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夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织微环境Rho-ROCK Ⅱ通路相关因子的影响
目的:观察夹脊电针对脊髓损伤大鼠神经细胞轴突再生相关抑制因子重组人Ras同源物基因家族成员A(RhoA)、Rho蛋白激酶Ⅱ(ROCK Ⅱ)、肌球蛋白轻链(MLC)蛋白的影响,探讨夹脊电针治疗急性脊髓损伤(ASCI)的作用机制.方法:雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、夹脊电针组、抑制剂组,每组12只.采用脊髓打击法制备大鼠ASCI模型.夹脊电针组于模型制备成功后3h进行夹脊电针治疗,每日1次,每次30 min,连续治疗14 d、28 d;抑制剂组于造模成功后立即给予腹腔注射盐酸法舒地尔(10 mg/kg),每日1次,连续治疗14 d、28 d.采用BBB评分法评估大鼠后肢运动功能变化,免疫组化法检测各组大鼠脊髓组织中RhoA、ROCK Ⅱ、MLC蛋白的表达情况.结果:BBB评分结果显示:与假手术组比较,造模后14 d、28d模型组大鼠运动功能评分显著降低(P＜0.05);与模型组比较,造模后14 d、28 d夹脊电针组、抑制剂组大鼠运动功能评分均显著升高(P＜0.05);夹脊电针组、抑制剂组造模后28 d大鼠肢体运动功能评分较造模后14 d显著升高(P＜0.05).免疫组化结果显示:与假手术组比较,造模后14d、28 d模型组大鼠脊髓组织RhoA、ROCK Ⅱ、MLC阳性细胞数增加(P＜0.05);与模型组相比,造模后14 d、28 d夹脊电针组、抑制剂组大鼠脊髓组织RhoA、ROCK Ⅱ、MLC阳性细胞数显著降低(P＜0.05);夹脊电针组、抑制剂组造模后28 d大鼠脊髓组织RhoA、ROCK Ⅱ、MLC阳性细胞数较造模后14 d显著降低(P＜0.05).结论:夹脊电针能够显著改善ASCI大鼠肢体运动功能,其作用机制可能与抑制大鼠脊髓损伤组织微环境Rho-ROCK Ⅱ信号通路RhoA、ROCK Ⅱ、MLC抑制因子表达有关.
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RhoA-ROK通路在平滑肌收缩中的作用
近年来有关平滑肌收缩的钙敏化机制研究进展迅速,一系列的证据显示这种Ca2+非依赖的调节主要是由RhoA-ROK通路介导,它主要通过磷酸化抑制肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的活性来增加肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平,从而增强平滑肌的收缩力.越来越多的研究显示RhoA-ROK通路参与了平滑肌细胞和非肌细胞的多种功能,在许多疾病如高血压、动脉粥样硬化、冠状动脉痉挛等的发生和发展中起着非常重要的作用.
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肾上腺髓质素对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜通透性的影响
目的:探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)改善溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型肠黏膜通透性的作用机制.方法:清洁级♂SD大鼠24只(180-200 g),随机分成3组:AM组、模型组和正常组,每组8只.模型组及AM组均给予TNBS灌肠,以建立UC大鼠模型.正常组给予生理盐水灌肠.造模后注意观察大鼠毛发、活动及大便情况的变化,记录每组大鼠体质量.48h后AM组给予1 mL AM灌肠,而模型组、正常组则给予1 mL生理盐水灌肠,连续灌肠7d后,腹腔注射10％水合氯醛麻醉大鼠,留取大鼠血液,离心后分离上层血清于无菌EP管中冻存,留取大鼠结肠组织,部分立即用4％多聚甲醛固定,余下组织冻存于-80℃.HE染色评估大鼠结肠病理变化,Western blot测定肠道黏膜RhoA、Rho激酶1(Rho associated kinase 1,ROCK1)、肌球蛋白轻链激酶(myosin lightchain kinase,MLCK)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB) p65及紧密连接(tight junction,TJ)蛋白Occludin的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α),干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)表达的水平.结果:TNBS造模后的大鼠出现腹泻及黏液脓血便,体质量明显减轻,肠管扩张,肠壁变薄,部分结肠黏膜可见散在溃疡,与正常组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IFN-γ的表达明显升高(P＜0.05),结肠组织中RhoA、ROCK1、MLCK及NF-κB p65蛋白的表达显著增高(P＜0.05),而TJ蛋白Occludin的表达较正常组明显降低(P＜0.05),与模型组比较,给予AM治疗后的大鼠TNF-α、IFN-γ表达降低(P＜0.05),结肠组织中RhoA、ROCK1、MLCK及NF-κB p65蛋白的表达显著下降(P＜0.05),而TJ蛋白Occludin的表达明显升高(P＜0.05)有统计学意义.结论:AM可能通过调节RhoA介导的NF-κBp65/MLCK信号通路,改善UC肠道黏膜屏障功能.
