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酶解法从猪皮中提取胶原的工艺优选
目的:筛选蛋白酶酶解猪皮制备胶原的佳工艺;方法:以胶原得率为指标,采用单因素试验及正交试验对酶解条件进行优选;结果:胃蛋白酶用量为3%,酶解液pH 2.0,底物质量浓度1:28,温度0℃,酶解时间48 h时胶原的得率高;结论:胃蛋白酶酶解猪皮制备胶原的工艺较好.
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超声-酶法提取两面针中白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物的工艺优选
目的:优化超声-酶法提取两面针中白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物的工艺条件.方法:采用HPLC测定白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物提取率,流动相乙腈-水-磷酸-三乙胺(25:75:0.2:0.25),检测波长284 nm.通过单因素试验考察溶剂加酸和酶解预处理对有效成分提取率的影响,利用正交试验优化提取次数、超声功率和溶剂用量,通过动态过程优化超声时间.结果:佳工艺条件为复合酶预处理后,加40％乙醇(含盐酸0.5％)于250 W超声提取3次,每次的溶剂用量分别为6,3,3倍,提取时间依次为18,15,12 min.白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物提取率90.5％.结论:该工艺经济、高效、节能、省时,可为开发利用两面针中白屈菜红碱等成分提供实验基础.
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酶解等4种方法用于中药废弃物资源化研究初探(Ⅰ)——以脉络宁注射液生产中石斛药渣的多糖资源化研究为例
目的:通过4种不同提取方法用于中药生产中废弃物的多糖资源化的比较研究,优选出脉络宁注射液生产废弃物石斛药渣中提取多糖的方法,实现对中药资源的再循环利用.方法:采用酶解法、湿法超微粉碎法、超声法和加热回流法分别提取石斛药渣中石斛多糖,以苯酚-硫酸法测定其多糖提取率;通过单因素考察和正交试验对提取率高的提取方法进行工艺优选;考察石斛药渣多糖(DDP)对小鼠脾淋巴细胞的代谢转化和小鼠单核巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮(NO)能力的影响.结果:4种提取方法的多糖提取率分别为0.51％,8.79％,5.34％,3.44％,确定佳提取方法为酶解;其佳酶解条件:pH5.3,料液比1:55,温度50℃,酶活性4 000 U·g-1,提取时间300 min;与对照组比较,质量浓度在62.5 ～ 125 mg·L-1,DDP显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,DDP与脂多糖(LPS)协同促进作用显著(P＜0.05,P＜0.01),质量浓度为62.5 mg·L-1时,DDP与ConA协同促进作用显著(P＜0.05),质量浓度在62.5 ～ 500 mg·L-1,DDP对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7产生NO的促进作用极显著(P＜0.01).结论:酶解法提取石斛药渣中多糖的工艺简便、得率稳定,具免疫增强作用,具有推广应用价值.
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大黄素对大鼠结肠环行平滑肌细胞[Ca2+]i的影响
目的:观测大黄素对Wistar大鼠结肠环行平滑肌细胞胞质游离钙水平([Ca2+]i)的影响,并探讨机制.方法:酶解法分离结肠环行平滑肌细胞,分别采用图像分析系统和激光扫描共聚焦显微镜观测细胞长度和[Ca2+]i的变化.结果:大黄素可收缩大鼠结肠环行平滑肌细胞,也可浓度依赖性升高[Ca2+]i;大黄素作用后,[Ca2+]i迅速升高达到峰值([Ca2+]iPeak),而后下降至平台期([Ca2+]iSustain,仍高于静息值).Nifedipine对大黄素的钙动员作用没有明显影响,EGTA明显降低[Ca2+]iSustain.Heparine几乎完全抑制[Ca2+]iPeak,Ryanodine明显抑制[Ca2+]iPeak.结论:大黄素通过升高[Ca2+]i收缩结肠环行平滑肌细胞.大黄素升高[Ca2+]i的机制为:活化IP3受体释放细胞内钙,进一步以CICR方式促进RYR受体开放,共同作用升高[Ca2+]i,细胞外钙内流参与平台期[Ca2+]i的升高.
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模拟缺血再灌对乳兔窦房结细胞起搏电流的影响
目的：探讨双酶解法结合差速贴壁分离、培养乳兔窦房结细胞的有效性和可行性，观察模拟缺血再灌注对乳兔窦房结细胞形态及起搏电流的影响，阐明缺血再灌制备窦房结细胞损伤模型的电生理机制。
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紫草素提取工艺的研究
目的:研究紫草素的提取工艺.方法 用纤维素酶酶解紫草,丙酮液浸提,紫外分光光度法测定其吸收度.采用L9(34)正交设计法进行实验设计.结果 佳提取工艺:在pH值5,1‰的纤维素酶条件下,在35℃酶解紫草12h,用丙酮液提取3次.结论 工艺合理、可行,质量可控.
