恐伤孕鼠对其仔鼠大脑皮质Reelin、 VLDLR及P-DAB1表达的影响

目的:研究恐伤孕鼠对其仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1表达的影响.方法:将受孕后雌鼠用随机分为正常组、模型组、补肾组,每组各10只.运用恐吓为主的复合应激法刺激造模,正常组不予刺激,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠.补肾组灌胃中药左归丸浓缩剂,2mL/100g体质量/d,正常组及模型组则根据雌鼠体质量予以等量0.9％氯化钠溶液灌胃.仔鼠出生当天每窝随机取1-2只仔鼠断头取全脑,后将全脑固定,切取包含皮质的脑片.结果:模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变.与正常组比较,补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1的蛋白表达均下调(P＜0.01);与模型组比较,补肾组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1的蛋白表达明显上调(P＜0.01).结论:恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过调节Reelin信号通路可阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生.

结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用

探讨一种由结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用.构建了99例结肠癌及其癌旁组织的组织芯片进行免疫组织化学染色,探测其表达强度并结合临床资料进行分析.结果显示,Duke's A,B,C,D分期与结肠癌细胞Reelin表达强度无关,结肠癌细胞Reelin表达强度与其淋巴结转移潜能相关,结肠癌细胞Reelin表达强度每增加一个单位,其转移进入淋巴结的能力将增加3.523倍.结肠癌细胞表达Reelin与其淋巴结转移密切相关,Reelin可以作为结肠癌淋巴结转移预测的一个新指标.

海马Cajal-Retzius细胞的正常发育及在APPswe转基因小鼠中的改变

目的 观察reelin阳性Cajal-Retzius细胞(CR细胞)在正常小鼠及APPswe转基因小鼠海马发育中的变化,探讨CR细胞在阿尔茨海默病(AD)发生发展过程中所起的作用,为研究AD发病机制和临床治疗提供新的思路和方法 .方法 80只实验小鼠分为APPswe转基因模型组和对照组,每一组内分E16、P0、P7 、P15 、P30、P90、P180和P360 8个年龄段,每一年龄段小鼠各取5只.另取12月龄模型组和对照组小鼠各3只,用硫黄素S染色技术检测APPswe转基因小鼠脑内沉积的老年斑;免疫荧光技术标记正常及模型组小鼠齿状回分子层内reelin阳性CR细胞,同时采用谷氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)、活化型Caspase-3分别与reelin双重标记以研究CR细胞的组织化学特点及凋亡情况;后利用免疫印迹方法 对海马组织内reelin的活化片段进行半定量分析.结果 随着海马发育CR细胞逐渐减少,不同时期的reelin阳性CR细胞可以分别被谷氨酸、GABA、Caspase-3标记;APPswe转基因小鼠海马内CR细胞的数量明显少于正常对照组,免疫印迹法结果　与免疫细胞化学统计结果吻合.结论 出生后CR细胞的丢失是由于凋亡所致,在海马发育的不同时期CR细胞分泌兴奋性或抑制性神经递质,以此来调节突触间的信息传递与突触可塑性.APPswe转基因小鼠海马内CR细胞低于正常对照组,提示CR细胞丢失可能与AD相关的神经元退行性病变有关.

Reeler小鼠海马齿状回形态结构与组织化学研究

目的 分析 reelin 基因突变小鼠,即reeler小鼠海马锥体细胞和颗粒细胞的组织化学特征,了解Reelin缺乏对海马皮质发育的影响,为认识Reelin功能提供形态学证据. 方法 用免疫荧光双重标记法, 分别标记野生型和reeler 小鼠海马锥体细胞、颗粒细胞和苔藓细胞; 结果 Reeler小鼠海马皮质板发育明显障碍,表现为锥体层和颗粒层细胞扩散,海马片层状细胞构筑紊乱.颗粒层细胞明显增殖并向门区迁移,以致颗粒层与门区的界限消失,呈鼓槌状结构. 结论 Reelin作为神经细胞迁移的终止信号和细胞增殖的调控信号对神经细胞迁移、发育过程中皮质板的片层化,特别是对调节颗粒细胞的增殖有明显影响.