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功能性消化不良平滑肌舒缩障碍中G蛋白偶联信号转导机制的研究进展
功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是一种异质性胃肠动力紊乱性疾病,胃肠道平滑肌舒缩障碍与之关系密切.G蛋白偶联的信号转导机制主要通过磷脂酰肌醇信号转导通路、环核苷酸信号转导通路、小G蛋白信号转导通路参与调控平滑肌舒缩.本文就G蛋白偶联的信号转导系统不同的组成、信号通路及其与FD胃肠动力紊乱平滑肌舒缩障碍的相关性作一综述,以期从微观角度调整胃肠动力异常为治疗FD提供新的思考.
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心肌肌球特定基因-肌球蛋白轻链基因可在人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞表达
目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(hUCMSC)向心肌样细胞分化中的表达.方法:酶消化法原代分离培养hUCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析其细胞表面标记物及检测体外向成骨细胞、成脂细胞、内皮细胞诱导分化潜能;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导hUCMSC定向分化成心肌样细胞;诱导细胞并同时转染pMLC2v-GFP,于d3,d7,d10,d14,d17及d21时间点在荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测其阳性率;用生物发光检测仪检测相同时间点的萤光素酶(pMLC2v-Luc)报告基因慢病毒载体转染分化细胞发光特征;在激光共聚焦显微镜下观察pMLC2v-GFP及红色荧光蛋白(RFP)共转染诱导21d后分化细胞蛋白的表达分布状况;与鼠心肌细胞作为对照,脉冲电流激发细胞收缩和细胞内及细胞间的钙离子流,以检测诱导分化细胞“兴奋-收缩”偶联功能;Western blot法检测诱导分化细胞pMLC2v蛋白的表达.结果:原代培养的P3 hUCMSC,经FCM检测CD90、CD105及CD73阳性率均为99％以上为高表达;获得的细胞分别经体外诱导能够向成骨细胞、成脂细胞、成内皮细胞分化;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导hUCMSC同时并转染pMLC2v GFP,在荧光显微镜下观察并用流式仪检测GFP表达阳性细胞数随诱导时间的延长而增加(P＜0.05);生物发光检测仪检测诱导细胞pMLC2v-Luc表达同样呈阳性递增;pMLC2v GFP及RFPC共转染诱导21d后分化的细胞,细胞浆内形成较清晰的与细胞长轴平行的肌束样结构;诱导后的细胞用共聚焦显微镜检测无细胞内及细胞间的钙离子流动;随诱导时间的延长pMLC2v蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论:在hUCMSC体外诱导形成心肌样细胞过程中,pMLC2v基因随诱导时间的延长而表达增加,为监测干细胞的移植在心肌疾病治疗中提供了实验依据.
关键词： 人脐带胶样组织间充质干细胞 心肌样细胞 肌球蛋白轻链 荧光素酶 绿色荧光蛋白 -
阿托伐他汀抑制内皮细胞Rho/Rho激酶信号通路改善细胞骨架
目的 探讨阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) Rho/Rho激酶信号通路中Rho激酶和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)表达的影响.方法 体外培养HUVEC,分4组:对照组；AngⅡ组；阻断剂组(Rho激酶阻断剂Y-27632);阿托代他汀组.硝酸还原酶法检测NO含量;免疫细胞化学法观察p-MLC蛋白定位表达,Western blot法测定Rho激酶和p-MLC蛋白定量表达.结果 与对照组比较,AngⅡ组NO含量显著减少(P＜0.01)；阻断剂组和阿托伐他汀组NO含量较AngⅡ组显著升高(P＜0.01).AngⅡ组细胞质内出现大量棕色颗粒积聚、浓染；阻断剂组和阿托伐他汀组细胞质中仅有少量棕色淡染颗.与AngⅡ组比较,阻断剂组和阿托伐他汀组Rho激酶及p-MLC蛋白表达显著降低(P＜0.01),但仍高于对照组(P＜0.01);2组间蛋白表达仍有明显差异(P＜0.01).结论 阿托伐他汀对AngⅡ诱导的HUVEC保护作用,是通过抑制Rho/Rho激酶信号通路中Rho激酶及其下游的p-MLC蛋白表达,减弱AngⅡ对内皮细胞骨架的损伤.
