05);FLT3、RET 在Ⅱ级和Ⅲ级的表达均高于Ⅰ级(P均<0.05);在有转移复发的胃肠道间质瘤RET、 FLT3两种蛋白有转移复发表达均高于无转移复发者(P均<0.05).结论 CD117、CD34可以作为间质瘤的特异性标记物,也是与其他间叶源性肿瘤进行鉴别的可靠依据,但不能成为判断间质瘤预后的指标;RTE、FLT3可以作为判断胃肠道间质瘤预后的指标.
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Flt3及其突变与白血病的关系
微小残留病变(minimal residuel disease,MRD)是白血病复发的原因,及时检测并尽早清除MRD,才能降低白血病的复发,达到治愈的目的,fms样酪氨酸激酶-3(fms-like tyrosine kinase-3,Flt3)基因在白血病中广泛高表达,并与疾病转归相关,有望成为白血病的泛基因.现将Flt3基因及其突变型在白血病中的表达及其预后意义综述如下.
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Flt3、c-kit和SHP-1基因在急性白血病中的作用
目的 探讨Fit3、造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达以及其与白血病发生和预后的关系.方法 用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例髓系白血病患者(实验组)及33例正常对照组Flt3、SHP-1与c-kit mRNA表达.结果 急性髓系白血病(AML)患者的Flt3及c-kit平均表达水平高于对照组,SHP-1平均表达水平均低于对照组(P＜0.05);34例初治AML患者中,Flt3及c-kil+的完全缓解率低于Flt3-及c-kit-者.而SHP-1则相反.结论 Flt3、c-kit对于白血病的转归、预测白血病的复发、监测微小残留病变有重要的意义,SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与Flt3、c-kit基因参与白血病的发生.
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FLT3基因内部串联复制与儿童急性白血病的关系
目的:探讨FLT3基因内部串联复制(FLT3/ITD)与儿童急性白血病的关系及其临床意义.方法:采用PCR法检测76例急性髓系白血病(AML)、24例ALL患儿FLT3/ITD的发生情况.结果:AML患者发生FLT3/ITD的突变几率为11.8%(9/76),急性淋巴细胞白血病(ALL)患者均未检出FLT3/ITD;2～10岁AML患儿FLT3/ITD发生率4.76%(2/42),11～18岁AML患儿FLT3/ITD发生率20.58%(7/34),两者有显著差异(P<0.05).结论:FLT3/ITD检测可作为AML具意义的分子标志,对AML预后判断及治疗方案的确定有重要价值.
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浅议与APL预后密切相关的因子
急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性髓系白血病(AML)的一种特殊亚型.近年来随着全反式维甲酸和三氧化二砷的靶向治疗日益规范化,APL的预后已很大程度上得到提高,成为AML中预后好的亚型,但仍有15％的患者发生复发.越来越的学者致力于研究影响APL预后的因素,以往很多人们关注过的因子在近来的研究中也发现在APL中起着重要的作用,如FLT3、CD56、Fas等,以及新近证实的一些特殊基因的表达也影响着APL的预后,BAALC低表达与APL预后正相关,与其相反Ets相关基因(ERG)高表达与APL预后负相关.在此本文总结了近年来人们在APL预后研究的进展,这些因素的发现,使人们对APL发病机制有了更深一层的了解,便于临床上早期对APL患者进行危险分层,对高风险的APL患者采用个体化治疗,也可成为日后治疗APL的新靶点.
