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HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量
目的:建立用HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B4个水溶性成分的方法,并对6批丹参多酚酸进行测定.方法:采用Venusil XBP C18柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相0.02％磷酸水-0.02％磷酸80％乙腈水梯度洗脱；流速1 mL· min-1；检测波长280 nm;柱温30℃.结果:丹酚酸D线性回归方程为A=13 979C-1 739.2,R2=0.999 6,线性范围2.11 ～21.10 mg·L-1,平均回收率100.12％ (RSD 1.52％),迷迭香酸线性回归方程为A=42 007C-448.58R2=0.999 7,线性范围3.94 ～39.40 mg·L-1,平均回收率100.60％(RSD 1.83％)；紫草酸线性回归方程A=23 061C-6 319.2,R2=0.999 6,线性范围4.14～41.40 mg·L-1,平均回收率102.47％(RSD 1.53％)；丹酚酸B线性回归方程A=22 186C-21 435,R2=0.999 8,线性范围为53.90 ～ 539.00 mg·L-1,平均回收率104.53％(RSD 2.00％).结论:方法操作简单,且重复性好,可用于丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量测定.
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丹酚酸D通过抑制NF-κB的激活减轻LPS诱导的BV2细胞炎症反应
目的:研究丹酚酸D对脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎症反应的抑制作用及机制.方法:采用LPS诱导BV2细胞炎症反应,MTT法检测LPS与丹酚酸D对细胞存活率的影响,通过Griess法检测细胞上清中NO水平,并对其上游iNOS的表达进行检测.采用ELISA和qPCR法分别检测细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10的分泌及转录水平.应用Western Blot法测定NF-κB p65和IκBα的磷酸化水平,免疫荧光法检测BV2细胞中NF-κB p65的核转位.结果:1μg·mL-1的LPS和0.1～20 μmol·L-1丹酚酸D对BV2细胞无明显毒性作用.丹酚酸D能够显著抑制LPS刺激所致NO和iNOS的水平增加,降低TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10的转录水平,同时丹酚酸D能够显著抑制LPS诱导的NF-κB信号通路的激活,抑制NF-κB p65的转位入核.结论:丹酚酸D能够通过抑制NF-κB的激活减轻LPS诱导的BV2细胞炎症反应.
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高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸中6种水溶性成分的含量
目的:建立分别测定注射用丹参多酚酸中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D6种水溶性成分的HPLC方法,并对3批注射用丹参多酚酸进行含量测定.方法:色谱柱为AgilentZORBAX Eclipse Plus C18(250 mm ×4.6 mm,5μm);等度洗脱:流动相A为水-甲酸(100∶0.5),流动相B为乙腈-甲醇(100∶3),柱温为30℃;检测波长为288 nm(供迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的测定);梯度洗脱:流动相为A为水-甲酸(100∶0.2),流动相B为乙腈,柱温为25℃;检测波长为280 nm(供丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D的测定).结果:6种成分在实验浓度范围内,峰面积线性关系良好(r≥0.999 3).重复性、精密度、稳定性、加样回收率结果均符合《中华人民共和国药典》的规定.6种成分的总含量约占67.4％.结论:方法简便、准确,且重复性好,可用于注射用丹参多酚酸中6种成分的含量测定.
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丹参多酚酸提取物化学成分的分离与鉴定
目的 研究丹参多酚酸提取物的化学成分.方法 利用各种色谱技术进行分离纯化,利用光谱技术进行化合物结构解析.结果 从丹参多酚酸提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为(2R)-2-[(7-羟基-2-羰基-2,3-二氢苯并呋喃基)-(4→3)-2-(2E)-烯丙酰氧基]-3-(3,4-二羟基苯基)-丙酸(1)、丹酚酸D(2)、原儿茶醛(3)、迷迭香酸(4)、紫草酸(5)、丹酚酸B(6)和丹酚酸Y(7).结论 化合物1为新化合物,命名为丹酚酸D内酯.