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R-型钙通道阻滞剂对大鼠蛛网膜下腔出血后脑动脉钙通道相关蛋白的影响
目的 研究蛛网膜下腔出血(SAH)后脑动脉R-型钙通道的表达情况,并探讨R-型钙通道阻滞剂--SNX-482对脑动脉收缩相关蛋白的作用.方法 20只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、SAH组、SAH+尼莫地平组、SAH+SNX-482组,每组5只.采用大鼠鞍上池注射自体动脉血法制备SAH模型,其后第1、2日每天向假手术组和SAH组的脑池内注射25μl等渗盐水,向SAH+尼莫地平组和SAH+SNX-482组注射25 μl尼莫地平或SNX-482.第3日取脑动脉标本,后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹半定量检测R-型钙通道蛋白和调宁蛋白(calponin)的表达水平,经尿素甘油-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹检测肌球蛋白轻链2(MLC2)磷酸化百分比.结果 ①假手术组、SAH组、SAH+尼莫地平组和SAH+SNX-482组R-型钙通道蛋白相对量分别为0.38±0.08、0.86±0.07、0.66±0.11和0.72±0.09,假手术组的蛋白相对量均低于其他三组(P<0.05);②上述各组calponin相对量分别为2.32±0.14、0.54±0.17、0.75±0.19和1.42±0.15,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05);③上述各组MLC2磷酸化百分比依次为12.2±2.8、41.0±3.2、36.1±2.8和25.3±1.9,除SAH和SAH+尼莫地平两组外,其余各组间差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 R-型钙通道阻滞剂可抑制SAH大鼠脑动脉的calponin降解和MLC2磷酸化的程度,其作用强于L-型钙通道阻滞剂尼莫地平.
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99mTc标记抗心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体在体亲梗死心肌放射免疫显像研究
为探讨99mTc标记抗心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体(AMLCA)在体亲梗死心肌放射免疫显像的可行性,5只狗静脉注射99mTc-AMLCA后2、4、8、24h,对血液标本和各脏器进行放射性测量和γ像机显像.对2例心肌梗死狗进行在体99mTc-AMLCA心血池显像和99mTc-MIBI心肌灌注显像,并对其离体心脏进行γ显像和双感兴趣区双核素放射性测量.结果表明,注射后2、4、8、24h,血液99mTcAMLCA放射活性分别是(51.5±5.2)%、(27.3±3.1)%、(12.3±1.8)%和(5.6±0.6)%,心脏放射性分别是(11.2±1.2)%、(6.7±1.5)%、(5.5±0.9)%和(2.8±0.3)%,注射2h在体心脏γ显像清晰,以后逐渐衰减,注射24h心脏不再显像.心梗狗在体99mTc-AML-CA心血池显像与99mTc-MIBI心肌灌注显像比较,前者放射浓聚区与后者放射缺损区吻合,其离体心脏γ显像放射性浓聚区TTC染色证实是梗死心肌,双感兴趣区双核素放射性测量表明,梗死心肌摄取99mTc-AMLCA具有特异性.本研究提示,99mTc-AMLCA在血中清除迅速且能被梗死心肌特异性摄取,在体99mTc-AMLCA心血池显像能显示梗死心肌,99mTc-AMLCA在体亲梗死心肌显像可行.
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Rho连接激酶在模拟失重大鼠股动脉收缩中的作用
目的通过测量Rho连接激酶(Rho associated kinase, ROK)蛋白的含量来研究其在模拟失重大鼠股动脉收缩中可能发挥的作用. 方法采用14 d尾部悬吊大鼠(-30°)模拟失重效应,Wistar大鼠被随机分成两组:悬吊组(TS14d)和对照组(CON),利用离体血管环灌流技术和Western Blotting技术检测股动脉平滑肌中ROK蛋白的表达和肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化水平的变化. 结果与对照组相比,14 d尾部悬吊使大鼠股动脉中ROCK-Ⅱ蛋白的表达显著增高,ROCK-Ⅰ的表达量差异没有显著性;加入苯肾上腺素 (PE)后,对照组股动脉MLC磷酸化水平显著高于悬吊组. 结论 14 d尾部悬吊后大鼠股动脉中RhoA-ROK通路的活性增强,这可能在一定程度上对平滑肌收缩力减弱起到了代偿作用.