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超声波法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体及其活性评价
目的 采用超声波细胞仪破碎法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体,提高原生质体的制备量.方法采用蜗牛酶将短刺小克银汉霉细胞壁消化,采用超声波细胞破碎仪机械破碎加速其原生质体的释放,得到符合实验要求的原生质体.结果 通过正交实验优化得到制备短刺小克银汉霉原生质体的条件是:以0.6 mol/mL 氯化钾作为渗透压稳定剂,以10 mg/mL 蜗牛酶为酶解剂,选用菌龄为12 h 的菌丝,在37℃下酶解2 h,后使用超声波细胞破碎仪破碎菌丝体15 min.短刺小克银汉霉活性原生质体的释放量是7.5×107 个/mL,且其7 d 内的存活率维持在90% 以上.结论 超声波细胞仪破碎法和酶解法联合使用可有效提高短刺小克银汉霉原生质体的释放率和活性.
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薯蓣皂苷元的制备方法研究进展
目前薯蓣皂苷元的制备方法主要有酸水解法、微生物法、酶解法以及一些其他方法.传统的酸水解方法由于酸用量大,酸降解有机质副产物多,使污水排放量大,环境污染严重,限制了薯蓣皂苷元的产业化发展;而利用微生物、酶等生物水解法,具有反应条件温和、环境友好等特点,连同诱导子激发植物组织细胞培养等相关技术,受到研究人员的广泛关注,已成为薯蓣皂苷元产业化制备的新的发展方向.
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稀有人参皂苷糖苷化合成方法的研究进展
稀有人参皂苷是人参皂苷中一类重要的活性成分，该类化合物具有极强的抗肿瘤活性。其主要通过糖苷化的方法来实现，现有的糖苷化方法主要包括化学合成法、酶解法和微生物转化法。研究表明糖苷化能改变化合物的生物活性、稳定性、水溶性、以及与受体分子的相互识别和结合特性，另外还能降低或除去内源和外源有毒物质的毒性。综述了3类糖苷化方法，并对比总结各个方法的优劣之处，有利于选择出佳的合成稀有人参皂苷的糖苷化方法，以满足临床和科研等方面的需求。对人参皂苷的糖苷化新研究进展进行综述，并对糖苷化人参皂苷的发展趋势作了简要的讨论。
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7-氨基-3-乙烯基头孢烷酸的合成
目的研究7-氨基-3-乙烯基头孢烷酸的合成方法.方法以7-苯乙酰氨基-3-氯甲基头孢烷酸对甲氧苄酯为起始原料,采用化学法和酶解法制得目标化合物,总收率分别达到55.6%和58.5%.结果与结论该工艺原料易得,反应条件温和,收率有所提高,具有工业生产价值.
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人参皂苷生物转化的研究进展
目的 综述人参皂苷在体内及体外的生物转化研究概况.方法 查阅国内外相关文献,以其中的26篇文献为依据对人参皂苷在体内的转化途径及产物加以介绍,也对体外转化中使用的酶法和微生物法加以详细阐述.结果 人参皂苷在体内被代谢成为多种稀有人参皂苷,它们是人参在体内发挥药理活性作用的物质.体外生物转化人参皂苷的方法较多,并取得了许多有意义的成果.结论 为人参皂苷的代谢研究及稀有人参皂苷的体外生物转化制备提供了参考.
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酶解法提取女贞子中红景天苷的工艺研究
目的:研究酶解法提取女贞子中红景天苷的工艺条件,并且与其他提取方法进行比较.方法:通过单因素试验和正交实验对酶解提取工艺进行优化,并将酶解法与超声提取法、闪式提取法和回流提取法等方法进行比较.结果:优化后的酶解提取工艺中红景天苷提取率为0.90%.酶解法和超声提取法的提取率相近,而闪式提取法和回流提取法的提取率比较低.结论:与其他方法相比,酶解法提取红景天苷提取率高,操作简单,有利于企业大生产.
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广金钱草总黄酮成分不同提取方法的比较
目的 比较不同方法提取广金钱草中总黄酮成分的效果.方法 以总黄酮提取率及HPLC指纹图谱评价水提法、醇提法、酶解法和半仿生法提取广金钱草的效果,紫外分光光度法测定总黄酮含有量,HPLC指纹图谱共有模式评价各提取液中黄酮类共有成分的变化.结果 酶解法与醇提法的总黄酮得率都较高,其中前者对广金钱草的特征成分夏佛塔苷的提取效果更好,而水提法与半仿生法的提取效果较差,尤以后者为甚.结论 4种提取方法的效果依次为酶解法＞醇提法＞水提法＞半仿生法.