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索拉非尼联合AS2O3对FLT3-ITD突变白血病细胞MV-4-11的抑制作用
目的:观察FLT3抑制剂索拉非尼(sorafenib)联合三氧化二砷(AS2O3)对FLT3-ITD突变的人类急性双表型(B、单核)髓细胞白血病MV-4-11细胞增殖、细胞周期和凋亡的作用,为该联合用药方案的临床应用提供实验依据.方法:将对数生长期的MV-4-11细胞分为4组:空白对照组(不加药),索拉非尼单药(1、10、100、1 000、5 000、10 000 nmol/L)组,AS2O3单药(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 μmol/L)组,索拉非尼+AS2O3联合用药(10 nmol/L+ 1.0 μmol/L)组.CCK-8法检测索拉非尼和AS2O3单用或联用对MV-4-11细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测MV-4-11细胞的凋亡及细胞周期.结果:索拉非尼和AS2O3单用对MV-4-11细胞的增殖均有抑制作用,且均呈浓度依赖性;两药联用对MV-4-11细胞增殖的抑制率显著高于两药的单用[(70.72±1.03)％ vs (47.24±1.27)％、(20.28±0.70)％;均P＜0.01),两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)为0.696,表现出协同作用.索拉非尼可使MV-4-11细胞周期阻滞于G0/G1期,两药联用阻滞得更严重.两药联合作用于MV-4-11细胞48 h后,MV-4-11细胞早期凋亡率显著高于两药单用(89.06％ vs 68.27％、78.71％;均P＜0.05).结论:索拉非尼联合AS2O3能够协同抑制MV-4-11细胞的增殖,并且比单药作用更有效地阻滞细胞周期于G0/G1,更明显地促进细胞凋亡.
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急性髓系白血病患者FLT3基因第二酪氨酸激酶结构域突变图谱
目的 分析急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(Fms-like tyrosine kinase 3,FL T3)基因第二酪氨酸激酶结构域(Tyrosine-kinase domain,TKD)突变类型,为基因检测及临床应用奠定基础.方法 采用Sanger测序法检测AML患者骨髓细胞FLT3基因第20号外显f喊基序列,统计不同突变类型;收集并比较不同突变类型患者的性别、年龄、WHO分型、白细胞、血红蛋白、血小板、染色体核型等资料.结果 在1,063例AML患者中检测到FLT3-TKD突变58例(5.5％),包括点突变52例,缺失突变5例,点突变伴缺失突变1例,其中点突变D835Y突变型比例高为31例(53.4％).点突变组与缺失突变组患者在年龄和染色体核型方面差异有统计学意义(P=0.028,P=0.049),在性别、WHO分型、白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓原始细胞比例和髓外浸润方面差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AML患者FLT3-TKD突变以点突变为主,D835Y突变型比例高;缺失突变组患者较点突变组患者年龄大.
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多重PCR结合毛细管电泳检测FLT3及NPM1基因突变的实验方法的研究
目的 建立一种便捷可靠的实验方法 能够同时检测FLT3基因突变及NPM1基因突变.方法 设计多重PCR结合毛细管电泳(CE)方法 同时检测75例初诊急性白血病(AL)患者FLT3基因及NPM1基因突变发生情况.结果 应用多重PCR结合CE方法 在75例AL患者中检测到FLT3-ITD突变阳性28例,FLT3-TKD突变阳性5例,NPM1突变阳性20例,9例同时存在FLT3-ITD及NPM1基因突变,1例同时存在FLT3-ITD及FLT3-TKD突变.结论 多重PCR结合CE是一种能同时检测FLT3基因和NPM1基因突变的便捷可靠的方法,对判断AML患者的临床预后、指导分层治疗有重要意义,有进一步推广的价值.
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人Flt3全长基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建
目的克隆人Flt3全长基因,构建PGE/Plt3逆转录病毒表达载体.方法以人骨髓cDNA等基因文库为模板,采用分段克隆、人工PCR延伸及PCR连接等方法,获得了人Flt3全长基因,并构建Flt3基因的逆转录病毒表达载体.结果成功克隆FFl3全长基因和构建PGEZ/Flt3逆转录病毒表达载体.结论Flt3全长基因克隆及构建逆转录病毒表达载体的成功,为构建Flt3转基因细胞和制备抗人Flt3单克隆抗体和研究Flt3的生物学功能奠定了物质基础,也为低丰度和长片段基因克隆提供了有价值的经验.
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"一箭双星法"构建Flt3转基因细胞株
目的构建稳定表达Flt3分子的转基因细胞株.方法将Flt3基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染能力的完整重组病毒载体,进而采用"一箭双星法"即同时感染BaF和L929细胞,构建Flt3转基因细胞株.结果成功获得稳定表达Flt3的转基因细胞株BaF/Flt3和L/Flt3.结论采用"一箭双星法"成功构建Flt3转基因细胞株,为以Flt3为靶分子的研究奠定了物质基础,也为类似的高难度的转基因细胞株的构建提供了有价值的经验.