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脾虚1号方对功能性消化不良脾虚证大鼠胃体组织MLC蛋白与基因表达的影响
目的 探讨功能性消化不良(FD)脾虚证大鼠胃体组织肌球蛋白轻链(MLC)蛋白与mRNA表达及脾虚1号方的干预作用.方法 60只7d龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、FD脾虚证模型组(n=50).正常组给予2％蔗糖溶液灌胃,FD脾虚证模型组给予0.1％蔗糖碘乙酰胺溶液灌胃,0.2 mL/(只·d),连续6d.FD脾虚证模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14 d.造模结束后随机分为模型组、多潘立酮组、脾虚1号方低、中、高剂量组,各10只,连同正常组,分别给予蒸馏水10 mL/(kg·d)、多潘立酮3.125 mg/(kg·d)、脾虚1号方1.275、2.550、5.100g/(kg· d),灌胃14 d.采用免疫组化、蛋白质印迹(Western blot)和RT-PCR方法检测胃体组织MLC蛋白及mRNA表达量.结果 与正常组相比,免疫组化检测模型组大鼠胃体肌层MLC蛋白定位表达降低;Western blot检测模型组胃体组织MLC蛋白表达量降低;RT-PCR检测模型组大鼠胃体组织MLC mRNA表达量降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组相比,免疫组化检测脾虚1号方低、中、高剂量组大鼠胃体肌层MLC蛋白定位表达增加,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);Western blot检测脾虚1号方中、高剂量组大鼠胃体MLC蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P ＜0.01);RT-PCR检测脾虚1号方高剂量组MLC mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 FD脾虚证模型大鼠存在胃体组织MLC蛋白及基因表达的降低,而脾虚1号方能够上调MLC蛋白及基因的表达.
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丹红注射液对共培养体系中平滑肌细胞舒张的影响及其作用机制研究
目的 研究丹红注射液在共培养体系中通过人脐静脉内皮细胞(Ea.Hy926)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5)舒张的影响及其作用机制.方法 以A7r5、Ea.Hy926为细胞模型,用Western blotting法检测丹红注射液对单独培养的A7r5细胞中肌球蛋白轻链(MLC)和磷酸化MLC (P-MLC)蛋白表达的影响;检测其对A7r5细胞内钙离子浓度的影响;用RT-PCR法检测A7r5细胞钙调蛋白(CaM) mRNA表达的变化,MTT法观察其对重组人血小板源性生长因子-BB (PDGF-BB)诱导的A7r5细胞增殖的影响;后用Transwell小室建立共培养体系,分别用Western blotting法和ELISA法检测丹红注射液对共培养体系中A7r5细胞MLC、P-MLC的蛋白表达以及环磷酸腺苷(cAMP)分泌的影响.结果 丹红注射液(10 μL/mL)能降低单独培养的A7r5细胞中P-MLC/MLC的值(P＜0.05)和CaM mRNA表达(P＜0.01),对细胞内钙离子浓度和MLC蛋白表达无显著影响,也可降低共培养体系中A7r5细胞P-MLC/MLC值(P＜0.05),并增加cAMP的分泌(P＜0.01),此外还能抑制PDGF-BB诱导的A7r5细胞增殖(P＜0.01).结论 丹红注射液能通过降低P-MLC/MLC值和CaM的mRNA表达直接使平滑肌舒张,也能通过促进内皮细胞释放舒血管因子间接增加共培养体系中平滑肌细胞cAMP的分泌,使平滑肌细胞舒张.
关键词： 丹红注射液 肌球蛋白轻链 共培养体系 人脐静脉内皮细胞 Transwell小室 -
肌球蛋白轻链在血管平滑肌舒缩中的机制研究进展
血管舒缩在人体局部生理活动中有重要的意义,对于局部血压的形成和控制起着重要的作用,并可影响组织的血供.肌球蛋白是血管平滑肌(vascular smooth muscle,VSM)的一种收缩蛋白,其轻链的磷酸化与去磷酸化是血管舒缩调控的终末路径,也是血管舒缩调节机制中信号转导的重要介质.