Reelin与小脑发育——Notch1信号通路的调节作用

目的 探讨Reelin在小脑放射状胶质细胞、神经干细胞和普肯耶细胞迁移和分布中的作用,并探讨Notch信号通路在其中的作用.方法 取WT小鼠和reeler小鼠胚胎9d至生后60d的脑部共148例,运用免疫荧光技术检测两组小鼠小脑发育中放射状胶质细胞、神经干细胞、普肯耶细胞及激活型Notch1受体的表达.结果 Reeler小鼠小脑发育中放射状胶质细胞极性紊乱导致迁移阻滞于内颗粒层,过早分化,分子层中数量减少(P＜0.01);Sox2阳性的干细胞启动迁移较慢,随后未得到适当的终止信号越过普肯耶细胞层进入外颗粒层,野生型小鼠该细胞并不迁移进入外颗粒层;普肯耶细胞多数不能迁移至分子层大量阻滞于内颗粒层中形成细胞团;激活型的Notch1受体在reeler小鼠小脑中表达减少.结论 Reelin在小脑神经干细胞、胶质细胞、普肯耶细胞发育和片层化分布中有重要作用,并且Notch1信号通路参与Reelin介导的小脑发育.

Reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学观察

目的 探讨小鼠室管膜下区(SVZ)的神经干细胞孵育成熟以及沿喙端迁移流(RMS)切线迁移至嗅球(OB)的过程,尤其是Reelin对细胞迁移和细胞分化的影响.方法 选用野生型(WT)小鼠50只和纯合reeler小鼠23只胚胎16 d至生后90 d的各年龄点小鼠大脑,应用尼氏染色、免疫荧光染色、墨汁灌注及电子显微镜技术标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系,比较两组小鼠RMS的发育情况.结果 胚胎后期至出生早期,在SVZ分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血管网,它们相互联系构成SVZ神经于细胞孵育的血管龛(niche);神经干细胞在niche中孵育成熟后可以进入RMS,切线迁移至嗅球,到达嗅球后转变为放射状迁移,分化为各种神经元整合入嗅球;神经干细胞在RMS的迁移过程中,放射状胶质细胞协同血管为其提供支架引导;reeler小鼠也能形成RMS,但形态有所改变,主要在嗅球处,神经干细胞失去规律排列,呈散乱分布.结论 室管膜下区的niche是神经干细胞的主要来源;血管协同放射状胶质细胞为RMS中的神经干细胞提供支架引导作用;作为调节细胞迁移的重要信号,Reelin可以通过其交互作用影响血管的发育,Reelin缺失导致嗅球处神经干细胞放射状迁移的转变障碍.

不同Reelin基因型小鼠海马结构组织学差异

目的 通过对不同Reelin基因型小鼠海马区组织学结构的比较分析,为Reelin在海马结构形成中的作用提供依据.方法 选择杂合子Reelin小鼠繁殖后代,在出生后10d进行基因型鉴定,设Reelin+/+、Reelin+/-和Reelin-/-3组,每组3只小鼠.鉴定后的小鼠通过4％多聚甲醛心脏灌注后剥离全脑,通过多聚甲醛固定、蔗糖脱水后冷冻切片,采用4'6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)为细胞核染色,用免疫荧光标记T-box brain gene 1(Tbr-1)、神经元核抗原(NeuN)和GFAP特异性表达的细胞,光学显微镜下观察、摄片后对结果进行分析.结果 从DAPI染色的细胞核及Tbr-1、NeuN和GFAP标记的细胞结构可以看出,Reelin+/+型小鼠和Reelin+/-型小鼠海马区都具有相似的结构,但将Reelin+/+和Reelin-/-型小鼠相比较,Reelin-/-型小鼠海马结构模糊,齿状回细胞向门区扩散,海马本部的细胞层结构紊乱,出现密集双细胞带,GFAP标记细胞减少.结论 Reelin缺失表达对小鼠大脑正常结构的形成具有明显的影响.在Reelin表达缺失后海马区齿状回细胞分布弥散,海马本部细胞层的分布紊乱,胶质细胞及纤维分布减少.