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小分子Fms样酪氨酸激酶3抑制剂的研究进展
Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种重要的Ⅲ型受体酪氨酸激酶,对造血细胞和淋巴细胞的增殖起关键作用,其突变以及过度表达是造成多种恶性肿瘤的关键因素.通过外源性抑制剂阻断细胞增殖信号的传导来促使肿瘤细胞凋亡是当前治疗肿瘤的重要手段.FLT3小分子抑制剂作为一类重要的外源性受体酪氨酸激酶抑制剂已应用于多种恶性肿瘤的治疗并引起广泛关注.综述近5年来FLT3小分子抑制剂的研究进展.
关键词： Flt3 抗肿瘤 受体酪氨酸激酶抑制剂 白血病 -
FLT3突变,FLT3表达水平在急性髓系白血病中的意义
目的 研究FLT3基因长度突变(FLT3-LM)及FLT3受体在初诊AML患者中骨髓单个核细胞(MNC)的表达水平在急性髓系白血病(AML)的临床意义.方法 采用基因组DNA聚合酶链反应(PCR)技术检测95例初诊AML患者FLT3-LM,采用流式细胞仪(FCM)检测分析其中68例FLT3的表达水平.结果 初诊AML患者中FLT3-LM阳性率为15.8%;FLT3-LM+存在于AML-M1(3/18),M2(4/24),M3(2/17),M5(5/25),M6(1/4)亚型中(P＞0.05);22例ALL和10例正常对照中均未检测到FLT3-LM阳性;FLT3-LM在正常染色体核型组和伴t(15;17)核型异常患者中突变率分别为23.0%(10/52例)和16.7%(2/12例),较其他核型组突变率4.3%(1/23例)高,但无统计学差异;FLT3-LM组与非突变组在年龄,性别,诱导缓解率方面无统计学差异(P＞0.05);FLT3-LM阳性患者外周血白细胞高,骨髓原始细胞高(P＜0.05).AML患者FLT3表达水平为(11.48%±14.87%),高于10例正常对照组水平(1.10%±0.31%)(P＜0.05);FLT3表达水平在12例FLT3-LM+组为(5.86%±6.85%),低于56例非突变组(14.14%±16.25%)(P＜0.05);临床资料显示,诱导治疗后缓解组的FLT3表达水平为(5.52%±2.67%),低于非缓解组FLT3表达水平(25.53%±22.60%)(P＜0.05).结论 FLT3长度突变是AML中发生频率较高的一类突变;突变患者临床特征表现为外周血高白细胞,骨髓高原始细胞;FLT3受体在AML患者单个核细胞中呈高水平表达;FLT3受体高表达与低诱导缓解率有关.FLT3突变与FLT3受水平检测可能有助于白血病诊断,预后判断和靶向治疗.
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FLT3基因突变在急性早幼粒细胞白血病中的临床意义
目的 分析FLT3基因突变在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的临床意义.方法 抽取34例APL患者骨髓标本,采用PCR、RT-PCR和DNA酶切技术检测FLT3基因内部串连重复(FLT3-ITD)、FLT3基因15835突变(FLT3-D835),并分析它们与患者临床表现、症状、疗效的关系.结果 APL患者外周血高WBC数(wBC≥10×10~9/L)的阳性率,FLT3-ITD突变型明显高于FLT3-ITD野生型(P<0.05),而FLT3-D835突变与其野生型差异无显著性;骨髓原始细胞+早幼粒细胞之和高含量(≥80%)、B级出血症状、完全缓解(CR)阳性率,FLT3突变型与FLT3野生型患者差异均无统计学意义(P>0.05).结论 大部分FLT3-ITD突变型APL患者常表现高外周血WBC数,骨髓原始细胞与早幼粒细胞之和高含量,B级出血症状及CR率与野生型患者无显著差异.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 Flt3 基因突变 -
Flt3的原核表达、纯化及多克隆抗体制备
Flt3(fms-like receptor tyrosine kinases)又称FLK-2(foetal liver kinase2)、STK-1(stem cell tyrosine kinase 1),为Ⅲ型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTK)成员之一,在血细胞中表达仅限于造血干/祖细胞表面,与其配体在正常造血及免疫系统发育中起重要的调节作用.