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MLC及MLCK在子宫肌瘤组织中的表达及意义
目的:探讨MLC及MLCK在子宫肌瘤发病机制中的作用.方法:采用免疫组化、RT-PCR及Western blot方法检测30例子宫肌瘤及其附近正常平滑肌组织中MLC、MLCK及p-MLCK的表达.结果:免疫组化检测MLC、MLCK及p-MLCK在子宫肌瘤组织中阳性表达水平均高于平滑肌组织,差异有统计学意义(P＜0.01).RT-PCR显示MLC及MLCK mRNA在子宫肌瘤组织中表达上调,差异有统计学意义(P＜0.01).经Western blot检测MLC、MLCK及p-MLCK蛋白含量在子宫肌瘤组织中显著高于平滑肌组织,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MLC及MLCK在平滑肌及肌瘤组织中表达异常,提示二者可能参与了子宫肌瘤的发生与发展,推测其可能与细胞收缩异常相关.
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抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究
目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡.方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例.结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡.结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡.
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基因重组钙调蛋白提取纯化的新方法
目的建立一个简捷高效的纯化基因重组钙调蛋白(Recombinant-calmodulin,CaM)的新方法.方法培养CaM基因重组大肠杆菌,并用IPFG诱导CaM表达,将菌体冻融、超声破碎,再经三氯醋酸、硫酸铵沉淀及超速离心,获得CaM;经SDS-PAGE检测CaM的纯度与相对分子质量,用甘油电泳和Scoin Image密度扫描软件检测CaM激活肌球蛋白轻链激酶(MLCK),从而引起肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化的活性.结果SDS-PAGE显示,重组大肠杆菌表达了大量CaM,且所提取CaM的相对分子质量及纯度均与CaM标准品一致;甘油电泳结果显示,CaM0.1 μg/ml即可激活MLCK,使MLC20部分磷酸化,至3μg/ml时使MLC20双重磷酸化,其所致磷酸化的程度与等剂量的CaM标准品基本相同.ScoinImage密度扫描结果显示,CaM激活MLCK引起MLC20磷酸化的百分率与等剂量CaM标准品差异无显著意义(P＞0.01).结论已建立了简捷高效纯化CaM的新方法.
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环氧橙皮油素对平滑肌肌球蛋白功能及肌球蛋白轻链激酶表达量的影响
目的 研究环氧橙皮油素对平滑肌肌球蛋白功能及肌球蛋白轻链激酶表达量的影响.方法 考察在钙离子存在的条件下,环氧橙皮油素对20 kDa肌球蛋白轻链的钙离子依赖性磷酸化反应的影响；用孔雀绿法测定环氧橙皮油素对肌球蛋白Mg2+ -ATPase活性的影响；采用蛋白免疫印迹方法考察环氧橙皮油素对平滑肌细胞中肌球蛋白轻链激酶的表达量影响.结果 环氧橙皮油素在20 ～ 320μmol/L范围内剂量依赖性抑制肌球蛋白轻链磷酸化,在5～20 min范围内时间依赖性抑制肌球蛋白轻链磷酸化；在5 ～ 20 min时间范围内,随着环氧橙皮油素用药浓度增加,呈现剂量依赖性抑制肌球蛋白Mg2+ -ATPase活性；在40～ 320 μmol/L范围内剂量依赖性抑制肌球蛋白轻链激酶表达,在0～96 h范围内时间依赖性抑制肌球蛋白轻链激酶表达.结论 环氧橙皮油素可通过抑制平滑肌肌球蛋白功能及肌球蛋白轻链激酶表达量,抑制胃肠道平滑肌的收缩.