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大鼠Müller细胞的体外培养及免疫组织化学鉴定
Müller细胞是视网膜中一种非常重要的胶质细胞.成熟的M黮ler细胞发出很多分支包围、分隔神经元的胞体和突起[1].研究表明M黮ler细胞在外伤或光损伤后可表达多种生长因子,这些生长因子除对神经元具有保护作用外[2],对细胞外环境也具有调控作用[3].因此, M黮ler细胞在视网膜中的作用正日益受到人们的重视.而M黮ler细胞的培养方法主要有组织块贴壁培养法和酶解法.本实验应用酶解法成功分离了大鼠视网膜的M黮ler细胞,并进行体外培养、免疫组化鉴定,为进一步研究胶质细胞在中枢神经系统的作用提供实验基础.
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酶解高效液相色谱法测定硫酸软骨素的含量
目的 建立酶解高效液相色谱法测定硫酸软骨素含量的方法.方法 采用硫酸软骨素ABC酶制备样品,高效液相色谱法测定含量.以Ultimate XB-NH2柱(4.6 mm×25 cm,5μm)分离样品,醋酸钠缓冲液(pH 5.6)-乙腈(950:50)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长232 nm,进样量10 μL,柱温30℃.结果 在此色谱条件下,硫酸软骨素A、B、C三组分分离良好;硫酸软骨素浓度在300 ～3 000 μg/mL之间与峰面积呈良好线性关系;高、中、低三个浓度平均加样回收率为102.1％,100.4％和97.5％.结论 本法简便、准确、可靠,可用于硫酸软骨素的含量测定.
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超高效液相色谱-串联质谱法分析骨髓间充质干细胞衰老过程中的全基因组DNA甲基化水平变化
目的 使用超高效液相色谱-串联质谱测定骨髓间充质干细胞中全基因组DNA甲基化水平,观察其衰老过程中甲基化率的变化.方法 从骨髓间充质干细胞中提取DNA,使用酶解法将DNA分解成单个脱氧核苷,采用超高效液相色谱法分离,正离子电喷雾与多反应监测模式进行定量,分析5-甲基脱氧胞嘧啶核苷、脱氧鸟嘌呤核苷的相对含量,计算全基因组DNA 甲基化率.结果 对1 μg DNA样本进行1 h酶解反应,2 min内可分析出5.00×10-4水平以上的DNA甲基化率,日内及日间精密度分别在7.12×10-2和0.119以内.随着骨髓间充质干细胞传代扩增培养,干细胞不断衰老,其甲基化率逐渐降低,传至P4~P6代时,干细胞甲基化率低,随着传代的继续,其甲基化率逐渐上升.结论 此方法成功应用于检测研究骨髓间充质干细胞在衰老过程中全基因组DNA甲基化水平的变化,得到了衰老影响骨髓间充质干细胞DNA甲基化的初步数据.经考察,该方法样本前处理方法简便,可操作性强,定量方式快速准确,具有良好的灵敏度与重复性.
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海洋星虫3种提取方法的比较
海洋革囊星虫(Phasolosma esculentae)系星虫门星虫科革囊属动物,研究发现星虫可增强机体免疫功能,对ICR小鼠可提高其抗疲劳、耐缺氧、耐高温等适应外环境的能力.星虫还含有人体需要的多种氨基酸、微量元素和能够调节大脑功能的牛磺酸,具有滋阴降火、补肾益智的功效[1～3].我们在研究过程中发现,采用煎煮法处理动物原料制得的口服液澄明度较差,尤其是动物蛋白经长时间煎煮、滤过后会有部分损失.为大限度地利用星虫的有效成分,我们采用酸解法、酶解法、高压蒸制法提取,并与煎煮法比较,分析氨基酸、牛磺酸含量的变化,筛选佳的提取方法,为进一步开发海洋星虫提供实验基础.
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酶解法提取螺旋藻蛋白的研究
螺旋藻早发现于中非乍得湖,是一类低等植物,属于蓝藻门,颤藻科.是由多细胞组成的螺旋状盘曲的丝状体.螺旋藻具有易于培养,光能利用率比大田作物高几倍至几十倍,并有营养价值高及加工方便的特点,成为FAO向第三世界国家推荐的蛋白食品资源.
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酶解法提取稻秆多糖的工艺研究
目的 对稻杆中稻杆多糖的提取工艺进行研究.方法 采用纤维素酶解法,以稻杆多糖的含量为指标,通过正交实验对稻杆中稻杆多糖的提取条件进行了优化.结果 稻杆多糖的佳酶解条件为:酶解时间80min、酶解温度60℃、酶解浓度1％.结论 酶解法提取稻杆多糖的工艺稳定可行,提取率高.
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酶解法提取天麻多糖的研究
目的:研究复合酶提取天麻多糖的佳工艺.方法:采用单因素试验和正交试验设计进行优选,考察酶用量、pH值、反应时间和反应温度对天麻多糖的影响.结果:提取天麻多糖的佳工艺为温度50℃,加热时间60min,酶用量20 mg,pH值为4,天麻多糖得率为2.48％.结论:酶解法提取天麻多糖提取工艺简便,经济环保,含量明显优于传统工艺.