Reelin在小鼠穿通纤维及大脑连合纤维寻径中的作用

目的 通过对比野生型小鼠和Reeler小鼠穿通通路及连合纤维的发育,探讨Reelin在穿通通路及连合纤维寻径中的作用.方法 共取野生型小鼠(WT)和Reelin基因缺失小鼠(Reeler),从胚龄16 d(E16)至出生7d(P7)各年龄点,共123例.采用DiI/DiO离体示踪技术对不同年龄点的WT小鼠及Reeler小鼠的穿通通路及连合纤维进行顺行和逆行示踪.结果 1.穿通通路主要由内嗅皮质第Ⅱ层和第Ⅳ层神经元所发出,在E16时进入海马腔隙分子层,P1时穿通纤维出现在齿状回,P7时穿通纤维形成致密纤维束终止于齿状回外分子层2/3;Reeler小鼠的穿通通路出现明显的发育延迟并且投射纤维分布紊乱;2.穹隆连合纤维主要由海马CA3锥体细胞,门细胞及内嗅皮质Ⅱ～Ⅳ层神经元发出,在El6时形成;Reeler小鼠穹隆纤维与WT小鼠在发育中无明显区别;3.胼胝体连合纤维主要由新皮质Ⅱ～Ⅳ层神经元及纹状体神经元所投射,在E18时形成并向对侧皮质进行纤维投射,并且投射部位出现对称分布,P3时一侧胼胝体纤维到达对侧纹状体.Reeler小鼠胼胝体投射的皮质神经元向对侧新皮质投射出现延迟.结论 Reelin可能是穿通通路及连合纤维发育的导向因子.Reelin的缺失导致穿通通路发育延迟,并且连合纤维在皮质的细胞来源及穿通通路细胞来源紊乱.

Reeler小鼠皮质片层化及细胞极性化

目的 探讨Reelin在皮质片层化形成及细胞分化、极性化中的作用及相关机制.方法 取reeler小鼠和野生型(WT)小鼠受孕17 d(E17)至出生21d(P21)各年龄点脑部共96例.免疫荧光标记技术与5'-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法检测两组小鼠大脑发育中放射状胶质细胞、增殖的神经干细胞及极性蛋白的表达,并使用Nissl染色技术及DiI示踪技术分别对新皮质分子层发育、海马CA1区锥体细胞极性方位以及皮质锥体细胞极性程度进行统计.结果 Reeler小鼠大脑发育中齿状回内放射状胶质细胞数量减少,极性紊乱,BrdU阳性细胞散在分布,数量减少;由于极性细胞未得到适当的终止信号越过皮质Ⅱ层进入分子层,皮质片层化紊乱;大脑皮质及海马锥体细胞极性发生改变.结论 Reelin在神经细胞迁移、神经元增殖和皮质片层化的过程中发挥重要作用,尤其对锥体细胞极性起着至关重要的影响.