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丹红注射液多元指纹图谱及多成分定量分析研究
目的 采用HPLC-UV-MS法建立丹红注射液多元指纹图谱,并对其中9种主要药效成分同时定量分析.方法 采用Atiantis T3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.05％甲酸水溶液-50％乙腈水溶液,梯度洗脱;质谱检测采用负离子选择离子(SIM)模式.结果 该多元指纹图谱较全面地体现了制剂中2味处方药材丹参与红花的化学信息,11批制剂指纹图谱相似度均在0.988以上.5-羟甲基糠醛、丹参素钠、原儿茶醛、香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、山柰酚-3-O-芸香糖苷9种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.999 0;9种化合物的平均加样回收率分别为(99.0±1.4)％、(102.0±1.7)％、(99.3±1.6)％、(97.6±1.6)％、(100.0±1.8)％、(97.9±1.6)％、(100.5±4.4)％、(100.6±2.0)％、(106.0±4.7)％(n=9);方法重复性的RSD均小于1.45％;测定的11批制剂中9种成分总量在2.61～3.06mg/mL.结论 该方法简单、准确、重复性好,多元指纹图谱结合定量测定能更全面地反映丹红注射液的质量,可用于制剂的质量控制.
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丹参醇沉过程中丹参素、丹酚酸B和丹酚酸D的回收率预测研究
目的 建立丹参醇沉过程丹参索、丹酚酸B和丹酚酸D同收率的预测模型.方法 采集15批丹参醇沉正常生产的操作参数,测定浓缩液和醇沉液中的5种有效成分,计算丹参素、丹酚酸B和丹酚酸D的回收率.采用将醇沉操作参数和浓缩液有效成分的量相结合的方法建立Stepwise-MLR回收率预测模型.分析模型中各变量的重要性.结果 丹参索、丹酚酸B和丹酚酸D的回收率预测模型相关系数均大于0.95.结论 建立的丹参醇沉过程中有效成分回收率预测模型具有较好的预测能力,有助于进一步了解醇沉过程,提高丹参醇沉过程质量控制水平.
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丹酚酸D对MPP+损伤SH-SY5Y细胞线粒体功能和生物合成的影响
目的 研究丹酚酸 D ( salvianolic acid D, SalD)对MPP+损伤SH-SY5Y细胞线粒体功能和生物合成的影响及机制.方法 采用 MPP+损伤 SH-SY5Y细胞模型,MTT法检测MPP+对细胞的毒性作用,MTT和LDH法考察SalD对SH-SY5Y细胞活力的影响,AO/EB法检测细胞凋亡.应用DCFH-DA和MitoSOX分别检测细胞 ROS及线粒体超氧化物水平,通过测定细胞内ATP水平以及线粒体膜电位变化,考察线粒体功能. qPCR检测MPP+损伤细胞后,PGC-1α及其下游调控基因NRF1和TFAM的mRNA水平,Western blot及免疫荧光测定细胞中PGC-1α、NRF1 和TFAM蛋白含量.结果 MPP+可损伤SH-SY5Y细胞,导致细胞存活率明显降低为51.34% . 0.1、1、5 μmol·L-1SalD 和 5 mmol·L-1 NAC能够减轻MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤及LDH释放,其细胞存活率分别增加到67.98% 、71.79% 、76.91% 、77.55% .并且,SalD能减少MPP+诱导的细胞内ROS及线粒体超氧化物的升高,降低线粒体膜电位,改善线粒体功能.同时,SalD能够明显抑制MPP+损伤导致的PGC-1α、NRF1、TFAM mRNA转录及表达降低.结论 SalD能够抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤,保护线粒体功能和线粒体生物合成.
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RP-HPLC法分离丹参滴注液中的丹酚酸D及测定4种酚酸类的含量
目的:建立丹参滴注液中丹酚酸D的分离及同时测定其中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸D和丹酚酸B含量的方法.方法:采用反相高效液相色谱法分离及含量测定.色谱柱为KromasilC18柱,流动相为乙腈-1％冰乙酸(梯度洗脱),流速为1.0 mL·min-1,进样量为10μL,柱温为30℃,检测波长为281 nm.结果:从制剂中分离并鉴定出丹酚酸D标准品.丹参素、原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸B的检测浓度分别在60.9～975.0、8.7～139.0、11.0～175.8、2.7～43.2 μg·mL-1范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为99.1％、100.2％、98.3％,100.4％、102.5％、101.1％,101.4％、97.0％、102.1％,100.6％、99.2％、101.3％,RSD分别为0.94％、0.97％、2.78％、1.07％.结论:该方法简单、快速、专属性好,可用于丹参滴注液的质量控制.