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肌球蛋白轻链磷酸化在腹泻型IBS大鼠肠黏膜屏障功能障碍中的作用
背景：肌球蛋白轻链（ MLC）是调控细胞间紧密连接和肠道通透性的启动因子，磷酸化MLC（ pMLC）可引起紧密连接相关蛋白重新分布，破坏紧密连接结构和完整性，终引起肠黏膜屏障功能障碍。目的：探讨MLC磷酸化在腹泻型IBS（ IBS-D）大鼠肠黏膜屏障功能障碍中的作用。方法：将8只Sprague-Dawley孕鼠随机分为模型组和对照组，采用母婴分离法构建IBS-D大鼠模型。记录大鼠造模成功后1 h内粪便性状和颗粒数，采用腹壁回撤反射（ AWR）评分评估大鼠内脏敏感性，免疫荧光法观察结肠组织纤维状肌动蛋白（ F-actin）、细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、claudin-1的分布，蛋白质印迹法检测肠黏膜MLC、pMLC、F-actin、ZO-1、claudin-1蛋白的表达，透射电镜观察细胞间紧密连接。结果：与对照组相比，模型组内脏敏感性显著升高；免疫荧光法显示claudin-1荧光强度减弱，结构紊乱，重新分布，F-actin和ZO-1结构模糊；蛋白质印迹结果显示pMLC/MLC比值和pMLC表达明显升高，claudin-1表达明显降低，MLC、F-actin和ZO-1表达无明显差异；透射电镜显示细胞紧密连接破坏，细胞间隙扩大。结论：MLC磷酸化水平升高介导细胞骨架蛋白F-actin重组，引起细胞紧密连接蛋白结构和功能的改变，细胞间隙增加，导致肠黏膜屏障功能障碍，在IBS-D的发病中发挥重要作用。
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糖基化终末产物和磷酸化肌球蛋白轻链在糖尿病结肠动力障碍中的作用
背景:结肠动力障碍是糖尿病(DM)的常见并发症.糖基化终末产物(AGEs)在DM患者体内显著升高,然而其在DM结肠动力障碍中的作用尚未完全明确.目的:探讨AGEs和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)在DM结肠动力障碍中的作用.方法:将Sprague-Dawley大鼠随机分为DM组和正常对照组,以链脲菌素腹腔注射建立DM模型,8周后处死所有大鼠,取远端结肠组织.检测离体结肠肌条肌张力;以免疫组化染色检测结肠组织p-MLC表达;以蛋白质印迹法检测结肠组织p-MLC、总肌球蛋白轻链(t-MLC)表达.分离培养结肠平滑肌细胞(SMCs),以不同浓度、不同作用时间AGEs作用于SMCs,以蛋白质印迹法检测SMCs的p-MLC、t-MLC表达.结果:与正常对照组相比,DM组大鼠结肠平滑肌张力显著减弱[(0.89±0.09)g对(1.98±0.12)g,P＜0.05],DM组大鼠结肠组织p-MLC/t-MLC/3-actin水平显著降低(0.98 ±0.10对1.61 ±0.12,P＜0.05).SMCs经不同浓度、不同作用时间AGEs干预后,p-MLC/t-MLC/β-actin水平显著降低.结论:DM结肠动力障碍可能由AGEs抑制SMCs中MLC磷酸化所致.
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风湿性心脏病患者心肌肌球蛋白轻链的变化
目的:研究风湿性心脏病(RHD)心衰时心室肌中肌球蛋白轻链(VMLC)的变化与心脏重塑的关系.方法:采用Western blotting技术对13例RHD心衰患者及7例意外死亡者VMLC-1,VMLC-2含量进行定量分析.结果:RHD组VMLC-1,VMLC-2含量均显著低于正常对照组,以VMLC-2含量下降明显,VMLC-1/VMLC-2比值在1∶0.95～1∶0.61.结论:RHD心衰发展过程中涉及了VMLC-1,VMLC-2蛋白水平的改变,这种改变可能对心功能的进行性恶化有直接影响.
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丁苯酞对局灶性脑缺血大鼠脑水肿和梗死周围组织磷酸化肌球蛋白轻链表达的影响
目的 探讨丁苯酞对局灶性脑缺血大鼠脑水肿和梗死周围组织磷酸化肌球蛋白轻链表达的影响.方法 成年雄性Sprague-Daw ley大鼠212只,按随机数字表法分为假手术组(n=12)、脑缺血组(n=l00)和丁苯酞组(n=100)(40 mg/kg,1次/d,灌胃);脑缺血组和丁苯酞组再分为6h、12 h、ld、3d和7d组(每个时间点各20只).光化学法建立大鼠局灶性脑缺血模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测脑梗死体积(n=5),干湿重法检测脑组织含水量(n=5),免疫组化(n=5)和蛋白质印迹法(n=5)检测梗死周围皮质p-MLC蛋白表达.结果 TTC染色显示,假手术组未见梗死灶,丁苯酞组各时间点梗死体积均显著性小于脑缺血组相同时间点(P均＜0.05).干湿重法显示,缺血组和丁苯酞组脑组织含水量均显著性高于假手术组(P均＜0.05),但丁苯酞组各时间点脑组织含水量均显著性低于脑缺血组相同时间点(P均＜0.05).免疫组化和蛋白质印迹均显示,缺血组和丁苯酞组脑组织梗死周围皮质p-MLC表达均较假手术组显著性上调(P均＜0.05),但丁苯酞组各时间点脑组织梗死周围皮质p-MLC表达均显著性低于缺血组相同时间点(P均＜0.05).结论 丁苯酞可通过减轻脑缺血引起的p-MLC表达上调而减轻脑水肿,进而缩小梗死体积,从而发挥神经保护作用.