Reelin在中枢神经系统进化过程中的作用

目的 探讨Reelin在中枢神经系统进化过程中所起的作用及其调节机制.方法 取Reelin基因缺失小鼠(Reeler)和野生小鼠(WT),胚龄16d(E16)至出生30d(P30)各年龄点,共192例.利用免疫荧光技术与5'-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法,检测两组小鼠中大脑皮质、海马、脊髓发育过程中放射状胶质细胞、神经干细胞、增殖细胞及星形胶质细胞的表达,并使用Nissl染色技术,分别对脊髓、海马、大脑皮质的组织学特征进行观察.结果 脊髓发育过程中,神经细胞仅发生1次迁移,并形成套层,套层进而衍变成呈H型脊髓灰质.与野生型小鼠相比,同年龄Reelin基因缺失小鼠(Reeler小鼠)在形态结构、细胞迁移方面与野生型小鼠基本类似,但增殖的神经细胞数目明显减少.在第1次迁移的基础上,海马的形成还需经历第2次神经细胞迁移,终形成了双"C"字型结构的锥体细胞层和颗粒细胞层;与野生型小鼠相比,在形态上Reeler小鼠锥体细胞层明显扩散劈裂为两层,齿状回颗粒层细胞明显增殖并向门区迁移以致颗粒层与门区的界限消失,形成鼓槌状结构;同时,增殖的神经细胞数目减少,放射状胶质细胞排列紊乱.新皮质的形成也需经历两次迁移,但第2次神经细胞迁移所形成的皮质板按照由内向外的迁移方式继续发育为界限清晰的6层结构;与野生型小鼠相比,同年龄点Reeler小鼠新皮质片层化结构紊乱,增殖的神经细胞和放射状胶质细胞数目均有所减少,并且放射状胶质细胞排列紊乱.结论 脊髓、海马和新皮质分别代表了进化过程中的管状神经、古皮质和新皮质,Reelin可能是皮质进化的关键分子.Reelin参与了第2次迁移以及新皮质皮质板的继续分层,Reelin缺失可以引起上述皮质形态和结构的变化,尤其是古皮质和新皮质.

Reelin在阿尔茨海默病小鼠发病中的作用

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)小鼠病理改变、Reelin和Notchl的表达变化及DNA甲基化状态的改变,为深入了解阿尔茨海默病的发病机制提供理论依据.方法 以淀粉样蛋白前体(APP)/早老素-1(PS1)双转基因小鼠为AD模型、同窝野生型小鼠为对照组,两组小鼠共计184只,利用高尔基染色、透射电子显微镜、免疫荧光染色、免疫印迹等技术检测AD模型鼠病理改变、Reelin和Notchl的表达变化及DNA甲基化状态的改变.结果 AD小鼠在约6个月时开始出现淀粉样斑沉积、神经元纤维出现缠结等病理改变;AD小鼠发病后,星形胶质细胞和小胶质细胞在淀粉样斑周围聚集增多,随病情加重逐渐增加;Reelin在淀粉样斑周围聚积形成斑块,随病情加重逐渐增多;全长Notchl受体和其活性Notch细胞内片段(NICD)在AD鼠脑部表达减少;AD小鼠脑部甲基化状态减弱,淀粉样斑中有DNA片段,但甲基化状态消失,DNA甲基转移酶1(Dnmt1)和Dnmt3a在AD小鼠中表达减少.结论 AD小鼠脑内淀粉样斑沉积,促使胶质细胞聚集、Reelin聚积形成斑块、Notchl受体表达下降及甲基化状态减弱,进一步加剧AD神经功能紊乱.

细胞外基质糖蛋白Reelin在多发性骨髓瘤病人中的表达及其与预后的关系

目的:探讨细胞外基质糖蛋白Reelin (RELN)在多发性骨髓瘤中的表达及其与预后的相关性.方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离多发性骨髓瘤病人骨髓样品中的单个核细胞,利用流式细胞术分选CD138+细胞并通过实时定量PCR检测细胞中Reelin的表达水平,进一步将骨髓瘤病人按照RELN的表达分为高表达和低表达2组,并用统计学方法分析RELN的表达量与临床检验数据的相关性.结果:RELN的高表达与CD138+细胞的百分比、骨髓瘤病人的无进展生存期和总生存期显著相关,但与DS分期(P＞0.05)和ISS分期(P＞0.05)无显著相关.RELN高表达组有更高的血清M蛋白、尿酸和血清钙水平,较低的血红蛋白以及更多的异常基因(包括RB1缺失、1q21扩增、IgH重组、P53缺失、D13S319缺失).结论:Reelin可能在多发性骨髓瘤的发生发展中起重要作用.