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FLT3基因突变与急性髓细胞性白血病的关系及临床意义
目的 研究FLT3基因内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变与急性髓细胞性白血病(AML)的关系及临床意义.方法 采用基因组PCR及RT-PCR方法检测126例AML患者的FLT3/ITD突变.结果 106例初治AML患者检出FLT3/ITD突变者18名,突变率17.0%,在20例完全缓解期患者及对照组中均未检测到FLT3/ITD突变,基因组PCR及RT-PCR两种方法检测FLT3/ITD突变的结果一致,对其中3例特征性突变测序结果显示,ITD主要位于外显子14,亦可累及内含子14和外显子15,长度为21～42bp,均为框内突变.FLT3/ITD阳性患者外周血白细胞计数高(P＜0.01),骨髓白血病细胞比例高(P=0.039),早期病死率高(P=0.036).在M3患者中,FLT3/ITD阳性者完全缓解率低(P=0.015).在非M3患者中,FLT3/ITD阳性者的完全缓解率与阴性者比较,差异无统计学意义(P＞0.05),FLT3/ITD阳性患者完全缓解后检测FLT3/ITD转阴性.结论 FLT3/ITD阳性AML患者早期死亡率高,FLT3/ITD阳性M3患者预后差,FLT3/ITD突变检测对于AML患者疗效评价、预后估计具有重要意义.
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阿可拉定下调STAT5基因表达对急性髓性白血病发挥抗肿瘤作用
目的 研究阿可拉定在体内外对急性髓性白血病(AML)的抗肿瘤作用及其对AML的重要靶点的影响.方法 用MTT法测定阿可拉定在体外对MV-4-11细胞生长抑制作用,流式细胞分析不同浓度阿可拉定对MV-4-11细胞的凋亡和周期的影响,RT-PCR检测阿可拉定对FLT3和STAT5基因表达的影响,采用MV-4-11细胞 NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型评价阿可拉定在体内抑制肿瘤生长的作用.结果 MTT结果 表明,阿可拉定能够明显抑制MV-4-11细胞生长,IC50为7.48 μmol·L-1;在体外不同浓度的阿可拉定能够明显诱导MV-4-11细胞凋亡,使G0/G1期细胞比例升高且呈现浓度依赖性;体内实验表明,阿可拉定明显抑制荷瘤小鼠皮下瘤块的生长,且用药时间越早对控制肿瘤进展越有利.结论 阿可拉定明显下调STAT5基因的表达,在体外能够明显抑制含FLT3-ITD突变体的MV-4-11细胞生长,在体内也表现出良好的抑制肿瘤生长的作用.
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FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖凋亡及cyclin D1、cyclin A表达的影响
目的 探讨FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖、凋亡及cyclin D1、cyclin A表达的影响.方法 体外构建FLT3靶向短发夹状干扰RNA(FLT3-shRNA),转染HL-60细胞,RT-PCR、流式细胞术(FCM)鉴定FLT3的表达;CCK-8法检测细胞增殖活力;FCM检测细胞周期;Annexin V染色法检测凋亡;RT-PCR及Western blot检测cyclin D1,cyclin A在mRNA、蛋白水平的表达.结果 FLT3-shRNA转染可下调FLT3的表达,它对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达(81.66±10.25)%,(76.76±11.23)%.FLT3表达下降后细胞增殖活力受到抑制,转染48 h抑制率达(31.66±2.97)%,72 h达(33.10±3.43)%;细胞生长曲线低平,缺乏指数增殖特征.与对照组比,转染48 h细胞周期重新分布,G0/G1期(58.48±6.17)%的明显上升,S期(27.72±5.10)%下降;细胞早期凋亡率(8.95±0.88)%上升;细胞内cyclin D1的mRNA、蛋白表达下降,cyclin A的表达无明显改变.结论 FLT3靶向RNA干扰通过下凋cyclin D1表达有效地抑制细胞增殖,具有潜在的临床应用价值.