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注射用丹参多酚酸化学成分及质量控制研究进展
注射用丹参多酚酸是以丹参的水溶性有效部位丹参多酚酸为活性成分制成的冻干粉针剂,主要化学成分为丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸D及丹酚酸Y等水溶性酚酸类成分.临床上用于中风病中经络(轻中度脑梗死)恢复期瘀血阻络证,治疗轻中度脑梗死引起的半身不遂、口舌歪斜、舌强言蹇、偏身麻木的症状.就近10年注射用丹参多酚酸的化学成分、药材质量评价、产品质量控制方法、配伍合理性及药动学研究进展进行综述,为临床上更加安全合理使用该药提供依据和参考.
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RP-HPLC法同时测定甘西鼠尾草中12种成分的含量
目的:建立RP-HPLC法同时测定甘西鼠尾草药材及饮片中的丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA8种水溶性化合物和4种脂溶性化合物的含量.方法:采用Shim-pack XR-ODSⅡ(75mm×Z0mm,2.2 μm)色谱柱,流动相为乙腈--0.12％甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.2 mL·min-1,柱温30℃,检测波长270nm,进样量4μL.结果:在50min内,甘西鼠尾草中的12种成分可实现完全分离,丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA质量浓度分别在0.22～223 μg·mL-1 (r=0.999 8,n商)、0.05～4.91 μg·mL-1(r--0.9998,n=6)、0.18～18.25 μg· mL-1(r=1.000,n=6)、0.28～28.40 μg·mL-1(r=0.9999,n=6)、13.50～1 349.89 μg·mL-1(r=0.999 9,n=6)、0.23～23.22μg·mL-1(r=0.999 7,n=6)、9.93～993.16 μg·mL-1(r=0.999 8,n=6)、0.04～3.87 μg·mL-1(r=1.000,n--6)、0.81～81.33 μg·mL-1(r=0.9998,n=6)、0.87～86.85 μg· mL-1(r=0.9999,n=6)、0.67～67.47μg·mL-1(r=0.999 4,n=6)和1.01～101.12 μg· mL-1(r=0.999 8,n=6)与峰面积呈良好的线性关系,方法的平均回收率(n=6)分别为99.2％(RSD=1.7％)、99.7％(RSD=1.4％)、101.0％(RSD=2.0％)、99.7％(RSD=2.1％)、99.5％(RSD=1.9％)、101.2％(RSD=1.9％)、100.8％(RSD=1.7％)、100.7％(RSD=1.8％)、101.6％(RSD=1.5％)、100.7％(RSD=1.6％)、100.5％(RSD=1.4％) 和100.0％(RSD=1.7％).结论:该分析方法简便、准确,灵敏度高,专属性好,经方法学验证可同时测定甘西鼠尾草中的12种化学成分的含量,可用于甘西鼠尾草及其制剂的质量控制.
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高效液相色谱法同时测定丹参中10种水溶性和4种脂溶性成分的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定不同来源的丹参药材及饮片中丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹酚酸C、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA10种水溶性化合物和4种脂溶性化合物的含量.方法:采用Agilent ZorbaxSB-aq(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.03％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱(0 ～ 60 min,10％ A→68％A;60 ～ 70 min,68％ A→80％A),流速0.8 mL·min-1,柱温30℃,检测波长280 nm,进样量20μL.结果:在65 min内,丹参中的14种成分可实现完全分离,质量浓度在0.01 ～1 766.67 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数r不低于0.999 5;平均回收率(n=6)为97.4％～102.5％,RSD＜ 2.6％.不同的产地来源、叶子大小、根茎粗细、生长年限及栽培方式等因素对丹参中指标性成分含量差异都有很大的影响.结论:该分析方法专属性好,灵敏度高,定量准确,经方法学验证可用于同时测定丹参中的10种水溶性和4种脂溶性化合物的含量,为丹参药材及饮片的质量评价标准提供参考.