Cajal-Retzius cells are reelin-secreting neurons in the marginal zone of the neocortex and hip-pocampus. The aim of this study was to investigate Cajal-Retzius cells in Alzheimer’s disease pathology. Results revealed that the number of Cajal-Retzius cells markedly reduced with age in both wild type and in mice over-expressing the Swedish double mutant form of amyloid precur-sor protein 695 (transgenic (Tg) 2576 mice). Numerous reelin-positive neurons were positive for activated caspase 3 in Tg2576 mice, suggesting that Cajal-Retzius neuronal loss occurred via apoptosis in this Alzheimer’s disease model. Compared with wild type, the number of Cajal-Ret-zius cells was significantly lower in Tg2576 mice. Western blot analysis confirmed that reelin levels were markedly lower in Tg2576 mice than in wild-type mice. The decline in Cajal-Retzius cells in Tg2576 mice was found to occur concomitantly with the onset of Alzheimer’s disease am-yloid pathology and related behavioral deifcits. Overall, these data indicated that Cajal-Retzius cell loss occurred with the onset and development of Alzheimer’s disease.

reelin相关基因研究进展

在脑发育过程中,新产生的神经元由内向外从脑室附近向脑膜迁移,即新形成的神经元要越过先形成的神经元后定位于皮层的外表面,由此形成了大脑皮层、小脑皮层和海马等特有的分层结构.当reelin、VLDLR、ApoE R2和Dab1基因突变时,细胞迁移及定位方向发生改变,各皮层的细胞构筑有明显缺陷,动物出现共济运动不良.信号传导研究发现reelin与受体VLDLR、ApoE R2和整合素结合后,促使Dab1磷酸化,启动信号传导系统,调节了细胞与细胞以及细胞与基质之间的黏附分子作用,与神经元的正确迁移以及大脑的正常发育有关.当此信号传导中任何一个元件发生错误便可能导致精神神经系统疾病.

不同reelin基因型小鼠大脑皮层分布的差异

目的:比较分析不同reelin基因型小鼠大脑皮层分布的差异,为reelin在小鼠大脑皮层形成过程中的作用研究提供依据;方法:选择reelin杂合子小鼠繁殖后代,在出生10d时进行基因型鉴定,设reelin+/+、reelin+/-和reelin-/-3组.每组取3只小鼠,采用DAPI染色细胞核,用荧光免疫组化标记FoxP-1、Tbr-1、NeuN和GFAP特异性表达的细胞,显微镜下观察拍照后进行结果分析;结果:从DAPI染色的细胞核及FoxP1、Tbr1、NeuN和GFAP标记的细胞显示,3种不同基因型小鼠大脑皮层结构彼此都存在一定差异,reelin+/-型与reelin+/+型小鼠相比大脑皮层结构相似,但也存在—定差异,如被FoxP-1和Tbr-1标记的神经元在SVZ区reelin+/-型比reelin+/+型更多;但reelin-/-型与reelin+/+型小鼠相比,reelin-/型小鼠大脑皮层无明显层的结构,FoxP-1、Tbr-1、NeuN和GF△P标记的细胞分布在整个皮层;结论:Reelin表达的下调或缺失对小鼠大脑皮层正常结构的形成存在影响,在reelin缺失表达后小鼠大脑皮层的形成明显发生异常,不具有典型的分层结构.

Reelin在精神疾病中的研究进展

Reelin蛋白在调节哺乳动物大脑神经元发育中起着重要作用,多项研究表明Reelin基因可能参与多种精神疾病的发生和发展,本文就目前Reelin蛋白及其编码基因在精神疾病中的研究进行综述.

恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达影响

目的 观察恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质组织形态学影响及对大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表达影响.方法 将受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常纽、模型组、补肾组,每组各10只.运用恐吓为主的复合应激法刺激模型组和补肾组孕鼠,正常组不予刺激.同时补肾组每日以中药左归丸浓缩剂2ml/100g体重灌胃,正常组及模型组则根据雌鼠体重予以等量生理盐水灌胃,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠.雌鼠分娩后,仔鼠出生当天每窝随机取1～2只仔鼠断头取全脑,固定,染色,切片,在光镜和电镜观察其组织结构和超微病理改变.另每窝随机取1～2只仔鼠断头取全脑匀浆做定量PCR,观察各组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达变化.结果 模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;电镜下可见到多数神经细胞出现细胞器结构异常,如线粒体肿胀,高尔基复合体肥大,部分伴有细胞核固缩.补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变.补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达均低于正常组(P＜0.01),模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达低于补肾组(P＜0.01).结论 恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过补肾填精法调节Reelin信号通路从而阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生.

Reelin对突触可塑性的调节作用

Reelin是一种细胞外基质糖蛋白,以往的研究认为其主要参与中枢神经系统的发育过程,在神经元的有序排列中起着重要的作用.近来的研究发现,在发育成熟的神经组织中reelin也有较高的表达,并且对突触的功能产生着重要的调节作用.谷氨酸盐受体表达变化及其亚单位重组是突触可塑性调节的重要形式,在学习记忆和疼痛信号的传递等重要的病理生理过程中起着重要作用.本文就reelin调节突触可塑性变化,尤其是调控谷氨酸盐受体的相关机制做一综述.

Reelin可增强海马神经元的多巴胺D1受体表达

目的 研究Reelin对小鼠海马神经元多巴胺D1受体的调控及其是否依赖Reelin受体(ApoER2/VLDLR)发挥调控作用.方法 原代分离培养新生C57BL/6J小鼠海马神经元,将培养5d后的神经元随机分为6组:空白对照组、CR-50组(CR-50),EDTA组(EDTA),Reelin组(Reelin),Reelin拮抗组(Reelin+CR50)和Reelin受体拮抗组(Reelin+EDTA).分别加入Reelin、CR-50、EDTA进行共培养,其后利用免疫荧光的方法观察Reelin受体ApoER2、VLDLR和多巴胺D1受体在海马神经元上的定位以及各组多巴胺D1受体的变化.结果 (1)Reelin受体ApoER2、VLDLR均与多巴胺D1受体在海马神经元上共定位;(2) Reelin拮抗组的多巴胺D1受体荧光强度(0.215±0.09)较Reelin组(0.663±0.15)减弱(P＜0.01);(3) Reelin受体拮抗组的多巴胺D1受体荧光强度(0.687±0.11)与Reelin组(0.666 ±0.15)无明显差异(P＞0.05).结论 Reelin可增强小鼠海马神经元上的多巴胺D1受体的表达,Reelin上调多巴胺D1受体的作用并不是依赖Reelin的经典受体ApoER2、VLDLR,其调控机制有待进一步研究.

精神分裂症患者外周血液中Reelin蛋白的表达

目的：探讨Reelin蛋白与精神分裂症的关系。方法将89例精神分裂症患者作为精神分裂症组，89例健康者作为对照组，采用Western blot检测其外周血 Reelin蛋白的表达。结果精神分裂症组患者外周血Reelin蛋白表达水平（0．66±0．27）显著低于对照组（1．01±0．23）（P＜0．05）。精神分裂症组男、女性患者Reelin蛋白表达水平分别为0．66±0．22、0．66±0．26，二者差异无统计学意义（t＝0．181，P＞0．05），对照组男、女性受检者Reelin蛋白表达水平分别为1．01±0．25、1．02±0．26，二者差异无统计学意义（ t＝0．201，P＞0．05）。结论 Reelin蛋白表达的降低与精神分裂症有关。